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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司

MDA oxLDL ELISA產(chǎn)品概述

時(shí)間:2020-12-15閱讀:1300
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bmgrp BI-20022說明書 

MDA-oxLDL ELISA | BI-20022

 

MDA-oxLDL ELISA | BI-20022

MDA oxLDL ELISA試劑盒亮點(diǎn):

  • 對(duì)MDA加合物的高度特異性
  • 小樣品量– 20 µl /孔
  • 直接測(cè)量

 

  • 1個(gè)

分析特征

  • 方法

    夾心ELISA,,HRP / TMB,,12×8孔可分離試紙

  • 樣品類型

    血清,EDTA血漿,,肝素血漿,,檸檬酸鹽血漿

  • 樣品量

    20 µl /孔

  • 測(cè)定時(shí)間

    90分鐘/ 90分鐘/ 30分鐘

  • 靈敏度

    0.05微克/毫升

  • 標(biāo)準(zhǔn)范圍

    0 – 10 µg / ml

  • 特異性

    人MDA-oxLDL加合物

  • 中間運(yùn)行(n = 4):≤7%CV

    批量分析(n = 3):≤8%CV

  • 采用

    僅供研究使用。

MDA oxLDL ELISA產(chǎn)品概述

MDA oxLDL ELISA試劑盒是一種4小時(shí),,96孔夾心ELISA,,用于定量測(cè)定人血清和血漿(EDTA,肝素,,檸檬酸鹽)樣品中的MDA-oxLDL加合物,。oxldl分析采用基于人血清的標(biāo)準(zhǔn)品,以確保對(duì)生物學(xué)上可靠的數(shù)據(jù)進(jìn)行測(cè)量,。

MDA oxLDL ELISA測(cè)定原理

MDA-oxLDL ELISA試劑盒是一種夾心酶免疫測(cè)定法,,用于定量測(cè)定血清和血漿(EDTA,,肝素,檸檬酸鹽)樣品中的人MDA-oxLDL加合物,。

下圖說明了MDA-oxLDL夾心ELISA的原理:


MDA oxLDL ELISA試劑盒測(cè)定原理

捕獲抗體: 小鼠抗人MDA-oxLDL 單克隆抗體
檢測(cè)抗體:小鼠抗人MDA-oxLDL單克隆抗體,,HRP標(biāo)記
靶抗原: MDA-oxLDL

步,將測(cè)定緩沖液和標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照/樣品移液到微量滴定條的孔中,,這些孔預(yù)先用單克隆小鼠抗人MDA-oxLDL抗體包被,。存在于標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照/樣品中的MDA-oxLDL被孔中的預(yù)包被抗體捕獲,。在洗滌步驟中,,去除所有非特異性未結(jié)合的材料。在第二步中,,將綴合物(單克隆小鼠抗人MDA-oxLDL-HRP)吸取到孔中,,并形成與MDA-oxLDL夾在板上的夾心抗體的三明治。在另一個(gè)洗滌步驟之后,,將底物(TMB,,四甲基聯(lián)苯胺)吸移到孔中。底物的酶催化顏色變化與MDA-oxLDL的量成正比,。使用標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板讀數(shù)器可以檢測(cè)到這種顏色變化,。使用從標(biāo)準(zhǔn)品獲得的值,生成吸光度(光密度,,在450 nm處的OD)與標(biāo)準(zhǔn)濃度的劑量響應(yīng)曲線,。直接從劑量響應(yīng)曲線確定樣品中MDA-oxLDL的濃度。

MDA oxLDL ELISA典型標(biāo)準(zhǔn)曲線

下圖顯示了人oxldl ELISA試劑盒的典型標(biāo)準(zhǔn)曲線,。


MDA oxLDL ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線

MDA oxLDL ELISA試劑盒組件

內(nèi)容

描述

數(shù)量

盤子

小鼠單克隆抗人MDA-oxLDL抗體預(yù)包被的微量滴定條,,位于條帶支架中,包裝在帶干燥劑的鋁袋中

12 x 8測(cè)試

洗車場(chǎng)

