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介紹高效液相色譜儀的兩種色譜法
閱讀：2902 發(fā)布時間：2021-6-26
高效液相色譜儀是在經(jīng)典液相色譜儀的基礎(chǔ)上,，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的,。它與經(jīng)典液相色譜儀的區(qū)別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效,，但會引起高阻力,，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜儀,。高效液相色譜儀按分離機制的不同分為液固吸附色譜法,、液液分配色譜法(正相與反相),、離子交換色譜法、離子對色譜法及分子排阻色譜法,。
一,、液固色譜法
使用固體吸附劑，被分離組分在色譜柱上根據(jù)固定相對組分吸附力大小不同而分離,。分離過程是一個吸附-解吸附的平衡過程,。常用的吸附劑為硅膠或氧化鋁，粒度5~10μm,。適用于分離分子量200~1000的組分,，大多數(shù)用于非離子型化合物，離子型化合物易產(chǎn)生拖尾,。常用于高效液相色譜儀分離同分異構(gòu)體,。
二、液液色譜法
使用將特定的液態(tài)物質(zhì)涂于擔(dān)體表面,，或化學(xué)鍵合于擔(dān)體表面而形成的固定相,，分離原理是根據(jù)被分離的組分在流動相和固定相中溶解度不同而分離。分離過程是一個分配平衡過程,。
涂布式固定相應(yīng)具有良好的惰性;流動相必須預(yù)先用固定相飽和,，以減少固定相從擔(dān)體表面流失;溫度的變化和不同批號流動相的區(qū)別常引起柱子的變化;另外在流動相中存在的固定相也使樣品的分離和收集復(fù)雜化。由于涂布式固定相很難避免固定液流失,，現(xiàn)在已很少采用?，F(xiàn)在多采用的是化學(xué)鍵合固定相，如C18,、C8,、氨基柱、氰基柱和苯基柱,。
液液色譜法按固定相和流動相的極性不同可分為正相色譜法(NPC)和反相色譜法(RPC),。
正相色譜法：采用極性固定相(如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相);流動相為相對非極性的疏水性溶劑(烷烴類如正已烷,、環(huán)已烷),，常加入乙醇、異丙醇,、四氫呋喃等以調(diào)節(jié)組分的保留時間,。常用于分離中等極性和極性較強的化合物(如酚類、胺類,、羰基類及氨基酸類等),。
反相色譜法：一般用非極性固定相(如C18、C8);流動相為水或緩沖液，常加入甲醇,、乙腈,、異丙醇、丙酮,、四氫呋喃等與水互溶的有機溶劑以調(diào)節(jié)保留時間,。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現(xiàn)代液相色譜中應(yīng)用Z為廣泛,，據(jù)統(tǒng)計,，它占整個高效液相色譜儀應(yīng)用的80%左右。
隨著柱填料的快速發(fā)展,，反相色譜法的應(yīng)用范圍逐漸擴大,，現(xiàn)已應(yīng)用于某些無機樣品或易解離樣品的分析。為控制樣品在分析過程的解離,，常用緩沖液控制流動相的pH值,。但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常為2.5~7.5(2~8),，太高的pH值會使硅膠溶解,，太低的pH值會使鍵合的烷基脫落。