使用PNA miRNA抑制劑的方案

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上海起發(fā)實驗試劑有限公司
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PNA BIO INC致力于為基礎(chǔ)研究和應(yīng)用領(lǐng)域的實驗室提供的研究產(chǎn)品和服務(wù),。

PNA Bio提供PNA（Peptide Nucleic Acid）產(chǎn)品，包括定制寡核苷酸,，F(xiàn)ISH探針,，miRNA抑制劑，PNA鉗夾探針和Fmoc單體,。HPLC純化后,，它們與MS / MS數(shù)據(jù)一起提供> 95％的純度。PNA產(chǎn)品由Panagene制造,。

PNA Bio還提供工程化核酸酶服務(wù),，包括CRISPR / Cas9核酸酶（RGEN）合成，驗證和Cas9蛋白以及敲除和敲入細胞系服務(wù),。

PNATM miRNA抑制劑 PNA miRNA Inhibitors

由于PNA比DNA或RNA更強地結(jié)合互補RNA,，因此相對于基于RNA / DNA的miRNA抑制劑，它提供了更高的活性,。此外,，PNA miRNA抑制劑與細胞穿透肽（CPP）結(jié)合，使其無需轉(zhuǎn)染試劑即可進入細胞,。
已經(jīng)顯示PNA miRNA抑制劑的使用是體內(nèi)有價值的工具,。

主要特征

PNAs™miRNA抑制劑具有高度序列特異性

可以在不使用轉(zhuǎn)染試劑的情況下使用PNAs TM miRNA抑制劑

PNAs™miRNA抑制劑在細胞中具有長的半衰期，長達14天

PNAs™miRNA抑制劑具有抗性和非常穩(wěn)定的細胞核酸酶

PNAs™miRNA抑制劑沒有細胞毒性

目錄號	描述	尺寸
PI - XXXX - 10	PNAs™miRNA抑制劑	10納摩爾
PI - XXXX - 25	PNAs™miRNA抑制劑	25納摩爾
PN - 1001 - 10	PNAs™miRNA抑制劑陰性對照	10納摩爾
PN - 1001 - 25	PNAs™miRNA抑制劑陰性對照	25納摩爾
PI - XXXX - FAM	PNAs™miRNA抑制劑	5納摩爾
PN - 1001 - FAM	PNAs™FAM - 標(biāo)記為陰性對照	5納摩爾

使用PNA miRNA抑制劑的方案

PNATM miRNA抑制劑是針對成熟形式的miRNA而設(shè)計的,。由于pna相對于dna具有較好的親和力和特異性,，是一種理想的分子生物學(xué)工具。證明miRNA作為一種抗感試劑的作用,。

我們的PNATM miRNA抑制劑與細胞穿透肽結(jié)合,，只需將其添加到培養(yǎng)基中即可進入細胞。使用轉(zhuǎn)染試劑可促進穿透,。 miRNA抑制劑進入細胞,。一般情況下，4~6小時后,，細胞內(nèi)可見PNA miRNA抑制劑,。大效應(yīng)出現(xiàn)在24~48小時之間。因為PNA對核酸酶和Pr都有抗性抑制作用持續(xù)一周以上。

PNA miRNA抑制劑的治療

細胞電鍍

1.轉(zhuǎn)染前1d,，種子5.0×104細胞在0.5ml中接種24孔板,，1.5×105細胞在1.5ml中接種6孔板，在合適的*培養(yǎng)基中不加抗生素,。

在一夜之間培養(yǎng)細胞

PNA miRNA抑制劑的制備

順著含有miRNA抑制劑的管子旋轉(zhuǎn),。

在125升UL水溶液中，用50μL水或25毫摩爾回流10毫摩爾管,，制成200μm原料,。如果不*溶解，在60℃加熱5min,。

商店里-70華氏度,。

PNA miRNA抑制劑如果保存得當(dāng)，其溶液應(yīng)穩(wěn)定在1年以上,。

miRNA抑制劑的治療

(選項)將每口井的培養(yǎng)基替換為優(yōu)選培養(yǎng)基,，如OPTIMEM或*不含抗生素的培養(yǎng)基。

在60℃下加熱PNA miRNA抑制劑10 min,。

在OPTI-MEM中制備miRNA抑制劑混合物,，用或不加轉(zhuǎn)染試劑孵育15 min。

*在有轉(zhuǎn)染試劑的情況下,，miRNA抑制劑的推薦濃度為0.2~0.5μm(每200 ul培養(yǎng)基0.5ul),，或1~2μm未轉(zhuǎn)染試劑。

