78R180 Red Retrobeads™ IX (100 µl)

產(chǎn)品概述

RetroBeads Gamma Lumafuor是lumafuor公司第一款反向示蹤產(chǎn)品,，也是唯1被證明有效的產(chǎn)品（該產(chǎn)品的有效性已被從無脊椎動物到無脊椎動物的數(shù)百篇研究論文證實）,。

類別：產(chǎn)品內(nèi)容

Cas  ：78R180

大小：100微升

品牌：lumafluor 

示蹤產(chǎn)物體內(nèi)注射濃度高,，不易擴散，信號強,，對活細胞或活體無毒,，存活時間一年以上,。它與以下大多數(shù)示蹤劑,、原位雜交檢測技術(shù)和免疫組織化學技術(shù)兼容。

部分產(chǎn)品信息如下：

紅色逆轉(zhuǎn)珠（100μl）

綠色逆向珠IX （100 μl）

紅色逆轉(zhuǎn)錄珠伽瑪IX（100μl）

本手冊總結(jié)了使用熒光乳膠微球（珠子）作為神經(jīng)元逆行示蹤劑的大多數(shù)程序,。有關綠色珠子的信息，請參閱本手冊的末尾,。有關更多詳細信息,，請參閱Katz,，L.C的以下論文

1.Katz，L.C.,，Burkhalter，A.和Dreyer,，W.D.熒光乳微球逆行神經(jīng)元Markerforinvivoandinvitros tudiesofvisual cortex.自然310 ：498-500（1984）

2.卡茨,，L.C.和Iarovici,，D.M.綠色熒光光層：新的逆行示蹤劑。神經(jīng)科學34 ：511-520（1990）

魯馬福爾高效復古珠操作說明

1,、 包裝和稀釋：

Lumafuor的珠子被包裝在一個密封的小瓶中，濃縮的珠子懸浮在蒸餾水中,。如果使用紅色磁珠作為神經(jīng)通路的反向示蹤,，則推薦使用稀釋方法：1：4稀釋可用于大鼠視覺皮層,，而不會降低磁珠熒光標記的強度和質(zhì)量。但是,，對于第一個實驗,，我們不建議使用稀釋的磁珠,，而是使用原始溶液進行注射示蹤。除蒸餾水外,，NaCl和KCl等常規(guī)鹽溶液也可用作稀釋劑,。如果使用綠色珠子，強烈建議使用不稀釋的儲備溶液,。

2,、 儲存：

為避免蒸發(fā)，珠子溶液應在冰箱中儲存4度,。不要凍結(jié)它,！冷凍豆子將無用且無法使用,。干燥的珠子也不能使用（不能重新懸浮）,，產(chǎn)品沒有明顯的使用壽命,。如果需要存儲，它可以存儲數(shù)年,。

3,、 注射：

珠子最好使用壓力注射,，如1ml漢密爾頓微注射器或氣動注射系統(tǒng)。如果需要小面積顯微注射（30-50nl）,，可以使用末端直徑為30-50um的玻璃電極進行注射,，而直徑較大的玻璃電極可用于常規(guī)反向示蹤（注射體積0.1-0.3ul）。然而,，即使在較高劑量下，磁珠也不會從注射部位顯著擴散（通常小于1mm）,。因此,，為了盡可能完quan地標記投射到更大細胞核的神經(jīng)元,，需要多點注射。雖然磁珠帶負電,，但不建議使用離子滲透法追蹤磁珠,。

4,、 生存時間：

在大多數(shù)恒溫脊椎動物系統(tǒng)中,，檢測磁珠的最短有效時間為24小時,。在48小時內(nèi)，標記強度隨進樣時間增加,，48小時后熒光強度保持不變,。在冷血動物中,，檢測珠子的推薦時間為1周,。目前，尚未檢測到最長的珠子可檢測周期,。然而,，磁珠的熒光強度和質(zhì)量可以在體內(nèi)保持至少14個月不變，并且細胞可以被永jiu標記,。在動物或神經(jīng)元中沒有發(fā)現(xiàn)珠子的毒性作用。

五,、固定與治療：

標準的固定方法是：洗滌或灌注0.1mpbs并固定在4%多聚甲醛（0.1mpbs制劑,，pH7.4）中。用戊二醛固定會產(chǎn)生大量的組織自發(fā)熒光,，這會阻礙用珠子標記的神經(jīng)元。而且,，在戊二醛固定組織中不會完quan觀察到綠色珠子,，因此應盡可能避免。如果使用冷凍部分,，則應用PBS沖洗切片并用明膠涂層載玻片干燥。風干后,，載玻片應用二甲苯透明1分鐘,，然后用氟鑲或氪密封。氟卡特可以從atomrgic chemetals Corp.（紐約法明代爾）購買;克里斯塔隆可以從以下位置購買

Harleco（EM Industries,，新澤西州吉布斯敦）。切片只能短時間暴露在乙醇或二甲苯中,，但長期暴露（超過 5 分鐘）會損壞珠子,。磁珠對甘油非常敏感，在甘油環(huán)境中會很快提取熒光,。因此,，不應使用甘油密封劑,。如果不可避免，可以使用水楊酸甲酯代替甘油作為密封劑,。如果切片儲存在黑暗環(huán)境中,，則用熒光珠標記的細胞一年內(nèi)無法提?。ǖ衅臒晒獗尘皶黾樱?。到目前為止，還沒有珠子標記組織涂有塑料材料的記錄,。

觀察：

紅色珠子中的染料是羅丹明,，因此可以使用所有與羅丹明匹配的熒光濾光片。尼康公司的一些老式羅丹明濾光片由于背景較高,，可能無法觀察到熒光珠。一般來說,，蔡司和萊茨的標準羅丹明過濾器可以獲得更好的觀察效果,。大多數(shù)綠色熒光濾光片都能很好地觀察綠豆的熒光結(jié)果。將濾光片設置為熒光黃色可以獲得強烈的明亮熒光,，但也帶來了很高的背景干擾。結(jié)果表明,，比窄帶濾光片更寬波段的熒光濾光片可以獲得更強的熒光信號,。經(jīng)過長時間的觀察和拍照，珠子的熒光沒有