kamiyabiomedical KT-470說(shuō)明書

Mouse Cardiac Troponin-I ELISA

小鼠心肌肌鈣蛋白-I酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
用于小鼠血漿肌鈣蛋白I的定量測(cè)定,。
貨號(hào) KT-470
僅供研究使用

產(chǎn)品信息
小鼠心肌肌鈣蛋白-I酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
貓,。KT-470號(hào)
產(chǎn)品
K-分析小鼠心肌肌鈣蛋白-I酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是一種酶免疫分析法,，用于定量測(cè)定心肌
小鼠血漿肌鈣蛋白-I,。僅供研究使用,。
介紹
心肌肌鈣蛋白-I（ctni）是調(diào)節(jié)肌肉收縮的肌鈣蛋白復(fù)合物的組成部分。心臟損傷后,，CTNI
被釋放到血液中,。因?yàn)樗谛呐K中有特殊的表達(dá)，所以它是心臟損傷的一個(gè)*的生物標(biāo)志物,。在
人CTNI水平在受傷后12-24小時(shí)達(dá)到峰值,，2-6天內(nèi)恢復(fù)到基線水平。在小鼠中,，水平早在1
1-3天內(nèi)恢復(fù)正常,。
原理
本試驗(yàn)用于血漿樣品。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)使用兩種不同的抗體,，它們識(shí)別相對(duì)
CTNI上的蛋白酶抗性表位,。一種用于固相固定（微量滴定井）。第二個(gè)是共軛的
對(duì)辣根過(guò)氧化物酶（HRP）進(jìn)行檢測(cè),。首先用三體積的血漿稀釋血漿樣品,。
稀釋劑。然后將校準(zhǔn)器和稀釋樣品與HRP共軛物在微量滴定池中培養(yǎng)1小時(shí),。這個(gè)
結(jié)果CTNI分子夾在固定和檢測(cè)抗體之間,。洗井到
去除未結(jié)合的HRP共軛物。加入TMB,，孵育20分鐘,。如果存在CTNI，則形成藍(lán)色,。顏色
通過(guò)添加停止溶液停止顯影,，將顏色變?yōu)辄S色，并在450 nm處測(cè)量吸光度,。
CTNI的濃度與吸光度成正比,，由校準(zhǔn)曲線得出。
組件
•防CTNI涂層板（12 x 8孔條）
•CTNI庫(kù)存校準(zhǔn)器（凍干）
•校準(zhǔn)器稀釋劑,，25毫升
•血漿稀釋劑,，25 ml
•HRP共軛物，11 ml
•20倍洗滌液,，50毫升
•TMB溶液,，11毫升
•停止溶液,，11毫升

所需但未提供的材料
•移液器和吸管頭
•蒸餾水或去離子水
•聚丙烯或玻璃管
•渦流攪拌機(jī)
•吸水紙或紙巾
•培養(yǎng)皿/搖床
•板墊圈
•能夠測(cè)量450 nm吸光度的讀板器,。
•曲線擬合軟件
洗滌液準(zhǔn)備
洗滌液作為20倍的儲(chǔ)備提供。使用前,，用950毫升蒸餾水稀釋瓶子（50毫升）的內(nèi)容物,。
或去離子水,。
校準(zhǔn)器準(zhǔn)備
1。按照小瓶標(biāo)簽上的詳細(xì)說(shuō)明,，用去離子水或蒸餾水重新配制凍干的CTNI儲(chǔ)備,。輕輕攪拌直到溶解的
2。將7根聚丙烯管標(biāo)記為10,、5,、2.5、1.25,、0.625,、0.313和0.156 ng/ml。
三,。在標(biāo)記為10 ng/ml的試管中,，移液管446.1微升校準(zhǔn)稀釋液。然后加入53.9μl的原料,，輕輕攪拌,。這個(gè)
提供10 ng/ml校準(zhǔn)儀。
4,。用移液管將250微升校準(zhǔn)稀釋液移入標(biāo)有5,、2.5、1.25,、0.625,、0.313和0.156 ng/ml的試管中。
5,。通過(guò)將250μl的10 ng/ml校準(zhǔn)器與250μl的稀釋劑在管中稀釋和混合,，制備5 ng/ml校準(zhǔn)器。
標(biāo)記為5 ng/ml,。同樣,，通過(guò)兩倍串聯(lián)稀釋準(zhǔn)備剩余的校準(zhǔn)儀。
重組后的CTNI儲(chǔ)備應(yīng)在使用后立即冷凍,。冷凍時(shí)保持穩(wěn)定或至少1
-20°C時(shí)為一個(gè)月,，-70°C時(shí)為6個(gè)月。使用后丟棄工作校準(zhǔn)儀,。
樣品采集與制備
血漿（EDTA,、檸檬酸鹽或肝素）應(yīng)在血液采集后盡快制備，并在4°C下保存,。
應(yīng)同樣處理樣品（即所有樣品的儲(chǔ)存時(shí)間和溫度應(yīng)相同）,。中頻等離子體
樣品不能在采集后4小時(shí)內(nèi)進(jìn)行分析，應(yīng)在-70°C下冷凍,，使用前僅解凍一次,。
我們建議對(duì)樣品進(jìn)行一式兩份的分析,。分析前，血漿樣品應(yīng)稀釋四倍
血漿稀釋劑,。這可以很容易地通過(guò)將100μl的每個(gè)血漿樣品與300μl的血漿稀釋劑混合
聚丙烯微型離心管,。
一般說(shuō)明
1。所有試劑在使用前應(yīng)達(dá)到室溫,。
2,。解凍后，校準(zhǔn)器稀釋劑中可能會(huì)出現(xiàn)沉淀物,。應(yīng)通過(guò)離心法去除沉淀物,。
在臺(tái)式離心機(jī)中以約3000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速運(yùn)行5分鐘。使用干凈的上清液,。
三,。在*理解
指導(dǎo)并遵守良好的實(shí)驗(yàn)室慣例。
4,。清洗程序至關(guān)重要,。洗滌不足將導(dǎo)致精度差和吸光度讀數(shù)錯(cuò)誤升高。
5,。實(shí)驗(yàn)室溫度會(huì)影響吸光度讀數(shù),。我們的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒是用設(shè)置在
150轉(zhuǎn)/分和25°C。在較低溫度下進(jìn)行分析會(huì)導(dǎo)致吸光度值較低,。

