Mohs IHC 程序

莫氏冷凍組織的標本制備

1. 將標本嵌入 OCT 中的低溫恒溫器內。

2. 在 4-5 µm 處切割切片并安裝在帶正電的載玻片上,，例如 Bio SB Hydrophilic Plus 載玻片 (BSB 7028) 或 TintoDetector 蓋間隙載玻片 (BSB 7006) 的下三分之一處,。

3. 在室溫下風干載玻片 2 分鐘，然后在培養(yǎng)箱或干浴中在 60°C 下孵育載玻片 3 分鐘,。

4. 在室溫下用丙酮或 10% NBF 固定 2 分鐘,。如果使用 Bio SB Mohs ImmunoDigestor，使用 10% NBF 10% 會產生更好的形態(tài),。

5. 對于固定在丙酮中的載玻片,，讓它風干。對于 NBF 中的幻燈片,，用蒸餾水沖洗并風干,。

莫氏冷凍組織的預處理

1. 將載玻片轉移到 ImmunoDNA Washer、TBST 或 PBST 緩沖液中,。

2. 使用 Mohs ImmunoDigestor 進行 PIER,、蛋白水解消化 1 分鐘。在室溫下,。

3. 用 ImmunoDNA Washer,、TBST 或 PBST 緩沖液沖洗,。

IHC 檢測程序

1. PIER 后，將載玻片轉移至 ImmunoDNA 清洗機,，靜置 1-2 分鐘。

2. 對于手動染色,，在環(huán)境溫度下進行抗體孵育,。對于自動染色方法，請根據(jù)儀器制造商的說明進行抗體孵育,。

3. 用 ImmunoDNA 洗滌器或去離子水清洗載玻片,。

4. 繼續(xù) IHC 檢測協(xié)議。用 ImmunoDNA 洗滌液在每個步驟之間清洗載玻片,。

縮寫 Mohs PolyDetector DAB HRP Brown of HRP Green 免疫組化方案

1. 用過氧化物酶阻滯劑孵育載玻片 30 秒

2. 用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗

3. 與一抗孵育 4 分鐘

4. 用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗

5. 用 HRP 標簽孵育 3 分鐘

6. 用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗

7. 準備

   • DAB Brown（在 1ml DAB 緩沖液中加入 1 滴 DAB Chromogen,；充分混合）

   • 或 HRP Green（在 1 ml HRP Green Buffer 中加入 1 滴 HRP Green Chromogen；充分混合）

8. 用 DAB 或 HRP Green 孵育 2 分鐘

9. 用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗

10. 用蘇木精或核固紅復染 30 秒

11. 用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗

12. 使用 AquaMounter 安裝或使用 Fast ChromoProtector 使組織脫水,，然后使用 PermaMounter 安裝

此協(xié)議也可用于使用檸檬酸鹽或 EDTA 檢索的 FFPE 組織,。