內(nèi)切糖苷酶

- 內(nèi)切
糖苷酶從清潔制劑中的糖蛋白 - 高度穩(wěn)定的酶切割完整的聚糖 - 不含甘油,，NaCl或其他添加劑,，如EDTA,。
- 測試所有酶不存在蛋白水解或意外的糖苷活性

內(nèi)切糖苷酶是用于分析糖蛋白的廣泛使用的酶,。這些酶從糖蛋白釋放完整的聚糖,，而外切糖苷酶釋放單個單糖（即唾液酸,，半乳糖,，β-N-乙酰基葡糖胺,，甘露糖等）,。

PNGase F通常包含在酶組中，因為其切割完整的N-連接聚糖的活性相似,，盡管它實際上是酰胺酶,。它在天冬酰胺氨基酸和N-連接聚糖的殼二糖核心的個β-N-乙酰葡糖胺糖（GlcNAc）之間切割。Endo F酶和Endo H在和第二GlcNAc之間切割N-連接的聚糖,，留下帶電荷的殘基,，其有助于增加去糖基化蛋白質(zhì)的溶解度，降低蛋白質(zhì)聚集體沉淀的可能性,。PNGase F切割所有N-連接的聚糖,，而Endo H和Endo F酶切除特定類型的N-連接聚糖。

酶的這種分類還包括O-糖苷酶,，其從絲氨酸或蘇氨酸氨基酸中除去核心1O-連接的聚糖（Galβ1,3GalNAcα）,。O-連接的聚糖通常含有在分支和線性連接中與半乳糖連接的另外的單糖,，需要使用外切糖苷酶如唾液酸酶和半乳糖苷酶來除去額外的糖。

qa-bio E-RPNG01說明書

重組PNGase F.

來自Elizabethkingia miricola的重組PNGase F.

部件號 - 酶
E-RPNG01的量 - 60μLs¹E 
-RPNG01-20 - 20μls¹E 
-RPNG01-200 - 200μls²¹ 
  包括緩沖液,，變性劑和Triton- 
  X²僅包括酶

PNGase F,，肽N糖苷酶F，N-糖苷酶,，N-聚糖酶

從含有Elizabethkingia miricola基因的克隆的大腸桿菌菌株中分離重組PNGase F. 來自天然酶（E-PNG01）的重組酶的活性或比活性沒有可檢測到的差異,。

PNGase F從糖蛋白切割天冬酰胺連接的（N-連接的）寡糖。PNGase F將天冬酰胺脫氨基成天冬氨酸,，使寡糖保持完整,。變性使裂解率提高到100倍。大多數(shù)天然蛋白質(zhì)仍然可以*N-去糖基化,，但必須增加孵育時間,。PNGase F將在孵育條件下保持活性至少72小時。PNGase F不會去除通常在植物糖蛋白上發(fā)現(xiàn)的含有α-（1,3） - 連接的核心巖藻糖的寡糖; 為此目的,，使用肽N-糖苷酶A.

PNGase F源自Elizabethkingia miricola的大腸桿菌重組PNGase F基因

EC 3.5.1.52

內(nèi)容
的重組PNG酶F（0.3 U）在20mM的Tris-HCl,，pH 7.5中60微升等分試樣
包括用20μL和60μL包尺寸
5倍PNG酶?F反應(yīng)緩沖液7.5 PNG酶的F - 250 mM磷酸鈉，pH 7.5中
PNG酶?F變性溶液 - 2％SDS,，
1Mβ- 巰基乙醇PNGase F Triton X-100-15％溶液

比活力 > 25 U / mg

活性 5U / ml

分子量 36,000道爾頓

PNGase F 6-10的pH范圍,，宜7.5

PNGase F建議用法
1.在Eppendorf管中加入多200μg的糖蛋白。用去離子水調(diào)節(jié)至35μl終體積,。
2.加入10μl5xPNGase F反應(yīng)緩沖液7.5和2.5μlPNGaseF變性溶液,。在100?C加熱5分鐘。
很酷,。加入2.5μlPNGaseF Triton X-100并混合,。
4.向反應(yīng)中加入2.0μlPNGaseF. 在37?C孵育3小時。

特異性 PNGase F從糖蛋白切割天冬酰胺連接的（N-連接的）寡糖,。PNGase F將天冬酰胺脫氨基成天冬氨酸,，使寡糖保持完整。變性使裂解率提高到100倍,。大多數(shù)天然蛋白質(zhì)仍然可以*N-去糖基化,，但必須增加孵育時間。PNGase F將在孵育條件下保持活性至少72小時,。PNGase F不會去除通常在植物糖蛋白上發(fā)現(xiàn)的含有α-（1,3） - 連接的核心巖藻糖的寡糖; 為此目的,，使用肽N-糖苷酶A.

比活度定義為在37℃，pH7.5下,，在1分鐘內(nèi)催化從1微摩爾RNase B釋放N-連接寡糖所需的酶量,。通過SDS-PAGE監(jiān)測切割（切割的RNase B遷移更快）。

儲存酶儲存在4?C,。