向細胞中加入miRNA混合物,。

細胞孵育48小時,。

*宜條件將由用戶根據(jù)經(jīng)驗確定。

實時PCR評價

從培養(yǎng)的細胞中去除生長培養(yǎng)基,。

根據(jù)制造商的指示,，分別使用PureLink™RNA試劑盒或miRNA分離試劑盒(LifeTechnologies)從樣品中提取總RNA或miRNA,。

**不使用TrIZOL進行總RNA提取,，因為PNA-miRNA復(fù)合物被TrIZOL解離。

三,。使用TaqMan®microRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒（Apple BioSosits）進行10 ng總RNA或miRNA的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),。TaqMan®Unvior的實時PCR反應(yīng) AL PCR碩士混合（應(yīng)用生物系統(tǒng)）根據(jù)制造商的指示,。

參考

Oh SY et al. (2010) PNA-based antisense oligonucleotides for micrornas inhibition in the absence of a transfection reagent. Oligonucleotides 20(5):225-30.

Fabbri E et al. (2011) Modulation of the Biological Activity of microRNA-210 with Peptide Nucleic Acids (PNAs). Chem Med Chem 6(12):2192-2202.

Jiang L et al. (2011) Identification and experimental validation of G protein alpha inhibiting activity polypeptide 2(GNAI2) as a microRNA-138 target in tongue squamous cell carcinoma. Hum Genet 129(2):189-97

Gaglione M et al. (2011) PNA-based artificial nucleases as antisense and antimiRNA oligonucleotide agents. Mol Biosyst 7(8):2490-9

