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黃曲霉毒素M1
【概要】
黃曲霉毒素（Aflatoxin）是黃曲霉,、寄生曲霉等真菌產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，被世界衛(wèi)生組織的癌癥研究機構(gòu)劃分為1類致癌物,，同時又是一種毒性*的劇毒物質(zhì),，廣泛存在于各種食物中。玉米,，花生,，大米，小麥等谷物及其副產(chǎn)品是黃曲霉毒素的主要來源,，同時飼料中的黃曲霉毒素B1經(jīng)過動物代謝后產(chǎn)生的黃曲霉毒素M1仍然具有很強的毒性和致癌性,，也廣泛存在牛奶，血液,，組織等食品中,。黃曲霉毒素作為肝癌的三大誘因之一，也是胃癌,，腸癌等疾病的主要原因,，對人類的健康構(gòu)成很大威脅。世界各國對食品,，飼料中的黃曲霉毒素都有嚴格的*,。2010年6月1日開始施行的乳品安全國家標準中對乳和乳制品中黃曲霉毒素M1的檢測進行了規(guī)定，主要使用的樣品前處理方法就是免疫親和柱凈化法,。
黃曲霉毒素M1【適用范圍及性能】
用于定性,、定量檢測牛奶，奶粉,，發(fā)酵乳,，干酪，奶油等樣品中的樣品前處理,。
柱容量：≥200ng
回收率：≥90%
【試驗原理】
本產(chǎn)品的測定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng),，單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠上，樣品中的經(jīng)過提取,、過濾,、稀釋，然后將樣品提取液緩慢的通過免疫親和層析柱,，在免疫親和柱內(nèi),，毒素與抗體結(jié)合,，之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結(jié)合的其他物質(zhì)。用甲醇洗脫,，然后注入到分析儀器中用于檢測,。
【包裝組成】
根據(jù)不同規(guī)格，每一個盒中包含5-25支黃曲霉毒素免疫親和層析柱及1份說明書,。
【需要而未提供的設(shè)備及試劑】
設(shè)備：
┅┅高速均質(zhì)器或組織勻漿機
┅┅粉碎機
┅┅200mL/50mL量筒
┅┅天平：感量0.1g
┅┅酸度計
┅┅分液漏斗
┅┅微量移液器：單道 100?L～1000?L
┅┅槽紋濾紙（折疊快速定性或定量濾紙）
┅┅50mL漏斗
┅┅旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀
┅┅一次性玻璃試管
┅┅泵流操作架（包括空氣泵,，不同容積的玻璃注射器等）
┅┅燒杯，容量瓶,，錐形瓶等
試劑：
┅┅甲醇（色譜級）
┅┅乙腈（色譜級）
┅┅石油醚
┅┅蒸餾水或去離子水
┅┅氫氧化鈉溶液（0.5mol/L）稱取2g氫氧化鈉溶解于100mL水中
【樣本處理步驟】
（一）牛奶
┅┅將100mL牛奶水浴加熱至40 oC,；
┅┅4000r/min離心15min，收集50mL清澈液待用
（二）乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品
┅┅稱取10g奶粉樣品,，將100mL50 oC水多次少量加入,，攪拌，使奶粉充分溶解
┅┅6000r/min離心15min,，收集50mL清澈液待用
（三）發(fā)酵乳(包括固體狀,、半固體狀和帶果肉型)
┅┅稱取60 g混勻的試樣，用0.5 mol/L 的氫氧化鈉溶液在酸度計指示下調(diào)pH至7.4,；
┅┅用高速均質(zhì)器在 9500 轉(zhuǎn)/分鐘下告訴勻漿5 min
┅┅水浴加熱至40 oC,；
┅┅4000r/min離心15min，收集50mL清澈液待用
（四）干酪
┅┅稱取經(jīng)切細,、過10目圓孔篩混勻的試樣5g置于50 mL離心管中,，加2 mL水和30 mL甲醇；
┅┅用高速均質(zhì)器在 9500r/分鐘下告訴勻漿5 min,；
┅┅超聲提取30 min,；
┅┅在6000r/分鐘下離心15 min，收集上清液并移入250 mL分液漏斗中,。
┅┅在分液漏斗中加入30 mL石油醚（4.3）,，振搖2 min；
┅┅待分層后,，將下層移于50 mL燒杯中,，棄去石油醚層。
┅┅重復(fù)用石油醚提取2次,；,。
┅┅將下層溶液移到100 mL圓底燒瓶中，減壓濃縮至約2 mL,；┅┅濃縮液倒入離心管中,，燒瓶用乙腈-水溶液(1+4) 5 mL分2次洗滌，洗滌液一并倒入50 mL離心管中,；
┅┅加水稀釋至約50 mL,，在6000 轉(zhuǎn)/分鐘下離心 5 min,，上清液供凈化處理。
（五）奶油
┅┅稱取5g試樣,，置于50 mL燒杯中,；
┅┅用20 mL石油醚將其溶解并移于250mL具塞錐形瓶中。
┅┅加20 mL水和30 mL甲醇,，振蕩30 min后,，將全部液體移于分液漏斗中,；
┅┅待分層后,，將下層溶液全部移到100 mL圓底燒瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮至約5 mL,，加水稀釋至約50mL,，供凈化處理。
【親和柱凈化步驟】
┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下,。準確移取10.0mL清澈液注入玻璃注射器,；
┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約2-3mL/min流速緩慢通過免疫親和柱,，直至2~3mL空氣通過柱體,；
┅┅在注射器中加入10ml水，調(diào)節(jié)壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱,。
┅┅準確加入1mL色譜級乙腈洗脫,，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中,，供檢測用,。
【結(jié)果判定】
經(jīng)免疫親和柱凈化后，收集到的乙腈洗脫液可直接使用熒光計或者HPLC檢測,，也可使用薄層色譜或者酶聯(lián)免疫試劑盒進行檢測,。收集到的1ml洗脫液中的黃曲霉毒素含量相當(dāng)于10ml牛奶樣品、發(fā)酵乳樣品或者1g奶粉樣品,、干酪樣品和奶油樣品中的含量,。
如果HPLC檢測需要其它溶劑，可以將乙腈洗脫液氮氣吹干,，然后復(fù)溶
【注意事項】
┅┅黃曲霉毒素危害極大,，應(yīng)戴手套操作。
┅┅使用過的玻璃容器及黃曲霉毒素溶液用5%濃度的次氯酸鈉溶液浸泡過ye,。
┅┅不使用過了有效日期的免疫親和柱,。
【貯藏條件及保存期】
貯藏條件：親和柱可于常溫保存，2-8℃儲存可延長有效期,，不可凍存,。
保存期：該產(chǎn)品有效期為12個月,。