xpressbio XPEH0852說明書

Human OAS1 (2'-5'-oligoadenylate synthase 1) ELISA Kit

人OAS1（2'-5'-寡腺苷酸合成酶1）ELISA試劑盒

目錄號：XPEH0852
尺寸：48t/ 96t
反應(yīng)性：人
范圍：1.56-100ng/ml
靈敏度：<0.938ng/ml
應(yīng)用：用于血清,、血漿,、組織勻漿等中OAS1的定量檢測
生物流體,。
儲存：4°C,，6個月
注：僅供研究使用,。
xpressbio XPEH0852成套元件

化驗(yàn)原理
本試劑盒基于三明治酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù),。將抗OAS1抗體預(yù)涂于96孔板上,。生物素結(jié)合抗OAS1抗體
用作檢測抗體。標(biāo)準(zhǔn)品,、試樣及生物素共軛檢測添加和未結(jié)合的結(jié)合物用洗滌緩沖液洗滌掉,。TMB基板
用于觀察HRP酶促反應(yīng)。TMB被HRP催化產(chǎn)生藍(lán)色。
添加酸性停止溶液后變?yōu)辄S色的產(chǎn)品,。黃色的密度是
與盤中采集的OAS1樣本量成比例,。讀取O.D.吸光度
在微板閱讀器中450納米，然后可以計(jì)算出OAS1的濃度,。
使用注意事項(xiàng)
1,。檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)操作的有效性和樣品稀釋的適宜性
比例、中試使用標(biāo)準(zhǔn)和少量樣品
推薦,。
2,。打開后和使用前，保持板干燥,。
三,。在使用該套件之前，旋轉(zhuǎn)管并將所有部件降到管底部,。
4,。儲存TMB試劑時要避光。
5,。洗滌過程非常重要,，不充分洗滌容易造成假陽性。
6,。建議對標(biāo)準(zhǔn)測試和樣品測試進(jìn)行重復(fù)試井,。
7。不要讓微量板在分析時干燥,，因?yàn)楦砂鍟够钚猿煞质Щ睢?br />板,。
8。不要重復(fù)使用和管子以避免交叉污染,。
9,。避免同時使用不同批次的試劑。
所需但未提供的材料
1,。微板閱讀器（波長：450納米）
2,。37°C培養(yǎng)箱
三。自動洗板機(jī)
4,。精密單通道和多通道移液管及一次性針頭
5,。清潔管和eppendorf管
6。去離子水或蒸餾水
手洗
在不接觸側(cè)壁的情況下丟棄板中的溶液,。把盤子拍打在吸收劑上
濾紙或其他吸收性材料,。用350ul洗滌緩沖液*填充每口井，并
浸泡1至2分鐘,，然后從盤子中吸取內(nèi)容物,，然后將盤子拍打在吸收劑上,。
濾紙或其他吸收性材料。再重復(fù)此步驟兩次,，總共
三洗,。

自動清洗
抽干所有井，然后用350ul洗滌緩沖液清洗三次,。后一次清洗后，
將板倒置,，并將板拍打在吸收性濾紙或其他吸收性材料上,。它是
建議將墊圈設(shè)置為浸泡1分鐘。
樣品收集和儲存
收集后立即隔離試樣,，然后立即分析（2小時內(nèi)）,。或
等分并長期保存在-20°C,。避免多次凍融循環(huán),。
血清：允許樣品在室溫下凝塊2小時或在4℃前過夜。
以大約1000×g的速度離心20分鐘,。收集上清液并攜帶
馬上化驗(yàn)出來,。采血管應(yīng)是一次性的、非致熱的,，并且
非內(nèi)毒素,。
血漿：用EDTA-NA2作為抗凝劑收集血漿。離心樣品15個
在收集后30分鐘內(nèi),，在2-8°C下在1000×g條件下保持分鐘,。收集上清液
立即進(jìn)行化驗(yàn)。避免溶血,，高膽固醇樣品,。
組織勻漿：一般情況下，溶血性血液可能會影響結(jié)果,，因此
應(yīng)該用冰冷的PBS（0.01m,，ph=7.4）沖洗組織，以清除多余的血液,。
*地,。紙巾應(yīng)稱重，然后切碎成小塊,。
在PBS中均勻化（體積取決于組織的重量,。9毫升PBS
適用于1克組織塊。建議加入一些蛋白酶抑制劑
在冰上放一個玻璃均質(zhì)器,。為了進(jìn)一步破壞細(xì)胞,，你可以用超聲波
懸浮液用超聲波細(xì)胞破壞或使其經(jīng)受凍融循環(huán)。這個
然后勻漿以5000×g的速度離心5分鐘，得到上清液,。
細(xì)胞培養(yǎng)上清液：離心上清液20分鐘,，去除不溶性雜質(zhì)
在2-8°C的溫度下，在1000×g的溫度下收集細(xì)胞碎片,。收集干凈的上清液并進(jìn)行分析,。
立即。
其他生物液體：在2-8°C下以1000×g的速度離心樣品20分鐘,。收集
上清液,，立即進(jìn)行化驗(yàn)。
樣品制備：樣品應(yīng)清晰透明,，離心去除,。
懸浮固體。
注：5天內(nèi)使用的樣品可在4°C下儲存,，否則必須儲存樣品,。
在-20°C（≤1個月）或-80°C（≤2個月）下，以避免生物活性和污染的損失,。
溶血樣品不適用于本試驗(yàn),。
樣品稀釋指南
終用戶應(yīng)首先估計(jì)試驗(yàn)樣品中目標(biāo)蛋白的濃度，以及
選擇適當(dāng)?shù)南♂屢蜃?，使稀釋后的目?biāo)蛋白濃度降到宜,。
套件的檢測范圍。用提供的稀釋緩沖液稀釋樣品,，并進(jìn)行幾次試驗(yàn)
在實(shí)踐中可能是必要的,。試樣必須與稀釋緩沖液充分混合。和
在實(shí)驗(yàn)前,，還應(yīng)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品,。

