母種培養(yǎng)基的配制
1.器具:試管 刀 天平 鋁鍋 棉塞 紗布 漏斗 燒杯 量筒
2.常用的母種培養(yǎng)基配方
①馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA):馬鈴薯(去皮)200g,,葡萄糖20g,。瓊脂20g,水1000ml,,{如果需要配制250ml的培養(yǎng)基,,那么馬鈴薯、葡萄糖,、瓊脂的比例是50:5:5},也可用蔗糖取代葡萄糖,,即為PSA培養(yǎng)基,。還可以添加磷酸二氫鉀3g,硫酸鎂1.5g,,維生素B1 10㎎,,即為馬鈴薯綜合培養(yǎng)基。廣泛適用于各種食用菌母種的分離,,培養(yǎng)和保藏,。
②馬鈴薯玉米粉培養(yǎng)基:馬鈴薯(去皮)200g,,蔗糖20g,,玉米粉50g,瓊脂20g,,磷酸二氫鉀1g,,硫酸鎂0.5g,水1000ml,。本配方適合于香菇,、黑木耳、猴頭菌的培養(yǎng),。
?、垴R鈴薯黃豆粉培養(yǎng)基:馬鈴薯200g,蔗糖20g,,瓊脂20g,,黃豆粉20g,碳酸鈣10g,,磷酸二氫鉀1g,,硫酸鎂0.5g,水1000ml,。適用于蘑菇,、草菇,。
④葡萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基:葡萄糖20g,,蛋白胨20g,,瓊脂20g,水1000ml,。
?、莸鞍纂恕⒔湍?、葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基:蛋白胨2g,,酵母膏2g,硫酸鎂0.5g,,磷酸二氫鉀0.5g,,磷酸氫二鉀1g,葡萄糖20g,,維生素B1 20㎎,,瓊脂20g,水1000ml,。
具體步驟
1.計(jì)算,。按照選定的培養(yǎng)基配方,計(jì)算各種成分的用量,。
2.稱量,。用天平秤取各種物質(zhì),馬鈴薯去皮去芽眼,,削掉青綠部分,,對(duì)不易稱量的成分,可用玻棒和燒杯稱重,,微量元素等需要量少,,難以稱準(zhǔn)時(shí),可先配成較濃的原液,,再?gòu)闹腥〕鲂枰牧俊?/span>
3.配制,。若配制合成培養(yǎng)基,先量取蒸餾水,,加入瓊脂,,加熱溶化;再加入稱好的其他物質(zhì)。為避免發(fā)生沉淀造成營(yíng)養(yǎng)損失,,加入的順序一般是先加緩沖劑,,再依次加入主要元素、微量元素和維生素等;若各種成分均不發(fā)生沉淀,也可一起加入,。
4.煮汁,,去濾液。馬鈴薯切成1㎝見方的小塊或2~3㎜厚的薄片,,加水約1200ml煮沸,,再用文火保持20~30分鐘、并適當(dāng)攪拌,,使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)充分溶解出來(lái),,然后用4層預(yù)濕的紗布過(guò)濾,取其濾液,。
5.補(bǔ)足水量,,加藥品溶化。補(bǔ)足水量至1000ml,,然后往濾液中加入瓊脂,,小火加熱,攪拌至瓊脂溶解,,再加入葡萄糖和其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)使其溶化后,用PH試紙檢測(cè)其PH值,,可根據(jù)需要使用氫氧化鈉和鹽酸,,調(diào)整適宜的酸堿度,進(jìn)行分裝,。注意開鍋攪拌,,防止溢出或焦底。
6.分裝試管,。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)趁熱分裝,,可用玻璃試管,先把較大的玻璃漏斗固定在滴定架上,,下接一段乳膠管和玻璃管,,用彈簧夾夾住膠管。手拿試管,,分裝量掌握在試管長(zhǎng)度的四分之一,。注意分裝時(shí),培養(yǎng)基不能粘在試管口壁上,,否則會(huì)污染棉塞,。
7.賽棉塞,注意要松緊適度,。
8.高壓鍋滅菌30分鐘,。
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