QUANSYSBIO 355149HU說明書

引言

Q-Plex Human Micronutrient v2 (7-Plex)

Q-Plex™ 人體微量營養(yǎng)素（7-復(fù)合物）臨界反饋

微量營養(yǎng)素缺乏（MND）會對個人及其后代產(chǎn)生系統(tǒng)性和持久的影響（1）,。MND影響全球人口，但對中低收入國家（LMIC）育齡兒童和婦女的影響不成比例,。如果不進行治療,，MND會顯著降低生活質(zhì)量并造成致命后果。需要制定公共健康監(jiān)測計劃,，以確定面臨風險的人群,，并確定要采取的適當干預(yù)措施。然而,，已經(jīng)表明,，此類項目的可持續(xù)性取決于成本、能力發(fā)展和機構(gòu)基礎(chǔ)的位置（2）,。

一些組織試圖提供綜合平臺,，以滿足公共健康監(jiān)測項目的需求。通常,，只有在地區(qū)或國家以外的測試中心才能使用具有良好特征的方法,。這里需要注意的一個重要群體是VitMin實驗室（德國Willst?tt），該實驗室通常被認為是通過傳統(tǒng)的夾心ELISA方法測量微量營養(yǎng)素的金標準（3）,。然而,，這種偏好造成了對服務(wù)的高需求，并在不同情況下對研究人員造成了與出口相關(guān)的障礙（4）,。因此,，需要一種價格合理、準確且易于實施和使用的分析方法,，以滿足LMICs公共健康監(jiān)測項目的需要,。

多重微量營養(yǎng)素評估工具（MMAT）最初于2014年推出，是PATH（美國華盛頓州西雅圖）和Quansys Biosciences（美國猶他州洛根）合作開發(fā)的一種多重ELISA,。MMAT在正式發(fā)布后更名為Q-Plex人體微量營養(yǎng)素（5-Plex）,。該分析同時評估了5種分析物的水平，包括鐵蛋白、C反應(yīng)蛋白（CRP）,、α-1-酸性糖蛋白（AGP）,、可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（sTfR）和視黃醇結(jié)合蛋白4（RBP4）（5）。與傳統(tǒng)ELISA相比,，多重ELISA允許從小血樣中生成和收集更多數(shù)據(jù),。此外，與其他多重ELISA平臺不同,，如Luminex和MagPix平臺依賴于可能需要專門設(shè)施,、培訓(xùn)和服務(wù)的流體系統(tǒng)，Q-Plex試劑盒是根據(jù)傳統(tǒng)ELISA協(xié)議設(shè)計和遵循的,，只需要相對較少的培訓(xùn)和專門設(shè)備,。2017年，分析物小組擴大到包括甲狀腺球蛋白（Tg）和組氨酸豐富蛋白II（HRP2）,，并更名為Q-Plex人類微量營養(yǎng)素（7-Plex）,。這拓寬了分析的能力，使其能夠指示碘的狀態(tài)以及患者目前或最近是否感染了惡性瘧原蟲瘧疾（6,7）,。此外,，確定使用干血點（DBS）作為樣本類型適用于除鐵蛋白外的所有分析物，鐵蛋白在DBS中反映了血清鐵蛋白與溶解紅細胞的細胞內(nèi)鐵蛋白的混合物,，混淆了測試結(jié)果（8）,。

Quansys Biosciences和PATH以外的實驗室對Q-Plex人體微量營養(yǎng)素（7-Plex）分析進行了廣泛測試，以在現(xiàn)場廣泛部署之前驗證其性能,。外部測試表明許多分析物具有良好的相關(guān)性,，但確定了與更成熟的方法有關(guān)的數(shù)據(jù)相關(guān)性問題。一項研究表明,，從Q-Plex人體微量營養(yǎng)素（7-Plex）和維生素產(chǎn)生的數(shù)據(jù)之間存在差異

尤其是sTfR,、AGP,、RBP4之間的差異,，以及鐵蛋白分析的敏感性（4）。CDC完成的第二項研究將Quansys ferritin,、sTfR,、CRP和AGP與羅氏臨床分析儀的ferritin、sTfR,、CRP和AGP進行了比較,，并使用視黃醇HPLC參考標準對其中一些結(jié)果進行了支持，強調(diào)了sTfR和RBP4的可變性（9）,。

