Mohs IHC 程序

莫氏冷凍組織的標(biāo)本制備

1. 將標(biāo)本嵌入 OCT 中的低溫恒溫器內(nèi),。

2. 在 4-5 µm 處切割切片并安裝在帶正電的載玻片上，例如 Bio SB Hydrophilic Plus Slides (BSB 7028) 或 TintoDetector Cap Gap Plus (BSB 7006),。

3. 在室溫下風(fēng)干載玻片 2 分鐘,，然后在培養(yǎng)箱或干浴中在 60°C 下孵育載玻片 3 分鐘。

4. 在 100% 丙酮中固定并風(fēng)干或在室溫下用 10% NBF 固定 2 分鐘,，然后用蒸餾水沖洗并風(fēng)干,。

5. 冷凍組織預(yù)處理取決于感興趣的目標(biāo)。請參閱產(chǎn)品說明書中的一抗以確定適當(dāng)?shù)念A(yù)處理方案,。

莫氏冷凍組織的組織預(yù)處理程序

1. 
   

1. 使用 Bio SB ImmunoDNA Retriever with Citrate (BSB 0020-BSB 0023),、ImmunoDNA Retriever with EDTA (BSB 0030-BSB 0033) 或 Mohs ImmunoDigestor (BSB 0324-0326) 對組織進(jìn)行表位修復(fù)。建議用戶選擇使用 110°C 壓力鍋 (BSB TintoRetriever Pressure Cooker) 的 5 分鐘熱誘導(dǎo)表位修復(fù) (HIER) 方法,，或 1 分鐘蛋白水解誘導(dǎo)表位修復(fù) (PIER) 方法（用于細(xì)胞角蛋白使用 10% NBF 固定組織）,。10% NBF 固定組織的形態(tài)學(xué)較好，尤其是在使用蛋白水解誘導(dǎo)表位修復(fù)方法時,，然而,，在 100% 丙酮固定組織上可能更容易檢測到抗原。

2. 可以使用三種 HIER 方法中的任何一種：

一個,。TintoRetriever 壓力鍋或同等產(chǎn)品

將組織/載玻片放入裝有含有檸檬酸鹽或 EDTA 或 TintoDeparaffinator 檸檬酸鹽或 EDTA 的 ImmunoDNA Retriever 的染色盤或 coplin 罐中,，然后放在高壓鍋的三腳架上。在壓力鍋中加入 1-2 英寸的蒸餾水,，然后將熱量調(diào)高（110-121°C）,。孵育 15 分鐘。釋放蒸汽,，打開并立即將載玻片轉(zhuǎn)移至室溫,。

灣。TintoRetriever PT 模塊或水浴法

在 95°-99°C 下將組織/載玻片放入預(yù)熱的染色皿或裝有 ImmunoDNA Retriever with Citrate or EDTA 或 TintoDeparaffinator Citrate or EDTA 的染色皿中,。孵育 30-60 分鐘,。立即打開并將載玻片轉(zhuǎn)移至室溫。

C,。傳統(tǒng)蒸鍋法

將組織/載玻片放入預(yù)熱的染色盤或裝有檸檬酸鹽或 EDTA 或 Tintodeparaffinator 檸檬酸鹽或 EDTA 的 ImmunoDNA Retriever 的染色皿或 coplin 罐中,，蓋上蓋子并蒸 30-60 分鐘。熱處理后,，將載玻片轉(zhuǎn)移到含有檸檬酸鹽或 EDTA 或 Tintodeparaffinator Citrate 或 EDTA 的 ImmunoDNA Retriever 中至室溫并靜置 15-20 分鐘,。

3. 對于PIER，在室溫下使用 Mohs ImmunoDigestor (BSB 0324-0326) 1 分鐘,，然后清洗,。

IHC 檢測程序

1. 在 HIER 或 PIER 之后，將載玻片轉(zhuǎn)移到 ImmunoDNA 清洗機(jī)并靜置 1-2 分鐘,。

2. 對于手動染色,，在環(huán)境溫度下進(jìn)行抗體孵育,。對于自動染色方法，請根據(jù)儀器制造商的說明進(jìn)行抗體孵育,。

3. 用 ImmunoDNA 洗滌器或去離子水清洗載玻片,。

4. 繼續(xù) Mohs IHC 檢測方案。用 ImmunoDNA 洗滌液在每個步驟之間清洗載玻片,。

縮寫 Mohs 免疫組化方案