高目標(biāo)蛋白濃度（1000-10000ng/ml）：稀釋度：1:100。（即加入1μl
樣品放入99μl樣品/標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液中,。）
培養(yǎng)基靶蛋白濃度（100-1000ng/ml）：稀釋：1:10（即加入10μl
樣品放入90μl樣品/標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液中,。）
低靶蛋白濃度（1.56-100ng/ml）：稀釋：1:2（即加入50μl樣品）
放入50μl樣品/標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液中。）
目標(biāo)蛋白濃度極低（≤1.56ng/ml）：不需要稀釋,，或1:2稀釋,。
試劑制備與貯存
使用前將所有試劑置于室溫。
1,，Wash Buffer：
用去離子或蒸餾法將30毫升濃縮洗滌液稀釋至750毫升洗滌液中,。
水。將未使用的溶液放回4°C,。如果濃縮液中形成晶體,，可以加熱,。
與40°C水浴（加熱溫度不應(yīng)超過50°C）混合,，輕輕攪拌至
晶體*溶解了,。溶液應(yīng)冷卻至室溫，然后
使用,。
2,、標(biāo)準(zhǔn)：
1）。100ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液：將1 ml樣品/標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液加入其中
標(biāo)準(zhǔn)管,，保持室溫10分鐘,，并充分混合。
2）,。50ng/ml→1.56ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液：用50ng/ml、25ng/ml標(biāo)記6個eppendorf管,，
分別為12.5ng/ml,、6.25ng/ml、3.125ng/ml,、1.56ng/ml,。分份0.3毫升樣品/
標(biāo)準(zhǔn)稀釋緩沖液進(jìn)入每個試管。將0.3ml上述100ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液加入
第1管并*混合,。將0.3毫升從管轉(zhuǎn)移到第二管,，并*混合。
將0.3ml從第二管轉(zhuǎn)移到第三管,，并*混合,，依此類推。
注：標(biāo)準(zhǔn)溶液宜在2小時內(nèi)使用,。標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)為
4°C,，多12小時?；蛟?20°C下儲存48小時,。避免反復(fù)的凍融循環(huán)。
3,、生物素檢測抗體工作液的制備
實(shí)驗(yàn)前1小時內(nèi)準(zhǔn)備,。
1）計(jì)算工作液總體積：0.1 ml/井×井?dāng)?shù)。（允許）
比總體積多0.1-0.2毫升）
2）用抗體稀釋液1:100稀釋生物素檢測抗體,，混合
*地,。（即在99μl抗體稀釋液中加入1μl生物素檢測抗體。）