CDC正在進行外部質(zhì)量保證工作,，以提高錳分析的標準化，為驗證外部發(fā)現(xiàn)提供了一個支持平臺。從CDC方法性能認證計劃中獲得40份樣本,，由羅氏臨床分析儀對CRP,、sTfR、鐵蛋白,、AGP和視黃醇HPLC進行10次單獨運行,，一式兩份。在Q-Plex人體微量營養(yǎng)素（7-Plex）上生成的這些樣品的數(shù)據(jù)與CDC的鐵蛋白和CRP參考值（圖1-2）很好地一致,，但分析結(jié)果顯示一致性較差

對于AGP,、sTfR和RBP4，與先前研究的結(jié)果相關(guān)（圖3-5）,。此處未顯示甲狀腺球蛋白的數(shù)據(jù),，因為CDC參考樣品尚未對該分析物進行表征。

綜上所述,，這些數(shù)據(jù)和第三方評估提供的反饋明確強調(diào)了需要改進的領(lǐng)域,，以便MMAT分析成為現(xiàn)有方法的可行替代方法。簡而言之,，要點如下：

•鐵蛋白分析的敏感性

•RBP4分析的精度

•sTfR和AGP數(shù)據(jù)與既定方法的相關(guān)性

Q-叢™ 人體微量營養(yǎng)素（7倍）數(shù)據(jù)

為了解決需要改進的領(lǐng)域,，Quansys改進了工具，以生成Q-Plex人體微量營養(yǎng)素v2（7-Plex）,。具體而言,，新的捕獲抗體提高了鐵蛋白分析的靈敏度，同時仍保持與參考樣品的相關(guān)性（圖1）,。這改變了分析范圍,，以確保樣品分布更一致地落在可量化范圍的中間，從而對鐵蛋白含量較低的樣品進行更精確的測量,。（圖6A）,。

觀察到的RBP4缺乏精確度被確定為與RBP4樣本值低于或高于分析定量上限有關(guān)。為了應(yīng)對這一挑戰(zhàn),，對分析進行了重新校準,，以確保所有內(nèi)源性樣本，而不僅僅是來自缺乏維生sA的個體的樣本,，都落入標準曲線的線性部分,，其中定量更精確（圖6B）。這是由于鐵蛋白分析的靈敏度提高,，使樣品的工作稀釋度從1:10增加到1:40,。此外，使用CDC的血清微量營養(yǎng)素性能驗證項目樣本進行的測試數(shù)據(jù)顯示,，RBP4和視黃醇水平之間存在很強的相關(guān)性（R2=0.75）（圖5）,。

在RBP4和鐵蛋白的1:40樣品稀釋法下,，AGP、CRP,、Tg,、HRP2和sTfR均再次優(yōu)化。

CRP和Tg的性能特征沒有隨新的樣品稀釋因子發(fā)生顯著變化（圖2）,，然而,，AGP結(jié)果表明，優(yōu)化改進了與參考值的相關(guān)性,，同時也使數(shù)據(jù)點偏離了量化限制（圖6C-D）,。為了改進sTfR分析，確定了新的捕獲和檢測抗體集,，并用于改善與CDC參考值的相關(guān)性（圖4）,。

改進微量營養(yǎng)素測定的最后一步是消除技術(shù)障礙，在使用相同的試劑盒和材料處理樣品時,，這可能會導(dǎo)致實驗室之間的差異,。在整個方案的培養(yǎng)步驟中，無需搖床即可優(yōu)化分析,。這不僅減輕了設(shè)備要求的負擔,，而且消除了因以可變速度運行的平板振動篩之間的差異而產(chǎn)生的任何變化。此外,，Quansys還提供了對照樣品,，以確保分析性能。

總之,，新優(yōu)化的Q-Plex人體微量營養(yǎng)素v2（7-Plex）分析通過以下方式處理反饋：

•提高鐵蛋白分析的靈敏度

•提高RBP4分析的精確度

•改進sTfR和AGP數(shù)據(jù)與既定方法的相關(guān)性

•不再需要平板振動篩