膠原酶背景介紹

膠原酶的化學(xué)名為膠原蛋白水解酶（Collagenase）,，它能在生理PH和溫度條件下特異性地水解天然膠原蛋白的三維螺旋結(jié)構(gòu)，而不損傷其它蛋白質(zhì)和 組織,。膠原酶的化學(xué)本質(zhì)是一種蛋白質(zhì),，因此，這對(duì)溫度,、PH和導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性的各種因素均非常敏感,，極易受到外界條件的影響而改變其本身的構(gòu)象和性質(zhì)。

膠原酶（collagenase）是從溶組織梭狀細(xì)胞芽孢桿菌提取制備的,，主要水解結(jié)締組織中膠原蛋白成分,。當(dāng)擬消化的組織較硬，內(nèi)含較多結(jié)締組織或膠原 成分時(shí),，用胰蛋白酶解離細(xì)胞的效果較差,，這時(shí)可采用膠原酶解離細(xì)胞法。 膠原酶僅對(duì)細(xì)胞間質(zhì)有消化作用而對(duì)上皮細(xì)胞影響不大,。因此適于消化分離纖維性組織,、上皮及癌組織,，可使上皮細(xì)胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為zui終 濃度200U/ml（約為1mg/mL）或0.03%~0.3%,。膠原酶分為Ⅰ,、Ⅱ、Ⅲ,、Ⅳ,、Ⅴ型以及肝細(xì)胞膠原酶，要根據(jù)所要分離消化的組織類型選擇膠原酶類型,。

1、膠原酶Ⅰ用于上皮,、肺,，脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的分離。用于消化組織中連接部分使其成為單個(gè)細(xì) 胞,，用于哺乳動(dòng)細(xì)胞的分離,。

　　2、膠原酶Ⅱ適用于肝臟,，骨,，甲狀腺，心臟和唾液腺組織,。

　　3,、膠原酶Ⅳ包含至少7種蛋白酶成分，分子量從68-130KD不等,。它能消化多種組織,。

4、膠原酶Ⅴ包含至少7種蛋白酶成分,，分子量從68-130KD不等,。它可用于胰腺小島組織的分離，將結(jié)締組織分離成單個(gè)細(xì)胞,。

膠原酶的配置：

　　膠原酶溶液同胰蛋白酶一樣配制,、消毒滅菌和儲(chǔ)藏。

　　注意：

　　因?yàn)棰裥湍z原酶分子顆粒比胰酶大,，不容易過濾,，因此可以用蔡式濾器過濾除菌。

　　鈣,、鎂離子和血清成分不會(huì)影響膠原酶的消化作用,，因而可用BSS（如D-hanks或者PBS）或含血清的培養(yǎng)液配制。

膠原酶的使用

　　1.將漂洗,、修剪干凈的組織剪成1~2mm3左右小塊 　　2.將組織塊放入離心管（三角燒瓶）中加入30~50倍體積的膠原酶溶液,，旋緊蓋子（密封燒瓶）,。 　　3.將燒瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱內(nèi)，每隔3min振搖一次,，如能放在37℃的恒溫震蕩水浴箱中則更好,。 　　消化時(shí)間與組織的類別很有關(guān)系，對(duì)于某些腫瘤組織或其他較致密結(jié)締組織,，消化時(shí)間4~48h,， 對(duì)于容易消化的組織可以采用37℃震蕩消化15~45min，也可以根據(jù)具體情況而定,。如組織塊已分散而失去塊的形狀,，一經(jīng)搖動(dòng)即成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，可 以認(rèn)為已消化充分,。上皮組織經(jīng)膠原酶消化后,，由于上皮細(xì)胞對(duì)此酶有耐受性，可能仍有一些細(xì)胞團(tuán)未*分散,，但成團(tuán)的上皮細(xì)胞比分散的單個(gè)上皮細(xì)胞更易生 長(zhǎng),，因此，如無特殊需要可以不必再進(jìn)一步處理,。 　　4.收集消化液（有時(shí)含個(gè)別組織塊及沒有充分消化的組織碎屑則需用100目不銹鋼網(wǎng)過濾）,，離心1000r/min，5min,，去除上清,，用Hanks液或者無血清培養(yǎng)液離心漂洗1~2次，去除上清,，加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液,，接種培養(yǎng)瓶。

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