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當(dāng)前位置:上海起發(fā)實驗試劑有限公司>>技術(shù)文章>>matrixome層粘連蛋白511E8片段簡介
Laminin-511 是基底膜的主要成分,可作為多能干細(xì)胞(ES/iPS 細(xì)胞)的支架。
作為基底膜的一部分,,層粘連蛋白 511 (800 kDa) 與細(xì)胞表面的整合素結(jié)合。
Laminin-511 是一種非常大的蛋白質(zhì) (800 kDa),由三條鏈(α-,、β-和 γ- 鏈)組成,,并形成超分子聚集體。很難作為重組蛋白生產(chǎn),。
當(dāng)我們將 Laminin-511 片段化并在細(xì)胞表面尋找與整合素結(jié)合的最小成分時,,我們確定了稱為 Laminin-511 E8 片段 (150 kDa) 的成分。我們決定將該成分作為重組蛋白生產(chǎn),。
與“Laminin-511 (Intact)"相比,,人類 iPS 細(xì)胞對 Laminin-511 E8 片段的粘附更強,。
比較了層粘連蛋白 511 E8 片段和其他底物的細(xì)胞附著。
吸光度 (OD570) 表示相對于對 Matrigel 的最大影響值進行歸一化的附著細(xì)胞的相對數(shù)量,,該值被任意設(shè)置為 1,。
該結(jié)果證實層粘連蛋白-511 E8 片段強烈地粘附于細(xì)胞。
分散的人單個 ES 細(xì)胞迅速粘附在 Laminin-511 E8 片段上并立即增殖,。
我們在層粘連蛋白 511 E8 片段和其他細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)上傳代人 ES 細(xì)胞。
傳代時單個人 ES 細(xì)胞集落證實 Laminin-511 E8 片段迅速粘附在細(xì)胞上并增殖,。
使用傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法,,如果 ES/iPS 細(xì)胞分散成單個細(xì)胞,細(xì)胞就會死亡,。
因此,,在傳代時,一定程度上需要維持一個細(xì)胞集落,。
使用 Laminin-511 E8 片段作為細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì),,甚至可以維持和培養(yǎng)單個 ES/iPS。
-> 減少學(xué)習(xí)細(xì)胞培養(yǎng)方法所需的時間,。
-> 細(xì)胞培養(yǎng)的延伸效率顯著提高,。
*5天
*菌落傳代方法
傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法(菌落傳代)傳代時的延伸效率為1:4,而使用Laminin-511 E8片段作為細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)時,,延伸率為1:100,。
我們比較了傳統(tǒng)方法(菌落法)培養(yǎng)30天的ES/iPS細(xì)胞數(shù)量和使用Laminin-511 E8片段作為細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)培養(yǎng)的ES/iPS細(xì)胞數(shù)量。圖表的橫軸表示培養(yǎng)天數(shù),,縱軸表示細(xì)胞數(shù),。
結(jié)果證實,與傳統(tǒng)方法(菌落法)相比,,使用Laminin-511 E8片段的細(xì)胞數(shù)增加了200或更多,。
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