測(cè)定程序
1,。將所需數(shù)量的8孔條固定在支架中。未使用的板條應(yīng)存放在重新密封的袋子中
4°C的干燥劑,，以備將來(lái)使用,。
2。在每個(gè)孔中添加100μl的HRP共軛物,。
三,。向井中注入100微升校準(zhǔn)儀和稀釋樣品（我們建議校準(zhǔn)儀和樣品試運(yùn)行
復(fù)制品）。
4,。在150轉(zhuǎn)/分和25°C的搖板機(jī)上培養(yǎng)1小時(shí),。
5。使用平板墊圈（400μl/孔）排空并用1X洗滌液清洗5個(gè)微量滴度孔,。
6,。在吸水紙或紙巾上用力敲打油井，清除所有殘留的液滴,。
7,。向每個(gè)孔中分配100μl TMB。
8。在150轉(zhuǎn)/分和25°C的軌道式微型平板振動(dòng)篩上培養(yǎng)20分鐘,。
9。20分鐘后,，通過(guò)向每個(gè)孔中添加100μl的停止溶液來(lái)停止反應(yīng),。
10。輕輕混合,。務(wù)必確保所有藍(lán)色變?yōu)辄S色,。
11。在5分鐘內(nèi)用平板閱讀器讀取450納米的吸光度,。
計(jì)算結(jié)果
1,。使用曲線擬合軟件，通過(guò)繪制校準(zhǔn)器的吸光度值與對(duì)數(shù)10的關(guān)系來(lái)構(gòu)建校準(zhǔn)曲線,。
濃度,。
2。將校準(zhǔn)曲線擬合為四參數(shù)邏輯回歸（4pl）方程（x軸=log10濃度）,，并確定
樣品的濃度（導(dǎo)出反對(duì)數(shù)）,。
三。將導(dǎo)出濃度乘以稀釋系數(shù),，以確定原始樣品中的實(shí)際濃度,。
4。如果A450值超出校準(zhǔn)曲線,，應(yīng)適當(dāng)稀釋樣品并重新測(cè)試,。如果進(jìn)一步稀釋
需要時(shí)，新鮮解凍的血漿樣品應(yīng)先用三體積的血漿稀釋劑（4倍稀釋）稀釋,。這個(gè)
然后用校準(zhǔn)器稀釋劑稀釋所得混合物,。
典型校準(zhǔn)曲線
典型的校準(zhǔn)曲線如下所示。這只是為了說(shuō)明,。必須為每個(gè)實(shí)驗(yàn)生成校準(zhǔn)曲線,。

存儲(chǔ)
將凍干后的原料儲(chǔ)存在-20°C或以下。試劑盒的剩余部分應(yīng)儲(chǔ)存在4°C,，微量滴定板應(yīng)
放在裝有干燥劑的密封袋中,。自購(gòu)買之日起，套件將保持穩(wěn)定6個(gè)月,。