qa-bio E-PNG01說(shuō)明書(shū)

PNGase F.

PNGase F從糖蛋白切割N-連接（天冬酰胺連接的）寡糖,。

產(chǎn)品編號(hào) - 酶的量
E-PNG01 - 60μLs¹

E -PNG01-20 - 20μLs¹

E -PNG01-200 - 200μls²（以前的E-PNG05）
   ¹包括緩沖液,，變性劑和Triton- 
   X²僅含酶

PNGase F,，肽N糖苷酶F,，N-糖苷酶,，N-聚糖酶

PNGase F從糖蛋白切割N-連接（天冬酰胺連接的）寡糖,。該酶將天冬酰胺脫氨基成天冬氨酸，使寡糖保持完整,。變性增加了解理速率,。大多數(shù)天然蛋白質(zhì)仍然可以*N-去糖基化，但必須增加孵育時(shí)間,。酶在反應(yīng)條件（37℃）下保持*活性至少96小時(shí),。PNGase F不會(huì)去除通常在植物糖蛋白上發(fā)現(xiàn)的含有α-（1,3） - 連接的核心巖藻糖的寡糖; 為此目的，使用肽N-糖苷酶A.

有許多替代酶可用于去除N-聚糖，特別是Endo F家族的酶和Endo H.這些酶切割寡糖核心中的兩個(gè)N-乙酰氨基葡萄糖殘基,，產(chǎn)生截短的糖在天冬酰胺上殘留一個(gè)N-乙酰氨基葡萄糖殘基的分子,。這留下帶電荷的糖，其可以幫助將蛋白質(zhì)保持在溶液中,，所述溶液在用PNGase F去糖基化后沉淀,，其去除了完整的寡糖。Endo F1切割高甘露糖和一些雜合型N-聚糖,。Endo F2將去除雙觸角和高甘露糖（降低40倍速率）,。Endo F3釋放出triantennarry和巖藻糖基化的雙觸角N-聚糖。遠(yuǎn)藤H. 去除雜交或高甘露糖聚糖,。

來(lái)源 Elizabethkingia miricola（是Chryseobacterium meningosepticum）

EC 3.5.1.52 
PDB 1PGS 
UniProt Q9XBM8

內(nèi)容
PNG酶的F的20mM的Tris-HCl,，pH 7.5中

包含20μL和60μL包裝尺寸：
5x反應(yīng)緩沖液7.5 - 250 mM磷酸鈉，pH 7.5 
變性溶液 - 2％SDS,，1Mβ-巰基乙醇
Triton X-100 - 15％溶液

比活力 > 25 U / mg

活性 5U / ml

分子量 36,000道爾頓

pH范圍 6-10,，宜7.5

方案
1.在Eppendorf管中加入高達(dá)200μg的糖蛋白。用去離子水調(diào)節(jié)至35μl終體積,。
2.加入10μl5x反應(yīng)緩沖液7.5和2.5μl變性溶液,。在100°C加熱5分鐘。
很酷,。加入2.5μlTritonX-100并混合。
4.向反應(yīng)中加入2.0μl酶,。在37°C孵育3小時(shí),。

特異性切除所有天冬酰胺連接的復(fù)合物，雜交或高甘露糖寡糖,，除非α（1-3）核心巖藻糖基化; 天冬酰胺必須在兩個(gè)末端肽結(jié)合,，Endo F游離

比活性定義為在37℃，pH7.5下在1分鐘內(nèi)催化從1微摩爾變性的RNase B釋放N-連接的寡糖所需的酶量,。通過(guò)SDS-PAGE監(jiān)測(cè)切割（切割的RNase B遷移更快）,。

儲(chǔ)存在4°C儲(chǔ)存酶。