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兔外周血單個(gè)核細(xì)胞分離液試劑盒說(shuō)明書(shū)

時(shí)間:2016-1-19閱讀:1446
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兔外周血單個(gè)核細(xì)胞分離液試劑盒說(shuō)明書(shū)

 

【產(chǎn)品規(guī)格】

 

200ml/Kit

 

【產(chǎn)品組成】

 

為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:

 

 

名稱

產(chǎn)品編號(hào)

規(guī)格

 

 

 

 

A

XXXX 動(dòng)物外周血單個(gè)核細(xì)胞分離液

 

200ml

 

 

 

 

B

樣本稀釋液(贈(zèng)品)

2010C1119

200ml

 

 

 

 

C

清洗液(贈(zèng)品)

2010X1118

200ml

 

 

 

 

D

說(shuō)明書(shū)

 

1

 

 

 

 

【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】

 

A 適用儀器

 

zui大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)

 

B 耗材

 

 

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品貨號(hào)

產(chǎn)地

 

 

 

 

 

15ml 離心管散裝

339650

美國(guó) NUNC

 

 

 

 

 

15ml 離心管架裝

339651

美國(guó) NUNC

 

 

 

 

 

50ml 離心管散裝

339652

美國(guó) NUNC

 

 

 

 

 

50ml 離心管架裝

339653

美國(guó) NUNC

 

 

 

 

 

無(wú)菌膠頭滴管或塑料滴管

 

 

 

 

 

 

【檢驗(yàn)方法】

 

 

 

全過(guò)程樣本,、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2的條件下進(jìn)行,。

 

首先取抗凝血按體積比 1:1 的比例加入樣本稀釋液(產(chǎn)品編號(hào):2010C1119)混勻,,根

 

據(jù)稀釋后的樣本量大小,分以下兩種情況:

 

情況 A:稀釋后的血液樣本量小于 5ml 時(shí),,實(shí)驗(yàn)方法如下:

 

  1. 取一支 15ml 離心管,,先加入與稀釋后樣本等量的分離液(注:分離液zui少不得少于 3ml)。

 

  1. 用吸管小心吸取稀釋后的血液樣本加于分離液液面上,,400-500g ,,離心 20-30min(注: 根據(jù)血液樣本量確定離心條件,血液樣本量越多,,離心力越大,,離心時(shí)間越長(zhǎng),具體離 心條件需客戶自行摸索,,以達(dá)到分離效果),。

 

  1. 離心后,此時(shí)離心管中由上至下分為四層,。*層為血漿層,。第二層為環(huán)狀乳白色單個(gè) 核細(xì)胞層。第三層為透明分離液層,。第四層為紅細(xì)胞層,。

 

  1. 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中,在離心管中加 入 10ml 清洗液(產(chǎn)品編號(hào):2010X1118),,混勻細(xì)胞。

 

  1. 250g,,離心 10min,。

 

  1. 棄上清。

 

  1. 用吸管以 5ml 清洗液(產(chǎn)品編號(hào):2010X1118)重懸所得細(xì)胞,。

 

  1. 250g,,離心 10min

 

  1. 重復(fù) 6,、7,、8,棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞,。

 

情況 B:稀釋后的血液樣本量大于等于 5ml 時(shí),,實(shí)驗(yàn)方法如下:

 

  1. 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管,先加入與稀釋后樣本等量的分離液,。

 

  1. 將經(jīng)稀釋后的血液樣本小心加于分離液之液面上,,500-650g(zui大離心力可至 1000g), 離心 20-30min,。(注:根據(jù)血液樣本量確定離心條件,,血液量越多,,離心力越大,離心 時(shí)間越長(zhǎng),,具體離心條件需客戶自行摸索,,以達(dá)到分離效果。加入血液樣本后,,樣 本及分離液總體積不得超過(guò)離心管總體積的三分之二),。

 

  1. 剩余步驟同情況 A”中步驟 3 至步驟 9

 

【注意事項(xiàng)】

 

  1. 全過(guò)程樣本,、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2的條件下進(jìn)行,。為獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,zui 好在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),,血液存放時(shí)間越長(zhǎng),,細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過(guò) 6h 后 分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的,。

 

  1. 本實(shí)驗(yàn)不要使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,,應(yīng)使用無(wú)靜電、低靜電離 心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品,,因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁,、堿處理的玻璃表面 會(huì)變成毛面,影響細(xì)胞分離效果,。

 

  1. 吸取過(guò)多的單個(gè)核細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的

 

粒細(xì)胞數(shù)量增加,。

 

  1. 吸取過(guò)多的單個(gè)核細(xì)胞層上層溶液會(huì)導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜。

 

  1. 分離液用量大于稀釋后血液樣本時(shí),,分離效果更佳,。

 

  1. 如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過(guò)低,請(qǐng)以尋求幫助,,具體詳 見(jiàn)下方生產(chǎn)企業(yè)信息,。

 

【儲(chǔ)存條件及有效期】

 

 

18-25保存,有效期 2 年,。本品易感染細(xì)菌,,需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作,,啟

 

封后置常溫保存,。如 4保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,,影響分離效果,。

 

【參考值(參考范圍)】

 

本實(shí)驗(yàn)單個(gè)核細(xì)胞提取率及純度均大于 80%

 

下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例,,用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考,。

 

 

紅細(xì)胞

 

白細(xì)胞

 

血小板

 

 

 

 

 

 

 

 

4.0-10.0)×109

 

含量(個(gè)/L

4.0-5.5)×1012

中性粒細(xì)胞

淋巴細(xì)胞

單核細(xì)胞

1.0-3.0)×1011

 

 

50%-70%

20%-40%

3%-8%

 

 

 

 

 

 

 

 

【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】

 

  1. 所獲得單個(gè)核細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù),。

 

  1. 所獲得單個(gè)核細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。

 

  1. 所獲得單個(gè)核細(xì)胞的鑒定方法 A.流式細(xì)胞技術(shù) B.免疫組化技術(shù)

 

C.原位雜交技術(shù)

 

D.PCR 技術(shù)

 

注:上述技術(shù)方案詳情請(qǐng)登陸本搜索細(xì)胞分離,、

 

純化,、擴(kuò)增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊(cè),,并在說(shuō)明書(shū)項(xiàng)目欄下下載使用,。

 

【可能存在的問(wèn)題及解決方法】

 

1.    由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示:

 

出現(xiàn)情況

出現(xiàn)原因

建議解決方案

 

 

 

 

 

離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層

轉(zhuǎn)速過(guò)小或離心時(shí)間過(guò)短

適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

 

 

 

 

離心后目的細(xì)胞存在于分離液中

轉(zhuǎn)速過(guò)大或離心時(shí)間過(guò)長(zhǎng)

 

 

 

 

 

 

 

離心后白環(huán)層彌散

細(xì)胞密度過(guò)大

調(diào)整細(xì)胞密度

 

 

 

 

離心后白環(huán)層太淺或看不見(jiàn)

細(xì)胞密度過(guò)小

 

 

 

 

 

 

 

 

  1. 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心,,其密度與溫度,、大氣壓等密切相關(guān)。不同地 區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整,。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),,恒定離 心時(shí)間,對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整,。

 

  1. 本分離液依照標(biāo)準(zhǔn),,全部使用藥用級(jí)原料,性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,,可

 

 

能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況,,可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。

 

注:在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí),,離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù),,直至達(dá)到分離效果,

 

離心力zui小不得小于 400g,,zui大不得大于 1200g,。離心時(shí)間以 20-30min 為準(zhǔn)。

 

 

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