kainos CY-4000試劑盒說明書

FGF-23 ELISA試劑盒

檢驗(yàn)原則

FGF-23 ELISA試劑盒是兩點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒,，用于測量血清中的FGF-23。兩種特異性鼠單克隆抗體與全長FGF-23結(jié)合,。一種抗體固定在微量滴定板孔上以進(jìn)行捕獲,。另一抗體與HRP（辣根過氧化物酶）綴合以進(jìn)行檢測。

在一反應(yīng)中,，將含有FGF-23的樣品與固定的抗體在微量滴定孔中孵育,。樣品中的FGF-23被抗體捕獲。在該反應(yīng)結(jié)束時(shí),，將孔洗滌以除去未結(jié)合的FGF-23和其他組分,。

在第二次反應(yīng)中,，將這種固定化的FGF-23與HRP標(biāo)記的抗體孵育，形成“三明治”復(fù)合物：

 

抗FGF-23抗體-N末端FGF-23 C末端-HRP標(biāo)記的抗FGF-23抗體

在該反應(yīng)結(jié)束時(shí),，將孔洗滌以除去未結(jié)合的組分,。

在酶反應(yīng)中，將固定在孔上的三明治復(fù)合物與底物溶液一起溫育,，然后通過分光光度計(jì)微量滴定板讀數(shù)器進(jìn)行測量,。與孔結(jié)合的復(fù)合物的酶促活性與樣品中FGF-23的量成正比。

通過將吸光度與FGF-23標(biāo)準(zhǔn)品的每種濃度作圖來繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。從該曲線確定樣品中FGF-23的濃度,。

A.產(chǎn)品信息

1）FGF-23 ELISA試劑盒中包含的測試數(shù)量/價(jià)格

注意：此價(jià)格不包括運(yùn)輸和手續(xù)費(fèi)

2）FGF-23 ELISA試劑盒規(guī)格

該試劑盒使用“三明治” ELISA和抗人FGF-23小鼠單克隆抗體來測量血清FGF-23的水平。該試劑盒具有高靈敏度,，低檢測限為3 pg / mL，定量范圍為3-800 pg / mL,。

包裝尺寸

C.使用注意事項(xiàng)

1）測試樣品的儲(chǔ)存條件是什么,？

使用新鮮的血清樣品。如果您不能立即測試樣品,，請(qǐng)將其保存在-70°C以下,。避免解凍/重新凍結(jié)周期。

在我們的實(shí)驗(yàn)室測試中,，在冰箱中放置13天后,，給定樣品的活性降至86.6％。樣品可以在-80°C下保持穩(wěn)定約三年,，但在-20°C下不能保證穩(wěn)定性,。

我們已經(jīng)確認(rèn)多六個(gè)融化/重新凍結(jié)周期可能不會(huì)影響活性，但是我們建議小批量冷凍樣品以大程度地減少融化/重新凍結(jié)周期,。

2）我可以使用血漿樣品嗎,？

雖然可以使用FGF-23 ELISA試劑盒測試血漿和血清，但我們建議使用血清,。

3）我可以使用試劑盒測試動(dòng)物樣本嗎,？

FGF-23 ELISA試劑盒可用于測量小鼠，大鼠或猴子的血液FGF-23水平,。

4）試劑盒中是否包含任何基于汞的防腐劑,？

FGF-23 ELISA試劑盒不使用硫柳汞等基于汞的防腐劑。標(biāo)準(zhǔn)溶液,，稀釋溶液,，酶標(biāo)記的抗體溶液和濃縮洗滌溶液均使用Kathon™CG作為防腐劑。

5）操作注意事項(xiàng)

