RNA-DNA STAT 60說明書

從同一樣品中分離總RNA/mRNA和DNA的兩種單提取試劑

除去上清液,，清洗RNA沉淀  一次  含75%乙醇  l  by  渦旋  和  后續(xù)  以7.500g（大值）離心5 min  4°  C.  添加  at  病變  I  ml 75%乙醇/ml  的  RNA  STAT-60TM  使用  對于初始均質(zhì)化。

程序結束時,，短暫干燥RNA沉淀(5-10 min),。重要的是不要使RNA沉淀*干燥，因為它將大大  減少  it  溶解度,。  請勿使用  用于干燥的Speed-Vac,。溶解RNA  水或(l mM)EDTA中沉淀。pH 7,?；?.5%SDS溶液。渦旋或使團塊通過  a  很少  次  通過  a  移液器吸頭,?？赡苄枰?5-60 ℃下孵育10-15 min以溶解RNA。經(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)處理的無RNase溶液  be  使用  對于RNA的如此輕浮,。

6. 預期收率和純度：

總RNA的預期yie ld：

1. 毒性（µg/mg組織）：活r,，脾臟，7-10µg,；悉尼,，3-4µg；腦骨骼肌,，1-1.5µg,；胎盤1-4

µg .

2. 培養(yǎng)細胞(pe r/10 6ce lls)：上皮細胞，10-15 tg,。成纖維細胞,，5-7µg。

總RNA的終制備液不含DNA  和蛋白質(zhì),，260/280比值 > 1.8,。

7. 注釋和評論：

I. 對于少量細胞或組織(1-10 mg)的RNA同分異構體：將樣品在0.8 mL tl1e RNA ST AT-6QTM中勻漿，將勻漿轉(zhuǎn)移至Eppendorf管中,，并遵循isola ti on方案,。RNA沉淀應在-20 ℃下進行30 min的離子除外,。需要添加載體r,，如糖原,。

2. 以下   均質(zhì)化離子   （之前    添加    的氯方）樣品可在-70 ℃保存至少2周。

3. 在酶譜分析中,，可能需要加入itiona l沉淀以使用由RNA STAT-60TM等長的RNA,。如此lubili化后，在0.2 MNaCl和2倍體積乙醇l存在下沉淀RNA,，用于  在-20 °C下15 min,。PCR和RNase保護試驗不需要這種傳統(tǒng)的沉淀。

4. 手和灰塵可能是RNase污染的主要來源,。使用手套并保持試管密閉,。在整個過程中建議使用steri le,disposab le聚丙烯管。

RNA STAT-60TM co ntains the poiso n(pheno l)and the irritant(guan idiniu m).可能致命,。當使用RNA STAT-6 QTM時,，使用手套和護目鏡（護罩、護目鏡）,。請勿接觸皮膚或衣物,。避免吸入蒸汽。同時閱讀藥瓶上的警告說明,。請勿將RNA STAT-60TM暴露于強烈的酸性溶液中,。

方案對象  DNA   反向   從用于RNA提取的樣品中提取

DNA反向提取

取出后  的  水  層包含  RNA，  添加  800 μL DNA STAT-60試劑/ml RNAzol,。RNAzol B或RNA STAT-60  使用  針對  的  初始  均質(zhì)化離子,。添加  0.2 mL氯芬/ml  DNA  STAT-60、  奶昔  用力靜置15秒,，然后在室溫下靜置  溫度  針對  2-3 min,。在4 ℃下以2000 g（小值）-12000 g（大值）離心勻漿15 min。  滲出性  同源nate分為2個相：  a  下部器官ic  相和上層水相,。DNA保留在水相中,，而蛋白質(zhì)處于間期和有機相中。

DNA制備

轉(zhuǎn)換器  的  水溶液  相  to   a   新鮮的   管   和   混合   含異丙醇,。每毫升加入0.5 mL異丙醇  of  的  使用的DNA STAT-60  針對  均質(zhì)化,。  Sto re  樣品s  at  -20°C  30 min，離心機  12,000g  （大值）  針對  LO  分鐘  4 °C下,。DNA  沉淀  翅  小  澄清  to  白色  微丸  在底部  of  的  試管,。  委托方  小樣本，  添加  of  a  可能需要載體(g lycoge n)d,。

DNA洗滌

除去上清液,，用75%乙醇渦旋清洗DNA沉淀一次，隨后在4 ℃下以7,500g（多）離心5 min,。按照1 mL 75%乙醇  ml   of   的   DNA   STAT-60   使用   針對   的   初始  同質(zhì)尼扎離子,。

在程序結束時,，通過風干(5-10 min)干燥簡單的DNA團塊很重要,，不要使團塊過度干燥,，因為它將大大降低其如此的柔韌性,。將DNA沉淀溶于水或1 mm edta(pH 8.Vo rtex)中或通過移液器吸頭使沉淀通過幾次?？赡苄枰?5-60 ℃下孵育10-15分鐘以溶解DNA樣品,。

特殊處理注意事項

DNA STAT-60™含有刺激物(g ua nidinium)  并且可能是致命的。當與  DNA  STAT-60  使用  手套和護目鏡（護罩,，  安全性  護目鏡）。請勿  得到  皮膚或衣服上,。避免吸入蒸汽,。閱讀瓶上的警告說明。請勿將DNA STAT-60暴露于酸性環(huán)境中,。

參考文獻

I. Chomczynks I. P.和  Sacchi,  1987.  單步  方法  的RNA Iso化通過酸性胍硫氰酸銨-苯酚l­氯方提取。生物技術8:14 8-1 49,。

如有要求,，可提供更多信息。