固相載體的選擇和試劑的制備

ELISA的主要試劑為固相的抗原或抗體,，酶標(biāo)記的抗原或抗體和與標(biāo)記酶直接關(guān)聯(lián)的酶的反應(yīng)底物。

1.固相載體的選擇

ELISA可用許多不同類型的固相如纖維素,、聚丙烯酰胺,、聚苯乙烯、聚丙烯,、交聯(lián)葡萄糖,、玻璃、硅橡膠,、瓊脂糖凝膠和含F(xiàn)e2O3的磁性聚苯乙烯等材料,，這些材料一共價(jià)鍵與抗原或抗體結(jié)合，但有其缺點(diǎn),，除含鐵的顆粒外,，其他材料ELISA沖洗步驟中都要離心。如果固相用微量板或微量管,，大顆?；蛲该餍筒恍枰x心,，這些固相都是用聚苯乙烯、聚乙烯和尼龍材料制成的,。固相可以預(yù)先用r射線或紫外光處理也可以不處理,。幾乎所有的塑料都有吸附蛋白質(zhì)的能力，一般認(rèn)為聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保留原來(lái)的免疫活性,。另外聚苯乙烯在ELISA測(cè)定過(guò)程中作為載體和容器，不參與化學(xué)反應(yīng),，加之他的價(jià)格低廉,，可制成各種形狀，故被普遍采用,。聚乙烯的吸附能力雖好,，但因材料本身質(zhì)軟使操作不便，聚丙烯的吸附性能差,，故聚乙烯和聚丙烯的使用都很少,。聚苯乙烯經(jīng)過(guò)射線照射后對(duì)蛋白質(zhì)，特別是免疫球蛋白吸附性能增加,，應(yīng)用于ELISA雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多,，但用于間接法測(cè)抗體時(shí)空白值較大。

為比較不同固相在某一ELISA測(cè)定中的優(yōu)勢(shì)可將陽(yáng)性和陰性參考血清分別稀釋后在不同的固相載體上按選擇的ELISA操作步驟進(jìn)行,，顯色后比較每孔溶液的吸光值,。在哪種載體上的陽(yáng)性和陰性參考血清的反應(yīng)差別zui大，表明哪種固相zui為合適,。

ELISA載體的形狀只要有三種：小試管,、小珠和微量酶標(biāo)板。小試管的特點(diǎn)是可用作反應(yīng)的容器,，zui后放入分光光度計(jì)中比色。小珠一般為直徑0.6cm的圓球,，表面磨砂后吸附面積大大增加,，如用特殊的洗滌器，在洗滌的過(guò)程中使圓珠滾動(dòng)淋洗,，效果更好,。zui常用的載體為微量酶標(biāo)板，于ELISA的產(chǎn)品稱為ELISA板,。上標(biāo)準(zhǔn)的微量酶標(biāo)板是96孔微量板,。

ELISA板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測(cè)，并可在酶標(biāo)儀上迅速讀出結(jié)果?，F(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量酶標(biāo)板型的ELISA檢測(cè),，包括加樣,、洗滌、孵育,、比色等步驟,，對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。

由于酶標(biāo)板在各個(gè)方面存在一些差異,，因此選擇的酶標(biāo)板不僅需要于ELISA的酶標(biāo)板,，而且還要考慮板的吸附能力和各孔的均質(zhì)性。良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好,，空白值低,，孔底透明度高,，各板之間,、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于材料的不同和制作工藝的差別,，各種商品酶標(biāo)板質(zhì)量差異很大,。