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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司資料大小
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506次swant 6B3說明書
產(chǎn)品:小鼠抗鈣視網(wǎng)膜蛋白抗體(單克隆)
代碼:6B3
批號(hào):010399
形式:凍干濃縮上清液(不含防腐劑),。
數(shù)量:500µl,。
復(fù)溶:用500µl雙蒸餾水。
用重組人calretinin-22k免疫小鼠產(chǎn)生抗calretinin的抗體6B3[1,,2],。鈣視網(wǎng)膜蛋白22k是鈣視網(wǎng)膜蛋白基因的選擇性剪接產(chǎn)物(3),與鈣視網(wǎng)膜蛋白相同,,可達(dá)Arg178,。融合后以人重組鈣視網(wǎng)膜蛋白為靶標(biāo)篩選雜交瘤細(xì)胞,篩選克隆6B3,??贵w6B3識(shí)別鈣視網(wǎng)膜蛋白和鈣視網(wǎng)膜蛋白-22k共有的前4個(gè)EF手結(jié)構(gòu)域內(nèi)的表位(2)。評(píng)價(jià)其特異性和效價(jià):a)通過生物素-抗生物素蛋白標(biāo)記4%多聚甲醛(或10%福爾馬林緩沖液)固定的冷凍,、振動(dòng)和石蠟切片,,b)通過免疫印跡的免疫酶標(biāo)記,c)通過組織鈣視網(wǎng)膜蛋白基因敲除小鼠的免疫組織化學(xué)(6)
該產(chǎn)品是針對(duì)鈣結(jié)合蛋白D-28k和鈣調(diào)蛋白相關(guān)的EF手家族鈣結(jié)合蛋白calretinin(4)的單克隆抗體,。該抗體與不同種屬組織中的鈣視網(wǎng)膜蛋白發(fā)生特異性反應(yīng)(見免疫印跡),。該抗體不與鈣結(jié)合蛋白D-28k或其他已知的鈣結(jié)合蛋白發(fā)生交叉反應(yīng),通過其在腦中的分布以及免疫印跡測(cè)定,。Calretinin是一種有吸引力的神經(jīng)解剖學(xué)工具,,這種McAB保證了抗Calretinin抗體持續(xù)產(chǎn)生具有相同特異性和化學(xué)同一性的恒定滴度。該抗體可識(shí)別人間皮瘤中的鈣視網(wǎng)膜蛋白(4,5),。
復(fù)溶后,,以小份(例如1µl)冷凍并保持在-80 ℃(或至少-20 ℃),。連續(xù)使用時(shí),保持在4 ℃(含0.01%疊氮化納),。避免反復(fù)凍融,。
腦提取物的免疫印跡
抗體6B3可特異性染色腦提取物免疫印跡上的鈣視網(wǎng)膜蛋白條帶(圖1)。
1 2 3 4 5 6 7
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圖1單克隆抗體6B3免疫印跡各種屬腦勻漿,。 1:小鼠,;2:大鼠;3:豚鼠,;4:兔,;5:食蟹猴;6:斑馬魚,;7:雞,。在所有種屬中,在29 kDa處檢測(cè)到條帶,。 |
鈣視網(wǎng)膜蛋白基因敲除小鼠的免疫組織化學(xué)
抗體6B3免疫標(biāo)記正常大腦中的神經(jīng)元亞群,,具有高效率(圖2a),但不染色鈣視網(wǎng)膜蛋白基因敲除小鼠的大腦(圖2b),。
* | |
圖2a:對(duì)照小鼠大腦皮層McAB 6B3的免疫組織化學(xué)染色,。注意上層散在中間神經(jīng)元的強(qiáng)染色(箭頭)。×100 | 圖2b:在calretini基因敲除小鼠的大腦皮層中不存在McAB 6B3的特異性免疫組織化學(xué)染色(5),??剐∈蠖挂鸬难鼙诜翘禺愋匀旧ㄐ翘?hào))。×100 |
免疫組織化學(xué):當(dāng)在冷凍切片機(jī)或多聚甲醛(4%)或福爾馬林固定組織的石蠟切片上進(jìn)行時(shí),,為1:2'000-1:5'000,。
免疫印跡:1:1'000-1:2'000。
對(duì)于免疫組織化學(xué)和免疫印跡,,采用抗生物素蛋白-生物素法測(cè)定滴度,。我們建議通過滴定實(shí)驗(yàn)確定宜稀釋度
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