jembio Klenow 片段，DNA 聚合酶簡介

Klenow Fragment

Klenow ,，大腸桿菌 DNA 聚合酶 l 酶的大片段,，保留聚合酶 l 的聚合酶和校對 3'->5' 外切核酸酶活性。
描述：缺乏 5'-核酸外切酶活性 (1),。超純重組酶,。用于 Sanger 雙脫氧測序 (2)。適用于第二鏈 cDNA 合成 (3)。用于 3'-末端標記和填充 5'-突出粘性末端 (4),。
單位定義：一個單位是在 37oC 下 30 分鐘內(nèi)將 10 nmoles 的總核苷酸摻入酸不溶形式所需的酶量,。
儲存條件：儲存在 –20oC。
儲存緩沖液：50 mM 磷酸鉀 (pH 7.0),、0.25 mM 二硫蘇糖醇和 50% (v/v) 甘油,。
測定條件：67 mM 磷酸鉀 (pH 7.4)、6.7 mM MgCl2,、1 mM 二硫蘇糖醇,、dCTP、dGTP,、dTTP 和 [a-32P]dATP 各 0.033 mM,，以及 4.5 µg 活化 DNA。在 100 µl 反應體積中,，在 37oC 下孵育 30 分鐘。
質(zhì)量控制：對所有制劑進行污染核酸內(nèi)切酶和 5'-核酸外切酶活性檢測,。通過 SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳判斷,，典型的制劑純度大于 95%。