用超聲波破碎儀破碎大腸桿菌注意事項
用大腸桿菌表達外源蛋白,，在進行超聲波破碎之前，用含有1%triton-X-100的PBS懸浮,，效果較好,，1%triton-X-100的作用還是很明顯的，對其他的一些細菌同樣起作用,，比如鏈霉菌,。 
細菌沉淀直接加樣品1 buffer，再加5μl的巰基乙醇,，混勻,，離心，煮沸10min,，直接上樣,，染色脫色步驟如下:將膠放入適量的染色液微波爐里加熱1min(下次適當補點醋酸即可),將染色液換成大量的水(自來水即可)在微波爐煮10min 就可以。在表達重組蛋白后超聲波破碎細胞,，采用冰浴,，400w，破2s停1s,，但是不一會就產(chǎn)生大量泡沫,，影響了破碎功率,， pbs和tris緩沖液都是這樣，zui后都是破碎不*,，而我的目的蛋白就在這些未破碎的細胞中,。
1*會產(chǎn)生氣泡是因為你的探頭位置沒放好。超聲波破碎儀探頭一定要接近底部,，約1cm（推薦是距底部0.5mm）,。功率根據(jù)儀器不同會有所不同，但你可以觀察液面,，有波動但不要太劇烈就好,。
2*破3s停10s，破碎20-30個循環(huán)觀察效果,。 
3*探頭位置擺放也要注意,，聽聲音如果不對的話就要及時調(diào)整。另外可以從菌濃度方面考慮,。 在超聲波破碎時試著加大體積,振幅不要超過60%. 
4*嘗試超8s停8s,對有些菌體蛋白來說,，通常方法很難散熱，導致蛋白變性產(chǎn)生氣泡,，停頓時間稍長一些,，這種情況多見于包涵體形式的蛋白。如果換用Branson超聲波破碎儀來進行工作,，由于熱耗較小，停頓周期可適當減小,。