Bridge It SAM檢測(cè)試劑盒介紹

Mediomics Bridge It®S-腺苷甲硫氨酸（SAM）熒光分析試劑盒

分析性能

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簡(jiǎn)單：混合和測(cè)量

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快速：培養(yǎng)30分鐘后讀取熒光信號(hào)

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靈敏度：分析在0.5µM的靈敏度下限下測(cè)量SAM

（即96孔中50 pmol/孔或384孔中20 pmol/孔）

微孔板）

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靈活：在FRET（Bridge It®）和TR-FRET（TR）中都可以進(jìn)行分析-

FRET Bridge It®）格式

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高信號(hào)背景比：Bridge It®分析試劑盒的TR-FRET選項(xiàng)提供了非常高的信號(hào)背景比（>30倍），這對(duì)于高通量篩選和藥物發(fā)現(xiàn)非常有用

*Bridge It®S-腺苷甲硫氨酸（SAM）熒光分析試劑盒僅用于實(shí)驗(yàn)室研究和開發(fā)（研發(fā)）目的。本產(chǎn)品未經(jīng)政府監(jiān)管部門批準(zhǔn)用于人類或動(dòng)物疾病的診斷或治療、食品監(jiān)測(cè)或?qū)嶒?yàn)室研發(fā)以外的任何應(yīng)用，不得用于此類目的,。

S-腺苷甲硫氨酸（也稱為SAM，SAMe或AdoMet）在所有類型生物體的甲基化生物過程中起著至關(guān)重要的作用,。在甲基化循環(huán)中,，SAM充當(dāng)DNA和蛋白質(zhì)共價(jià)修飾中使用的甲基基團(tuán)的供體。SAM水平的可變性與衰老過程,、許多神經(jīng)和精神疾?。òò柎暮Ｄ　⒁钟舭Y,、HIV相關(guān)疾?。┯嘘P(guān)

神經(jīng)功能障礙/癡呆、多發(fā)性硬化,、帕金森病,、脊髓變性、癲癇,、纖維肌痛,、偏頭痛，以及慢性肝功能障礙,、動(dòng)脈硬化和癌癥,。目前，使用高壓液相色譜法（HPLC）對(duì)SAM進(jìn)行定量,。高效液相色譜法耗時(shí),、成本高，而且由于需要大量有機(jī)溶劑,，對(duì)環(huán)境不友好,。

所有序列特異性DNA結(jié)合蛋白的共同特性是，它們能夠以高親和力和特異性結(jié)合到包含*核苷酸序列的DNA雙鏈,，即蛋白質(zhì)的DNA結(jié)合位點(diǎn),。Mediomics的新型分析平臺(tái)設(shè)計(jì)依賴于這一共同特征。包含給定目標(biāo)DNA結(jié)合蛋白的序列特異性DNA結(jié)合位點(diǎn)的DNA雙鏈體被拆分為兩個(gè)DNA“半位點(diǎn)"雙鏈體,，每個(gè)雙鏈體具有短的單鏈上臂。這些單鏈延伸足夠短,，因此在缺乏靶蛋白的情況下幾乎不會(huì)發(fā)生自發(fā)的r-e結(jié)合,。

然而,，當(dāng)存在靶蛋白時(shí)，其對(duì)全長(zhǎng)DNA序列的高親和力將驅(qū)動(dòng)兩個(gè)半位點(diǎn)DNA雙鏈體的重新結(jié)合,。這種重新關(guān)聯(lián)可以通過合并適當(dāng)?shù)?/span>

熒光探針進(jìn)入兩個(gè)DNA半位點(diǎn)中的每一個(gè),。DNA結(jié)合蛋白的存在被檢測(cè)為熒光信號(hào)的增加。如下圖所示,，這種基本平臺(tái)設(shè)計(jì)的簡(jiǎn)單變體允許DNA結(jié)合蛋白（黃色卵形）作為其特定配體的敏感生物傳感器發(fā)揮作用：

真核細(xì)胞大約含有3000個(gè)序列特異性DNA結(jié)合蛋白,。這些重要的蛋白質(zhì)在有或沒有特定小分子協(xié)同調(diào)節(jié)器（配體）的情況下發(fā)揮作用，控制基因組DNA活動(dòng)的各個(gè)方面,，包括基因表達(dá),、DNA復(fù)制和DNA修復(fù)。Mediomics正在應(yīng)用其新型熒光分析平臺(tái)開發(fā)體外分析,，用于快速,、靈敏地定量DNA結(jié)合蛋白及其小分子配體的活性。S-腺苷甲硫氨酸是一種小分子配體,，與甲硫氨酸阻遏蛋白結(jié)合并共同調(diào)節(jié)其活性,。

Mediomics Bridge It®SAM熒光分析方法基于成熟的熒光測(cè)量技術(shù)和

利用DNA結(jié)合蛋白作為生物傳感器的新分析平臺(tái)設(shè)計(jì)

對(duì)于各自的小分子co調(diào)節(jié)器（配體）。DNA序列特異性甲硫氨酸再吸收蛋白對(duì)其*DNA的親和力

其配體S腺苷甲硫氨酸的存在大大增加了結(jié)合位點(diǎn),。在本試驗(yàn)中,，MetJ共有序列分為兩部分

大約相等的DNA“半位點(diǎn)"，其中一半片段用熒光素標(biāo)記,，另一半片段用Oyster®645熒光團(tuán)標(biāo)記,。

試樣中SAM的相對(duì)含量會(huì)影響其含量

DNA MetJ蛋白復(fù)合物形成的檢測(cè)。當(dāng)這個(gè)復(fù)雜

形式,，它使熒光標(biāo)記的DNA半位點(diǎn)非常接近,，并導(dǎo)致熒光信號(hào)發(fā)射的可測(cè)量變化（增加），可使用微孔板讀取器輕松測(cè)量（波長(zhǎng)設(shè)置：

吸收485 nm,；發(fā)射665 nm）,。然后使用SAM標(biāo)準(zhǔn)曲線確定測(cè)試樣品中的SAM濃度。

Bridge It®SAM熒光分析方法具有非常理想的性能特征,，包括高（>6:1）信號(hào)背景比,、良好的檢測(cè)范圍（~ 0.4μM–100μM）和~ 0.4μM的檢測(cè)靈敏度。該檢測(cè)水平（~ 0.4μM）有助于在大多數(shù)感興趣的測(cè)試樣本（包括生物流體）中量化SAM,，細(xì)胞培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)基,，以及組織和細(xì)胞提取物。該測(cè)定可以修改為任何使用SAM作為反應(yīng)物或產(chǎn)物的酶反應(yīng)的測(cè)定,。

Mediomics分析的平板閱讀器設(shè)置

對(duì)于基于TR-FRET的分析（TR-FRET Bridge It®和TRF-PINCER®）：

330 nm激勵(lì)濾波器（帶寬：80 nm）

665 nm發(fā)射濾波器（帶寬：7.5 nm）

620 nm發(fā)射濾波器（帶寬：40 nm）

應(yīng)從頂部讀取銘牌,。建議的讀取設(shè)置為每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)50次測(cè)量，收集數(shù)據(jù)前的延遲時(shí)間為55μs,，數(shù)據(jù)收集時(shí)間為1000μs,。

對(duì)于基于FRET的分析（Bridge It®和FRET-PINCER®）：

485 nm激勵(lì)濾波器（帶寬：20 nm）

665 nm發(fā)射濾波器（帶寬：34 nm）

540 nm發(fā)射濾波器（帶寬：40 nm）

應(yīng)從頂部讀取銘牌,。建議讀取設(shè)置為每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)50個(gè)測(cè)量值。