必須為每次測試準(zhǔn)備校準(zhǔn)曲線,。
如果測試了多個(gè)樣品,，則反應(yīng)時(shí)間必須保持一致,。

一級(jí)反應(yīng)必須在攪拌板的同時(shí)進(jìn)行。攪拌前應(yīng)將板密封,。

在洗滌過程中必須遵守以下預(yù)防措施：

請(qǐng)勿在板上放置洗滌液,。

一旦從孔中充分去除了清洗溶液，請(qǐng)立即進(jìn)行下一步,。

試劑

1. 1）FGF-23抗體包被的微孔板（FGF-23微孔板）
   　 96孔微孔板（12條,，每條8孔）被FGF-23鼠單克隆抗體包被。

1. 2）HRP標(biāo)記的FGF-23抗體（FGF-23結(jié)合物）
   　 12 mL鼠抗辣根過氧化物酶結(jié)合的FGF-23單克隆抗體,，帶有防腐劑,。
   　 該試劑應(yīng)在2-10℃下保存并避光。

1. 3）FGF-23標(biāo)準(zhǔn)品（Std1?Std7）
   　 12 mL（Std1）和0.5 mL（Std2?Std7）緩沖的FGF-23含防腐劑,。
   　 7瓶FGF-23在具有防腐劑的緩沖堿中,。

1. 4）分析稀釋劑（Assay Diluent）
   　 12 mL緩沖液。

1. 5）顯色劑（底物）
   　 12 mL的過氧化氫尿素四甲基聯(lián)苯胺TMBZ,。

1. 6）FGF-23洗滌緩沖液（10倍濃縮液）
   　 53 mL含防腐劑的緩沖表面活性劑10倍濃縮液,。
   　 使用前，用去離子水將內(nèi)容物稀釋至10倍并充分混合,。

1. 7）終止溶液（停止溶液）
   　 12 mL 0.5 mol / L硫酸,。

1. 8）
   　 套件中包括三個(gè)平板封口機(jī)。

＊這些試劑應(yīng)在2－10℃黑暗條件下保存,。
　使用前,，將所有試劑置于室溫下。

測定方法

1. 1）在所有要使用的孔中加入50μL分析稀釋劑,。

1. 2）在每個(gè)孔中加入50μLFGF-23標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,，并用板密封劑覆蓋板。

1. 3）在平板混合器上于室溫下孵育平板120分鐘,。

1. 4）拆下平板封口機(jī),。
   　 除去反應(yīng)溶液后，向每個(gè)孔中加入300μL洗滌緩沖液,，然后丟棄洗滌緩沖液,。
   　 重復(fù)此過程4次。輕拍紙巾或類似吸收材料上的孔板,，以除去孔中殘留的水滴,。

1. 　 [注1]
   　 為避免在加入洗滌緩沖液時(shí)孔變干，請(qǐng)使用多通道移液器或類似設(shè)備快速工作,。

1. 　 [注2]
   　 確保移液器吸頭不會(huì)劃傷孔底部,，以嘗試從孔中除去溶液。

1. 5）在每個(gè)孔中加入100μLFGF-23偶聯(lián)物，并用板密封劑覆蓋板,。
   　 在平板混合器上于室溫下孵育平板60分鐘,。

1. 6）以相同的方式重復(fù)4）。

1. 7）將100μL底物添加到每個(gè)孔中,，并用板密封劑覆蓋板,。
   　 在黑暗中于室溫下孵育平板30分鐘。

1. 8）拆下平板封口機(jī),。
   　 立即將100μL終止溶液添加到每個(gè)孔中,。
   　 用微量滴定板讀數(shù)器在10分鐘內(nèi)讀取450 nm（第二波長600-650 nm）的吸光度。

加入50μL分析稀釋液,。
　　
加入50μLFGF-23標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,。
　　
在平板混合器上于室溫下孵育120分鐘。
　　
抽吸并清洗4次,。
　　
加入100μLFGF-23偶聯(lián)物,。
　　
在平板混合器上于室溫孵育60分鐘。
　　
抽吸并清洗4次,。
　　
在每個(gè)孔中添加100μL底物,。
　　
在黑暗中于室溫下孵育30分鐘。
　　
加入100μL終止溶液,。
在10分鐘內(nèi)讀取吸光度。