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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司

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haemtech HCII-0190說明書

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haemtech Haematologic Technologies,,Inc,。(HTI/haemtech)是一家ISO 9001:2015注冊公司,是一家專業(yè)從事體外研究用高質(zhì)量血漿蛋白分離和表征的主要制造商,。HTI的重點(diǎn)是凝血級聯(lián)中涉及的蛋白質(zhì),,以及骨代謝的調(diào)節(jié)。HTI產(chǎn)品系列包括超過150種高度純化和充分表征的蛋白質(zhì),,包括酶原,,酶,輔因子和抑制劑,,以及單克隆和多克隆抗體的互補(bǔ)系列,。還可提供因子缺乏的等離子體和定制的血液采集管,用于臨床研究,。提供的服務(wù)包括定制蛋白質(zhì)純化,,蛋白質(zhì)修飾,化驗(yàn)開發(fā),,合同制造和合同研究,。

haemtech HCII-0190說明書

Human Heparin Cofactor II

人肝素輔助因子II

肝素輔因子II抑制凝血酶
凝血酶(IIa),,肝素(HEP)和肝素輔因子II(HCII)通過隨機(jī)順序雙反應(yīng)機(jī)制相互作用形成三元復(fù)合物。隨著凝血酶與肝素輔助因子II形成共價(jià)復(fù)合物,,肝素隨后從復(fù)合物解離,。

 

HCII-0190 Human Heparin Cofactor II

Size

100µg

Formulation

50% (vol/vol) Glycerol/H2O

Molecular Weight

 

 

Storage

-20°C

Purity

>95% by SDS-PAGE

Compound

 

 

Assay

Thrombin inhibition

Shelf Life (properly stored)

12 months

Chemical Formula

 

 

肝素輔助因子II(HCII)(肝素輔助因子A,抗凝血酶BM,,硫酸皮膚素輔因子,,人類leuserpin-2)是絲氨酸蛋白酶抑制劑(絲氨酸蛋白酶抑制劑)家族的單鏈糖蛋白(Mr = 65,600,10%碳水化合物)成員(1- 3)。肝素輔因子II的氨基酸序列分析顯示3個(gè)潛在的N-糖基化位點(diǎn)和2個(gè)位于NH2-末端附近的7個(gè)殘基的兩個(gè)內(nèi)部重復(fù)的硫酸化酪氨酸(4-6),。血漿濃度估計(jì)為90μg/ ml(2),。

在凝血級聯(lián)中,肝素輔助因子II通過在存在(k2 = 4.5×10 8 M -1 min -1)和不存在(k2 = 5.0×10 5 M -1 min -1)的情況下形成雙分子復(fù)合物來抑制凝血酶,。)肝素(2,7-9),。這種復(fù)合物對變性劑是穩(wěn)定的并且基本上是不可逆的。除肝素外,,多種多陰離子化合物可加速HCII對凝血酶的抑制作用(3),。在這些化合物中值得注意的是硫酸皮膚素,,其加速HCII對凝血酶的抑制,,但不加速抗凝血酶III(1,6)。該特征已被用于開發(fā)特異于肝素輔助因子II的基于血漿的測定,。盡管HCII與其他serpins僅顯示約25%的序列同源性,,但凝血酶抑制時(shí)釋放的反應(yīng)位點(diǎn)肽(COOH-末端36個(gè)氨基酸)與凝血酶從抗凝血酶III(AT III)釋放的反應(yīng)位點(diǎn)肽同源性為53%(4,9) )。HCII中的易斷裂鍵是Leu-Ser,,這對于精氨酸特異性蛋白酶抑制劑是不常見的(4,9),。與AT III相比,HCII抑制的僅有凝血蛋白酶是凝血酶,,HCII抑制的其他蛋白酶包括α-胰凝乳蛋白酶,,中性粒細(xì)胞組織蛋白酶G和灰色鏈霉菌蛋白酶B(3)。肝素輔助因子II的主要生理作用可能仍有待發(fā)現(xiàn),。

通過修改Griffith等人的方法(9),,從新鮮冷凍血漿制備肝素輔助因子II。在SDS PAGE上評估純度,,并且基于在肝素存在下的凝血酶抑制來確定活性,。HCII以50%(體積/體積)甘油/ H 2 O供應(yīng),在-20℃下儲存,。

 

 

凝膠

Novex 4-12%Bis-Tris

加載

人肝素輔助因子II,,每泳道1μg

緩沖

MOPS

標(biāo)準(zhǔn)

SeeBluePlus 2; 肌球蛋白(191 kDa),磷酸化酶B(97 kDa),,BSA(64 kDa),,谷氨酸脫氫酶(51 kDa),,酒精脫氫酶(39 kDa),碳酸酐酶(28 kDa),,肌紅蛋白紅(19 kDa),,溶菌酶(14 kDa的)

本土化

等離子體

血漿濃度

90μg/ ml(2)

行動方式

絲氨酸蛋白酶抑制劑; 抑制凝血酶,α-胰凝乳蛋白酶,,中性粒細(xì)胞組織蛋白酶G,,灰色鏈霉菌蛋白酶B

分子量

65,600(2)

消光系數(shù)

Ë

1%

1厘米,280納米

 

= 5.93(5)

 

等電點(diǎn)

4.95-5.15(2)

結(jié)構(gòu)體

單鏈糖蛋白,,3個(gè)潛在的N-糖基化位點(diǎn),,兩個(gè)7-氨基酸殘基重復(fù)序列,反應(yīng)位點(diǎn)序列:TVTTVGFMPL-STQVRFTVDR(4)

碳水化合物百分比

9.9%(2)

翻譯后修改

3硫酸化酪氨酸

 

參考

  1. Bringinshaw,,GW和Shanberge,,JM,Arch,。生物化學(xué),。Biophys。,,161,683(1974),。
  2. Tollefsen,DM,,et al,。,J.Biol.Chem,。Chem,。,257,2162(1982),。
  3. Pratt,,CW,et al,。,,Ann。紐約阿卡德,。Sci,。,556,104(1989),。
  4. Ragg,,H.,Nucleic Acids Res,。,,14,1073(1986),。
  5. Church,F(xiàn)C,,et al,。,Arch,。生物化學(xué),。Biophys。,,259,331(1987),。
  6. Hortin,G.,,et al,。,J.Biol,。Chem,。,261,15827(1986),。
  7. Church,,F(xiàn)C,et al,。,,Proc,。國家科,。科學(xué)院,??茖W(xué)。美國,,82,6431(1985),。
  8. Tollefsen,DM和Blank,,MK,,J。Clin,。Invest,。,68,589(1981),。
  9. Griffith,,MJ,,et al。,,J.Biol,。Chem。,,260,2218(1985),。
  10. Tollefsen,DM,,et al,。,J.Biol.Chem,。Chem,。,258,6713(1983),。
  11. 格里菲斯,,MJ和Marbet,GA,,Biochem,。生物物理學(xué)。RES,。Comm,。,112,663(1983),。
  12. Abildgaard,,U。和Larsen,,ML,,Thromb。Res,。,,35,257(1984)。
  13. Griffith,,MJ等,,Biochemistry,24,6777(1985),。
  14. Parker,,K。和Tollefsen,,DM,,J.Biol,。Chem。,,260,3501(1985),。

 

 

出版物

  1. Monteiro,R.,,et al,。,Biochem,。J.(2005)387,871-877,。(凝血酶原激活)
  2. Reis,C.,,et al,。,Biochem,。J.(2006)398,295-302(凝血酶原激活)

 

 

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