ELISA中陰性本底的形成原因和消除方法

在酶聯(lián)固相免疫實(shí)驗(yàn)中，尤其在間接ELISA法中,，經(jīng)常會(huì)碰到陰性本底的問題,。主要是本底過高和不同標(biāo)本的本底值差異較大。本底或稱背景,，是ELISA中的非特異性顯色,。底物未經(jīng)過酶作用而呈現(xiàn)的顏色稱為空白。底物液如配制不當(dāng)會(huì)出現(xiàn)一定的空白值。這個(gè)空白值只要不太高（A＜0.05）,，可從各測(cè)定值中減除,，并不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。這里討論的是不含待測(cè)抗原或抗體的陰性標(biāo)本在ELISA中出現(xiàn)的本底,。從理論上來說,，只有陰性標(biāo)本zui終才能引起顯色反應(yīng)，那么,，為什么會(huì)出現(xiàn)本底呢,？

  固相載體的吸附：在酶免疫測(cè)定中，ELISA的特點(diǎn)是利用分離游離和結(jié)合的酶結(jié)合物的手段,。固相載體與吸附在其上的抗原或抗體形成固相抗原或固相抗體,，即免疫吸附劑（Immu-nosorbent）。通常所用的固相載體聚苯乙烯其表面主要是疏水基團(tuán),，通過疏水鍵與蛋白質(zhì)結(jié)合,。這種物理性吸附是非特異性的，雖然蛋白質(zhì)的分子量,、等電點(diǎn),、濃度等對(duì)吸附的量有一定的影響，但總的來說各種蛋白質(zhì)均能吸附在聚苯乙烯載體的表面,。因此除在包被時(shí)有目的地使抗原或抗體吸附在載體上外,，在ELISA各個(gè)步驟中均有可能發(fā)生干擾物質(zhì)的吸附，使zui終產(chǎn)生與受檢抗原－抗體反應(yīng)無關(guān)的顯色,，這是形成本底的主要原因,。