Pnabio 部分產(chǎn)品列表

貨號	品名	規(guī)格		品牌
CP01-20	Reconstitutes to 1 mg/ml, 120 pmol (6 uM x 20 ul)	20 ug		pnabio
CP01-50	Reconstitutes to 1 mg/ml, 300 pmol (6 uM x 50 ul)	50 ug		pnabio
CP01-200	Reconstitutes to 1 mg/ml, 1200 pmol (6 uM x 200 ul)	200 ug (50 ug x 4)		pnabio
CP02	Reconstitutes to 5 mg/ml, 1530 pmol (30 uM x 50 ul)	250 ug		pnabio
CP03	Reconstitutes to 5 mg/ml, 6000 pmol (30 uM x 50 ul x 4 tubes)	1 mg (250 ug x 4)		pnabio
CP04-100	Liquid form 1 mg/ml, 600 pmol (6 uM x 20 ul x 5 tubes)	100 ug (20 ug x 5)		pnabio
CP04-500	Liquid form 5 mg/ml, 3000 pmol (30 uM x 20 ul x 5 tubes)	500 ug (100 ug x 5)		pnabio
CN01	Reconstitutes to 1 mg/ml, 300 pmol (6 uM x 50 ul)	50 ug		pnabio
CN02	Reconstitutes to 5 mg/ml,1530 pmol (30 uM x 50 ul)	250 ug		pnabio
CD01	Reconstitutes to 1 mg/ml, 300 pmol (6 uM x 50 ul)	50 ug		pnabio
CD02	Reconstitutes to 5 mg/ml,1530 pmol (30 uM x 50 ul)	250 ug		pnabio
F1001	C-rich telomere probe, FAM labeled	5 nmole		pnabio
F1002	C-rich telomere probe, Cy3 labeled	5 nmole		pnabio
F1003	C-rich telomere probe, Cy5 labeled	5 nmole		pnabio
F1004	C-rich telomere probe, Alexa Fluor 488 labeled	5 nmole		pnabio
F1005	G-rich telomere probe, FAM labeled	5 nmole		pnabio
F1006	G-rich telomere probe, Cy3 labeled	5 nmole		pnabio
F1007	G-rich telomere probe, Cy5 labeled	5 nmole		pnabio
F1008	G-rich telomere probe, Alexa Fluor 488 labeled	5 nmole		pnabio
F1009	C-rich telomere probe, FITC labeled	5 nmole		pnabio
F1010	G-rich telomere probe, FITC labeled	5 nmole		pnabio
F1013	C-rich telomere probe, Alexa Fluor 647 labeled	5 nmole		pnabio
F1014	G-rich telomere probe, Alexa Fluor 647 labeled	5 nmole		pnabio
F1020	TelC probe for arthropods, Alexa Fluor 488 labeled	5 nmole		pnabio
F2001	C-rich telomere probe, Biotin labeled	5 nmole		pnabio
F3001	Centromere probe, FAM labeled	5 nmole		pnabio
F3002	Centromere probe, Cy3 labeled	5 nmole		pnabio
F3005	Centromere probe, Cy5 labeled	5 nmole		pnabio
F3004	Centromere probe, Alexa Fluor 488 labeled	5 nmole		pnabio
F3008	Centromere probe, Biotin labeled	5 nmole		pnabio
F3003	Centromere probe, Cy3 labeled	5 nmole		pnabio
F3006	Centromere probe, FAM labeled	5 nmole		pnabio
F5001	CAG repeats, Cy3 labeled	5 nmole		pnabio
G2001-3	A set of 4 PNA oligos against human globin,	3 nmole		pnabio
G2001-10	A set of 4 PNA oligos against human globin	10 nmole		pnabio
MP01-25	ggcaagtgttcttcgga	25 nmole		pnabio
MP01-50	ggcaagtgttcttcgga	50 nmole		pnabio
PP01-25	ggctcaaccctggacag	25 nmole		pnabio
PP01-50	ggctcaaccctggacag	50 nmole		pnabio
RV01	Surrogate reporter vector with GFP for FACS	5 ug		pnabio
RV02	Surrogate reporter vector with GFP and H2KK for MACS	5 ug		pnabio
RV03	Surrogate reporter vector with GFP and Hygromycin-R	5 ug		pnabio
CV01	Cas9 co-transfection vector (CMV promoter)	5 ug		pnabio
CV02	Cas9, Hygromycin R, and GFP expression vector (CMV promoter)	5 ug		pnabio
CV03	Cas9, RFP, puromycin R expression vector (CMV promoter)	5 ug		pnabio
CV11	Cas9 co-expression vector (EF1a promoter)	5 ug		pnabio
CV12	Cas9, Hygromycin R, and GFP expression vector (EF1a promoter)	5 ug		pnabio
CV13	Cas9, RFP, and Puromycin R expression vector (EF1a promoter)	5 ug		pnabio
FMA-1001	Fmoc-A(Bhoc)-aeg-OH	1 g / 2 g	pnabio
FMG-1001	Fmoc-G(Bhoc)-aeg-OH	1 g / 2 g	pnabio
FMC-1001	Fmoc-C(Bhoc)-aeg-OH	1 g / 2 g	pnabio
FMT-1001	Fmoc-T-aeg-OH	1 g / 2 g	pnabio
FMO-1001	Fmoc-AEEA-OH	1 g / 2 g	pnabio
PNAC-1002	PNAClamp KRAS Kit (v2)	30 tests	pnabio
PNAC-1003	PNAClamp KRAS Kit (v3)	25 tests	pnabio
PNAC-1004	PNAClamp KRAS Kit (plus)	25 tests	pnabio
PNAC-1006	PNAClamp KRAS Kit (v4)	25 tests	pnabio
PNAC-1101	PNAClamp NRAS Kit (v4)	25 tests	pnabio
PNAC-2001	PNAClamp BRAF Kit	50 tests	pnabio
PNAC-3002	PNAClamp EGFR Kit	25 tests	pnabio
PNAC-4002	PNAClamp PIK3CA Kit	25 tests	pnabio
PNAC-5001	PNAClamp IDH1 Kit	25 tests	pnabio

上海起發(fā)實驗試劑有限公司是實驗試劑一站式采購服務(wù)商

1：強大的進口輻射能力，血清,、抗體,、耗材、大部分限制進口品等,。

2：產(chǎn)品種類齊全,，經(jīng)營超過700多品牌,，基本涵蓋所有生物實驗試劑耗材。

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