biochain epoc培養(yǎng)說(shuō)明

一,、MEPOC生長(zhǎng)培養(yǎng)基的制備

我們推薦使用Biochain的MEPOC生長(zhǎng)培養(yǎng)基（CAT Z7030033）培養(yǎng)我們的MEPC,。

一,。在室溫水浴中解凍MEPOC生長(zhǎng)介質(zhì)補(bǔ)充劑（CAT Z7030034）,。

2.在Mepoc基本培養(yǎng)基（CAT Z7030035）的瓶子（500 ml）中加入整個(gè)體積（25 ml）的EPOC生長(zhǎng)培養(yǎng)基補(bǔ)充劑,，制備Mepoc生長(zhǎng)培養(yǎng)基。生物鏈的mepoc生長(zhǎng)培養(yǎng)基不含抗生素,，但如果擔(dān)心污染,，可以在培養(yǎng)基中添加抗生素。

三,。使用前,，在37°C水浴中加熱部分mepoc生長(zhǎng)介質(zhì)。

二,。解凍冷凍細(xì)胞

一,。在37°C水浴中加熱EPOC生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

2.用70%乙醇擦拭冰凍小瓶的外部,。在37°C的水浴中快速解凍冷凍細(xì)胞,。

三。將細(xì)胞懸液無(wú)菌轉(zhuǎn)移到15ml試管中,。用1毫升生長(zhǎng)培養(yǎng)基沖洗小瓶,，并在15毫升試管中與細(xì)胞混合。以170克（或1400轉(zhuǎn)/分）的速度離心5分鐘,，使細(xì)胞沉淀,。除去上清液。加入5ml新鮮小鼠epc培養(yǎng)基,，置于t25燒瓶中,。

四。在37℃下,，用5%的二氧化碳和95%的空氣在加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞,。每隔一天換一次。健康的培養(yǎng)物顯示紡錘體形態(tài),，培養(yǎng)2-3天后細(xì)胞數(shù)量應(yīng)加倍,。

三、亞培養(yǎng)細(xì)胞

一,。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到100%匯合時(shí)進(jìn)行繼代培養(yǎng),。

2.在通過(guò)細(xì)胞前一天更換培養(yǎng)基。

三,。在37°C水浴中加熱Dulbecco的PBS,、0.05%胰蛋白酶/EDTA和MEPOC生長(zhǎng)培養(yǎng)基,。

四。用Dulbecco的PBS沖洗細(xì)胞,。

5個(gè),。用胰蛋白酶/EDTA溶液（1.5毫升/25平方厘米）培養(yǎng)細(xì)胞3-5分鐘,，直到大約90%的細(xì)胞開(kāi)始分離,。輕輕地填充血管使細(xì)胞分離。

6.加入相當(dāng)于胰蛋白酶/EDTA體積1/10的胎牛血清中和胰蛋白酶,，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)管混合,。

7號(hào)。輕輕地重新懸浮細(xì)胞,，并將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到15ml錐形管中,。

8個(gè)。在室溫下將細(xì)胞懸液在170 x g下離心5分鐘,。

9號(hào),。小心地去除上清液，不要干擾細(xì)胞顆粒,。在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中重新懸浮細(xì)胞,。

10個(gè)。將它們按1:5的比例放入新的培養(yǎng)皿中,。

11號(hào),。在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空氣在加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞,。每隔一天換一次,。

iv.在充滿(mǎn)mepoc生長(zhǎng)培養(yǎng)基的t25、t75,、t125和t225燒瓶中提供增殖性epoc增殖性epoc,。

當(dāng)燒瓶到達(dá)時(shí)：

一。從燒瓶中倒出大部分培養(yǎng)基,，并在燒瓶中留適量,。

2.在37℃下，用5%的二氧化碳和95%的空氣在加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞,。第二天換成中號(hào),，以后每隔一天換一次。健康的培養(yǎng)基在培養(yǎng)2-3天后,，紡錘形細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞數(shù)量應(yīng)加倍,。