4,、法制備辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素的共軛（SABC）工作的解決方案：
準(zhǔn)備在30min,，之前的實(shí)驗(yàn),。
1）calculate總卷在工作的解決方案：0.1毫升/（×）井的數(shù)量。（allow
0.1～0.2毫升以上的總卷）
2）的稀釋SABC用SABC稀釋緩沖AT 1∶100和thoroughly混音,。（即增加1μL,，SABC法檢測
激情99μL，SABC法檢測稀釋緩沖）,。
檢測程序
在增的井,，equilibrate SABC法對工作液和底物TMB方法至少30
在小的房間的溫度（37°C）。當(dāng)diluting樣品和reagents,，他們必須是混合
*和evenly,。。,。,。。,。,。這是推薦的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖A for each試驗(yàn)。
1,。的標(biāo)準(zhǔn)集,，測試樣本和控制（零）井的預(yù)涂板分別為，和
然后,，記錄他們的位置,。這是推薦的測量的標(biāo)準(zhǔn)和樣品中的每
重復(fù)的。洗板2時代前的綜合標(biāo)準(zhǔn),，抽樣和控制（零）井?。。,。,。。,?！
2。aliquot 0.1ml（100ng／ml,，50ng／ml,，25ng /毫升，12.5ng /毫升,，6.25ng /毫升,，3.125ng /毫升，1.56ng /毫升,，
標(biāo)準(zhǔn)溶液的入井的標(biāo)準(zhǔn),。
3,。添加0.1毫升/標(biāo)準(zhǔn)樣品的稀釋緩沖的激情控制（零）的話。
4,。添加0.1毫升恰當(dāng)稀疏抽樣（人體血清,、血漿、組織勻漿和其他
生物流體的熱情,。）抽樣試驗(yàn)井,。
5。,。,。。,。,。。該密封板與A和incubate覆蓋在37°C為90分鐘,。
6,。remove的封面上，必須在內(nèi)容和板,，洗板和2與華盛頓時報(bào)的緩沖。
不要讓井干式化外,，在任何時間,。
7。添加0.1毫升的生物素標(biāo)記的檢測抗體工作液入井（以上的標(biāo)準(zhǔn),，
試驗(yàn)樣品與零井）,。添加的溶液，在底部每井無接觸加熱的
側(cè)壁,。
8,。該密封板與A和incubate覆蓋在37°C（60分鐘。
9,。remove的封面,，和洗板3時代與洗的緩沖。
10,。添加0.1毫升,，SABC法檢測溶液工作熱情，每孔,，在蓋板和incubate在37°C的方法
30分鐘,。
11。remove的覆蓋和洗板5與華盛頓時報(bào)的緩沖,，和每一次讓洗
緩沖停留在井的方法1～2分鐘,。
12,。添加90μL（TMB底物的熱情，每孔,，在蓋板和incubate 37°C,，在黑暗的.
在15到30分鐘。（注：這incubation時參考使用的方法是只讀的,，優(yōu)化的時
應(yīng)該由用戶端的決心,。）和shades藍(lán)可以在個3～4口井
（與集中的標(biāo)準(zhǔn)溶液中OAS1），其他井秀好obvious色彩,。
13,。。,。,。。,。,。添加50μL大學(xué)停止溶液的熱情和thoroughly每好的混合。激情黃色顏色的變化
立即,。
14,。讀《absorbance外徑在450 nm的微孔板讀者立即后的增
停止的溶液。

注：如果測量的樣品被稀釋,，將稀釋系數(shù)乘以濃度,。
從插值得到稀釋前的濃度。
總結(jié)
1,。在添加標(biāo)準(zhǔn),、樣品和控制（零）井之前，清洗2次平板,！
2,。在37°C下向每個孔中添加100μl標(biāo)準(zhǔn)或樣品90分鐘。
三,。在37°C下每孔加入100μL生物素檢測抗體工作液60分鐘,。
4。吸洗3次
5,。每口井加入100μL SABC工作液,。在37°C下培養(yǎng)30分鐘
6。吸洗5次
7,。添加90μl TMB基板,。在37°C下培養(yǎng)15-30分鐘
8。加入50μl停止溶液,。立即在450牛米處讀取
9,。計(jì)算結(jié)果
典型數(shù)據(jù)和標(biāo)準(zhǔn)曲線
OAS1酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒的典型標(biāo)準(zhǔn)運(yùn)行結(jié)果如下所示,。這個標(biāo)準(zhǔn)曲線是
在實(shí)驗(yàn)室生成，僅供演示,。每個用戶都應(yīng)該獲得自己的標(biāo)準(zhǔn)
按實(shí)驗(yàn)曲線,。（不適用）

特異性
該方法靈敏度高，對OAS1的檢測有很好的特異性,。未觀察到OAS1與類似物之間存在明顯的交叉反應(yīng)或干擾,。
注：受現(xiàn)有技能和知識的限制，我們無法完成OAS1與所有類似物之間的交叉反應(yīng)檢測,，因此交叉反應(yīng)可能仍然存在,。
恢復(fù)
下面列出的基質(zhì)中加入一定水平的OAS1，回收率為
通過將測量值與樣品中預(yù)期的OAS1量進(jìn)行比較計(jì)算,。

線性度
通過加入適當(dāng)濃度的
OA1及其系列稀釋劑,。通過計(jì)算的百分比來證明結(jié)果。
集中到預(yù)期

精密度
分析內(nèi)精密度（分析內(nèi)精密度）：低,、中,、高3個樣品
分別在一個平板上測試OAS1 20次。
分析間精密度（分析間精密度）：低,、中,、高3個樣品
在3個不同的平板上測試OAS1，每個平板上重復(fù)8次,。
cv（%）=sd/平均x100
內(nèi)分析：cv<8%
化驗(yàn)間：CV<10%
穩(wěn)定性
酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒的穩(wěn)定性取決于活性損失率,。這個工具的損耗率比較低
在適當(dāng)?shù)膬Υ鏃l件下，在有效期內(nèi)不得超過10%,。

為了盡量減少對性能、操作程序和實(shí)驗(yàn)室條件的額外影響,，
尤其要嚴(yán)格控制室溫,、空氣濕度、培養(yǎng)箱溫度,。
也強(qiáng)烈建議由同一個操作員從
從開始到結(jié)束,。