ALSTEM是一家位于灣區(qū)的早期生物技術(shù)公司,，擁有快速擴(kuò)展的產(chǎn)品和服務(wù)組合，為生物制藥和學(xué)術(shù)機(jī)構(gòu)提供服務(wù),。受到加利福尼亞干細(xì)胞研究承諾的啟發(fā),，ALSTEM于2012年由具有iPS細(xì)胞重編程和基因組編輯技術(shù)專(zhuān)業(yè)知識(shí)的科學(xué)家創(chuàng)立。

hTERT Cell Immortalization Kit: #CILV02

hTERT細(xì)胞永生化試劑盒：＃CILV02

描述

*,，原代細(xì)胞僅在培養(yǎng)中經(jīng)歷預(yù)定的和有限數(shù)量的細(xì)胞分裂,。在有限的群體倍增（其數(shù)量因物種，細(xì)胞類(lèi)型和培養(yǎng)條件而異）之后,，原代細(xì)胞進(jìn)入一種狀態(tài),，即所謂的復(fù)制衰老,，它們不再分裂,。為了超越衰老，存在幾種使培養(yǎng)中的哺乳動(dòng)物細(xì)胞永生化的方法,。近發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞永生化方法是通過(guò)端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶蛋白（TERT）的表達(dá),。它對(duì)受端粒長(zhǎng)度影響大的細(xì)胞特別有用，包??括許多人類(lèi)細(xì)胞類(lèi)型,。這種蛋白質(zhì)通常在大多數(shù)體細(xì)胞中沉默,。當(dāng)外源引入hTERT時(shí)，這些細(xì)胞能夠通過(guò)維持足夠的端粒長(zhǎng)度來(lái)避免復(fù)制性衰老,。

• 概觀

用含有hTERT的重組慢病毒感染細(xì)胞,，用嘌呤霉素篩選產(chǎn)生自己的永生化細(xì)胞

• 程序

1. 將靶細(xì)胞以1-2×10 ^5個(gè)細(xì)胞/孔的密度鋪在6孔板的一個(gè)孔中。
2. 第二天,，將濃縮的重組慢病毒在37℃水浴中解凍,，并在解凍時(shí)立即將其從浴中取出。
3. 在4μlTransPlus試劑（ALSTEM,，目錄號(hào)V050）存在下,，用4-20μl/孔上清液感染6孔板中的靶細(xì)胞。
   注意：TransPlus試劑是一種聚陽(yáng)離子,，可中和電荷相互作用,，從而增加假病毒衣殼與細(xì)胞膜之間的結(jié)合。
4. 第二天,，去除病毒上清液并將適當(dāng)?shù)?生長(zhǎng)培養(yǎng)基加入細(xì)胞中并在37℃下孵育,。
5. 孵育72小時(shí)后，將細(xì)胞繼代培養(yǎng)到2×100mm培養(yǎng)皿中并加入適量的嘌呤霉素以穩(wěn)定細(xì)胞系產(chǎn)生,。
6. 選擇后10-15天,，挑選克隆進(jìn)行擴(kuò)增，篩選陽(yáng)性克隆,。
   注意：解凍后,，我們建議不要將上清液再次冷凍以備將來(lái)使用，因?yàn)椴《镜味葧?huì)顯著下降

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