磁珠法PCR產物純化回收試劑盒說明書

Magbind PCR Purification Kit

目錄號：YJ2516

運輸條件：室溫（15-25℃）,。

保存條件：MBPure 2-8℃保存,，其他組分室溫（15-25℃）保存。

組分說明

                       Size          5 ml       60 ml

                       MBPure        5 ml       60 ml

                       Buffer PW    12 ml     3×48 ml

                       Buffer EB     6 ml       60 ml

              本產品僅供科研使用,，請勿用于臨床診斷及其他用途

               上海研謹生物中國生物試劑生產商  

產品簡介

　　本試劑盒提供了一種簡單,、快速、的核酸純化方法,。MBPure與樣品按一定比

例混合后,，磁珠選擇性的將核酸吸附。漂洗后,，洗脫得到的DNA純度高,，A260/A280                                   的比值在1.7-1.9之間,，A260/A230的比值通常在2.0以上。經該試劑盒純化得到的  DNA適用于測序,，克隆等下游實驗,。

試劑盒說明

      Sample type         Typical yield     Sample type        Typical yield

      5000 bp segment      Up to 90%      1000 bp segment       Up to 90%

      500 bp segment       Up to 80%       200 bp segment       Up to 80%

純化回收得率的計算

   我們建議通過瓊脂糖電泳純化前后的樣品進行回收得率的計算。我們不建議通過

260 nm處的光吸收值來計算回收得率,。因為溶液中單鏈,、雙鏈DNA和dNTP以及一些純

化前的某些雜質在260 nm處都有光吸收，這樣在計算回收前樣品中 DNA濃度時會得到

一個假的,、虛高的DNA濃度值,。

實驗前準備及重要注意事項

1．嚴禁冰凍、離心,。冰凍,、離心可能會對磁珠造成不可逆的損害。

2．磁珠長期放置后會聚集成團,，從而使磁珠表面積減小,，降低樣品回收得率，使用前

   一定要渦旋振蕩*混勻磁珠（這一過程通常需要渦旋振蕩20秒）,。

3．本試劑盒不適用于純化回收小于100 bp的DNA片段,，如果要回收小于100 bp的DNA

   片段，可將MBPure的用量增加到樣品體積的4倍,。

自備儀器

1．恒溫混勻儀——建議使用Eppendorf設計生產的Thermomixer,。

2．磁力架——建議使用DynaMagTM-2(Cat. No. 12321D)。

操作步驟（手動）

   1．渦旋振蕩MBPure 20秒,，使其*混勻為均一溶液,。

   2．向1.5 ml的離心管中加入待純化的PCR產物或其他DNA樣本，然后加入2倍樣品體積的MBPure,。渦旋振蕩混勻后,，室溫下在1400 rpm的Thermomixer上振蕩5分鐘。

注意：如無Thermomixer,，可將離心管連續(xù)顛倒混勻10分鐘,。

   3．將上一步的離心管放于磁力架上，直至磁珠*吸附（約需1分鐘）,。

   4．保持離心管固定于磁力架上,，棄去溶液，期間避免接觸磁珠,。

   5．向上一步的離心管中加入500 μl Buffer PW后,，將離心管從磁力架上取下，渦旋振蕩

      10秒鐘后將離心管重新放回磁力架,。靜置1分鐘,，待磁珠*吸附于離心管側壁后*棄去漂洗液,。

   6．重復步驟5。

   7．保持離心管固定于磁力架上靜置放置10分鐘,，使乙醇*揮發(fā)干凈,。

      注意：如果磁珠干燥過度會極大的降低DNA的回收得率。

   8．將離心管從磁力架上取下,，加入20-100 μl Buffer EB,，渦旋振蕩將磁珠重懸于洗脫液

      中后將離心管放于65℃、1400 rpm的Thermomixer上振蕩洗脫5分鐘,。

注意：如無Thermomixer,，可將離心管放于65℃水浴鍋或金屬浴中孵育。孵育期間每隔2分鐘渦旋震蕩5秒鐘,。

   9．將離心管放于磁力架上直至磁珠*吸附（約需1分鐘）,。

   10.將洗脫液轉移至一個新的1.5 ml離心管中。此時,，可棄去磁珠,。