arthusbio甲硫氨酸說明書

貨號：1K00201

規(guī)格： 96 tests

Detection range 15nM - 480n

arthusbio 1K00201

甲硫氨酸是一種具有硫甲基的氨基酸，通過甲硫氨酸腺苷轉移酶（EC 2.5.1.6）與ATP一起轉化為S-腺苷甲硫氨酸（SAM）,。SAM是50多種生物活性物質（如DNA,、RNA,、蛋白質、磷脂,、激素和神經遞質等）的甲基供體,。甲基在甲基轉移酶作用下從SAM轉移后,，形成S-腺苷高半胱氨酸，去除腺苷后進一步代謝為同型半胱氨酸（Hcy）,。同型半胱氨酸通過N5甲基四氫葉酸甲基轉移酶（EC1.1.1.68）和輔酶維生素B12催化途徑從N5甲基四氫葉酸接受甲基代謝為甲硫氨酸。這是蛋氨酸循環(huán),。

甲基化指數定義為SAM和SAH的比率,。甲基化指數\是甲基化狀態(tài)和甲基化能力的更好標記。

SAM用作治療抑郁癥,、肝病,、關節(jié)炎和關節(jié)痛等的藥物或營養(yǎng)補充劑。

該免疫分析試劑盒用于測量可溶性樣品中SAM的水平,。

測定原理

這種直接競爭ELISA（酶聯免疫吸附試驗）旨在測量樣品中S腺苷-L-甲硫氨酸（SAM）的水平,。將與大分子偶聯的SAM固定在微量滴定板上。用移液管將標準品和樣品注入井中,，

然后添加針對SAM的HRP結合抗體,。樣品或標準品中的游離SAM分子與微滴度板表面上的固定化SAM競爭抗體的結合位點。丟棄混合溶液并清洗每個孔后,，添加TMB基質溶液,。基質溶液在HRP（辣根過氧化物酶）的作用下變藍,，添加停止溶液（酸）后變黃,。顏色與樣品（或標準品）中SAM的量成反比。使用微板分光光度計在450nm處測量剩余溶液（OD450）的光密度,。樣品中SAM的水平可以通過標準品生成的標準曲線來計算,。

樣品收集和儲存

1、樣品采集必須在4℃下進行,。必要時,，通過離心去除沉淀，并盡快測試樣品或將其儲存在-20°C或以下,。避免重復凍融循環(huán),。

2.避免樣品中的NaN3，因為它會使辣根過氧化物酶（HRP）失活,。

3,、一些未知因素可能會對測定產生影響（基質效應）。用樣品稀釋劑稀釋樣品或用與實際樣品基質相同的基質制備標準品/樣品,，這應避免或減少基質效應,。

程序

1、將所有試劑重新加熱至室溫,，并充分混合,。取出適當數量的井,，將剩余的井放回

拉鏈。密封Ziploc并將其儲存在-20°C,。

2,、向每個孔中加入30ul樣品稀釋劑（空白孔）、標準品和樣品,。

3,、制備HRP結合抗體溶液：用HRP抗體稀釋液按1:600稀釋HRP抗體，在wek內用完,。

如果一周后使用,，請在需要時準備。充分混合并儲存在黑暗中,。

4,、向每個孔中加入70ul HRP結合抗體，空白孔除外,。

5,、將平板置于振蕩器上，搖動一段時間,，使試劑混合,，然后用微孔板封閉劑密封平板。將平板在37°C下培養(yǎng)1小時,。

6,、小心剝離密封劑，并將剩余溶液丟棄在孔中,。在每個孔中添加至少300ul洗滌液,，并保持該狀態(tài)30秒，然后去除洗滌液,。重復這些步驟3次以完成清洗過程,。或者改用自動清洗機,。

7,、向每個孔中添加TMB基質和100ul混合基質。輕輕搖晃并密封盤子,。將培養(yǎng)板在37°C下無光培養(yǎng)15分鐘,。

8、在反應結束時加入50ul停止溶液,。

9.在15分鐘內測量每個孔在450 nm波長下的吸光度,。根據空白井設置零。

數據處理

始終通過從測試孔的吸光度中減去空白孔450 nm（OD450）處的吸光度來清除背景,。

每個孔（標準或樣品）的吸收率等于AAso,，A是標準孔或樣品孔的平均吸光度,，Aso是So標準孔的平均吸光度。創(chuàng)建標準曲線：通過繪制每個標準品在y軸上的結合率與其在x軸上濃度的對數來構建標準曲線,。使用二次多項式曲線對數據進行傅立葉變換（r>0.99）,。樣本的SAM水平可以通過將其結合率代入標準曲線方程來計算。如果樣品已稀釋,，則乘以稀釋程度,。

筆記

1、使用未重新加熱的試劑和樣品或環(huán)境溫度低于20°C可能導致OD450值降低,。

2,、額外的干燥后洗滌可能會對結果產生負面影響,，例如標準曲線和重復性較差,。為了避免這種情況，請在清洗后立即執(zhí)行下一步,。

3,、充分混合溶液并*清洗，因為這些程序會影響分析,。

4,、用微板封閉劑密封板，孵育板時避光,。

5,、推薦標準品和樣品的重復井，建議標準曲線傅里葉變換采用二次多項式（r>0.99）,。這個

質控瓶的檢測濃度應在檢測范圍內,。

6、由于基質效應,，樣品孔的吸光度可能高于S0標準孔的吸光度,。在這種情況下，將樣品稀釋至少十倍,。如果在10倍稀釋后無法檢測SAM水平,，則使用與待測量樣品相同的矩陣來制備一組新的標準并再次測量。

7,、濃縮洗滌液可能結晶,。加熱，使鹽在稀釋前*溶解,。

8,、微孔板密封劑應一次性使用，以避免交叉污染,。

9,、基板應避光,。

10、停止溶液為稀硫酸,。避免直接接觸皮膚和其他物品,。

存儲和有效日期

儲存條件：除HRP基質和停止溶液儲存在2-8℃外，所有其他成分和板條均可冷凍儲存,。

有效期：自裝運之日起冰箱儲存約6個月,。如果不打算很快使用，用戶可以將分析板,，

HRP抗SAM抗體,、標準品、HRP抗體和樣品稀釋液在冷凍柜中儲存更長時間或/和更好的結果,。