ALSTEM是一家位于灣區(qū)的早期生物技術(shù)公司，擁有快速擴展的產(chǎn)品和服務組合,，為生物制藥和學術(shù)機構(gòu)提供服務,。受到加利福尼亞干細胞研究承諾的啟發(fā)，ALSTEM于2012年由具有iPS細胞重編程和基因組編輯技術(shù)專業(yè)知識的科學家創(chuàng)立,。

NanoFect轉(zhuǎn)染試劑：＃NF100

產(chǎn)品描述

NanoFect Transfection Reagent是一種*的聚合物混合物,，與的脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑盒相比，可以更低的成本向細胞提供更多的DNA和siRNA,。NanoFect™是一種功能強大,，適用范圍廣泛的轉(zhuǎn)染試劑，可有效,，可重復轉(zhuǎn)染,。

• 概觀
• 程序

NanoFect試劑在DNA和RNA存在下自組裝納米顆粒,。這些復合物很容易被靶細胞吸收，從而有效地進行基因遞送,。由于NanoFect在抗生素和血清存在下起作用,，因此無需更換培養(yǎng)基。這種易于使用的方案,，在直接添加到靶細胞之前快速一步孵育15分鐘,，使NanoFect非常適合高通量轉(zhuǎn)染實驗。

為了高轉(zhuǎn)染效率和低毒性,，以高密度轉(zhuǎn)染細胞,。建議使用50-80％的融合度。

細胞應在轉(zhuǎn)染前18至24小時接種,，以使細胞密度在轉(zhuǎn)染時達到50~80％匯合,。在轉(zhuǎn)染前2小時，向每個孔中新鮮加入含有血清和抗生素的*培養(yǎng)基,。

以下方案用于在24孔板中轉(zhuǎn)染,，參見表1用于其他培養(yǎng)形式的轉(zhuǎn)染。

1.對于每個孔,，在轉(zhuǎn)染前2小時新鮮加入0.5ml正常生長培養(yǎng)基（抗生素不影響結(jié)果）,。

2.對于每個孔，在50μl不含血清的DMEM中稀釋0.5μgDNA,，并輕輕混合,。

3.將1μlNanoFect試劑加入另一個含有50μl不含血清的DMEM的試管中，輕輕混勻,。

4.將NanoFect / DMEM添加到DNA / DMEM溶液中,。通過渦旋混合5-10秒。

5.在室溫下孵育約15分鐘,，以使NanoFect / DNA復合物自組裝,。

6.將100μlNanoFect/ DNA混合物逐滴添加到每個孔中的細胞中，并通過輕輕旋轉(zhuǎn)平板使其均質(zhì)化,。

7.將平板放回細胞培養(yǎng)箱中,。

8.轉(zhuǎn)染后24至48小時檢查轉(zhuǎn)染效率。

表1.不同文化的推薦量

注意：對于不同的細胞類型,，NanoFect（μL）：DNA（μg）的適合比例約為3：1,。我們建議將NanoFect（μL）：DNA（μg）比例為2：1作為起點,，通常可以提供令人滿意的轉(zhuǎn)染效率和不可見的細胞毒性,，但NanoFect的量可以從2到4μl/μgDNA調(diào)整,，具體取決于要轉(zhuǎn)染的細胞系。為確保NanoFect / DNA復合物顆粒的宜尺寸,，我們建議使用含有高葡萄糖的無血清DMEM稀釋DNA和NanoFect Reagent。

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