EZ-press Cell to cDNA Kit 

產(chǎn)品概述

介紹

EZ-press 細胞到 cDNA 試劑盒提供了一種快速簡便的方法,，無需 RNA 分離即可從培養(yǎng)細胞中生產(chǎn) cDNA,。該試劑盒生成的cDNA適用于基因克隆和基因表達的定量分析，因此是TRIzol方法的良好替代品,。

與TRIzol方法相比,，該試劑盒具有以下幾個顯著優(yōu)勢：

1.易于使用,。從培養(yǎng)的細胞開始,，只需兩個步驟（細胞裂解和逆轉(zhuǎn)錄）即可合成高質(zhì)量的cDNA,，無需RNA分離。

2.快速,。整個實驗（從細胞到cDNA）可以在不到35分鐘的時間內(nèi)完成,。

3.穩(wěn)定，可重復性強,。在整個實驗過程中,，總RNA被完mei保留，從而獲得穩(wěn)定且高度可重復的結(jié)果,。

4.靈敏度高,。靈敏度高。每個樣品的檢測下限僅為100個細胞,。

5. 沒有基因組DNA殘留?；蚪MDNA被充分去除,。此外，該試劑盒中使用的試劑安全無毒,，與臭味和危險的TRIzol試劑相比,，這是令人愉快的,。

細胞裂解液解凍細胞裂解

緩沖液，倒置或輕彈試管數(shù)次以徹di混合（不要使用渦旋）,，然后將試管放在冰上,。

1A.對于細胞數(shù)小于3×105/樣品的貼壁細胞：

a） 從孔中吸出培養(yǎng)基。

b）用PBS（200μl/孔）洗滌孔,。在不干擾細胞的情況下盡可能完quan去除PBS,。

c） 以 80 μl 細胞裂解緩沖液/1×105個細胞的比例向每個樣品添加細胞裂解緩沖液（例如您應該將160ul細胞裂解緩沖液添加到2×105個細胞中），輕輕上下移液5次以裂解細胞,。

d）將細胞裂解物在室溫（19~27°C）下孵育5分鐘,。

1B.對于細胞數(shù)大于3×105/樣品或懸浮細胞的貼壁細胞：

a）（僅適用于貼壁細胞，對于懸浮細胞,，從步驟b開始）使用實驗室常規(guī)采用的傳代培養(yǎng)方法分離細胞,。

b）計數(shù)然后輕輕沉淀細胞，丟棄生長培養(yǎng)基,，并將細胞放在冰上,。

c） 通過將細胞重懸于每 1×105個細胞的 ~0.1 mL PBS 中來洗滌 PBS 中的細胞。

d）將一定量的細胞（~1×105）轉(zhuǎn)移到每個樣品的新1.5ml Eppendorf管中,，低速離心細胞,，然后在不干擾細胞沉淀的情況下小心吸出PBS。將細胞放在冰上,。

e）向每個樣品中加入80μl細胞裂解緩沖液,，輕輕上下移液5次以裂解細胞。

f）將細胞裂解物在室溫（19~27°C）下孵育5分鐘,。

2.將裂解物放在冰上,，在30分鐘內(nèi)進行RT反應。

注意：1.80μl細胞裂解緩沖液的容量約為1×105個細胞,，根據(jù)細胞類型而變化,。為了獲得最佳結(jié)果，強烈建議進行試點實驗以確定每次裂解的最佳細胞數(shù),。

2.在96,、48、24和12孔細胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)的細胞,，細胞數(shù)不超過3×105,，可在PBS洗滌后直接用于裂解。當處理超過3×105 /孔（或培養(yǎng)皿）的細胞時,，請遵循程序1B：必須首先分離細胞（步驟a）,。然后，將細胞培養(yǎng)基加入胰蛋白酶分離的細胞中,，計數(shù),，低速離心并棄去上清液（步驟b）,，用適當體積的PBS重懸（步驟c），然后取~1×105個細胞/樣品用80μl細胞裂解緩沖液裂解（步驟d）,。

3.細胞裂解物與任何其他常用的RT試劑不相容（使用其他RT試劑無法產(chǎn)生或很少的cDNA）,。因此，必須使用該試劑盒中提供的特殊優(yōu)化的RT試劑對細胞裂解物進行逆轉(zhuǎn)錄,。

反轉(zhuǎn)錄

按照產(chǎn)品手冊中的說明進行逆轉(zhuǎn)錄,。

采用6對引物（HEK-293T細胞）實時qPCR對EZBioscience®EZ-press細胞合成的cDNA對cDNA試劑盒和TRIzol -逆轉(zhuǎn)錄法合成的具有代表性的實驗結(jié)果

進行了評估。如下圖所示,，EZ-press細胞轉(zhuǎn)cDNA試劑盒與TRIzol -RT方法之間的結(jié)果高度一致,，表明EZ-press細胞轉(zhuǎn)cDNA試劑盒可以完quan替代TRIzol-RT方法從細胞制備cDNA。

產(chǎn)品詳情

名稱        EZ-press Cell to cDNA Kit 

編號        B0001

品牌       ezbioscience