濃縮洗滌緩沖液20倍,,自然蓋

1 x 50毫升

ASYBUF

分析緩沖液,,紅色蓋帽,準(zhǔn)備使用

1 x 13毫升

性病

標(biāo)準(zhǔn)1-6(0; 0.62; 1.25; 2.5; 5; 10μg/ ml),,人血清中的MDA-oxLDL,,白色蓋,凍干

6瓶

CTRL鍵

對(duì)照,,白帽子,,凍干的,準(zhǔn)確的濃度,,見標(biāo)簽

1個(gè)小瓶

康杰

偶聯(lián)物(小鼠抗人MDA-oxLDL單克隆抗體-HRP),,琥珀色,準(zhǔn)備使用

1 x 13毫升

潛艇

基材(TMB解決方案),,藍(lán)蓋,,可以使用

1 x 13毫升

停止溶液,,蓋上白帽,準(zhǔn)備使用

1 x 7毫升

儲(chǔ)存說明: MDA-oxLDL ELISA試劑盒中的所有試劑在4°C穩(wěn)定,,直到每種試劑標(biāo)簽上注明的有效期,。

使用說明

  • 樣品收集與儲(chǔ)存
  • 試劑準(zhǔn)備
  • 樣品制備
  • 檢測(cè)方案
  • 計(jì)算結(jié)果

樣品收集與儲(chǔ)存

血清,EDTA血漿,,肝素血漿,,檸檬酸鹽血漿適用于該oxldl ELISA試劑盒。研究期間請(qǐng)勿更改樣品類型,。我們建議對(duì)所有樣品,,標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品進(jìn)行重復(fù)測(cè)量。列出的樣品收集和儲(chǔ)存條件旨在作為一般準(zhǔn)則,。

血清和血漿

 使用EDTA,,肝素或檸檬酸鹽作為抗凝劑,在標(biāo)準(zhǔn)化血清分離管(SST)或標(biāo)準(zhǔn)化血液采集管中收集靜脈血樣,。對(duì)于血清樣品,,讓樣品在室溫下凝結(jié)30分鐘。根據(jù)試管制造商的使用說明離心分離,。立即測(cè)定采集的樣品,,或等分試樣并保存在-25°C或更低的溫度下。脂血或溶血的樣品可能會(huì)產(chǎn)生錯(cuò)誤的結(jié)果,。樣品可以經(jīng)歷至少四個(gè)凍融循環(huán),。

試劑準(zhǔn)備

洗滌緩沖液

1。

使WASHBUF濃縮液達(dá)到室溫,。緩沖液濃縮物中的晶體將在室溫(18-26°C)下溶解,。

2。

將WASHBUF濃縮液按1:20的比例稀釋,,例如50 ml WASHBUF + 950 ml蒸餾水或去離子水,。進(jìn)行測(cè)定時(shí)僅使用稀釋的WASHBUF。

稀釋的WASHBUF在4°C(2-8°C)下可以穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)一個(gè)月,。

血清和血漿測(cè)量的標(biāo)準(zhǔn)和控制

1,。

吸取150 µl蒸餾水或去離子水到每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(STD)和對(duì)照(CTRL)小瓶中。準(zhǔn)確的濃度印在每個(gè)樣品瓶的標(biāo)簽上,。

2,。

在室溫(18-26°C)下放置15分鐘。輕輕渦旋,。

重構(gòu)的STD和CTRL在-25°C或更低的溫度下穩(wěn)定,,直到標(biāo)簽上標(biāo)明的失效日期為止。STD和CTRL在四個(gè)凍融循環(huán)中保持穩(wěn)定,。

樣品制備

將樣品置于室溫并輕輕混合樣品,,以確保樣品均勻,。我們建議對(duì)所有樣品進(jìn)行重復(fù)測(cè)量。

OD值超出標(biāo)準(zhǔn)范圍的高點(diǎn)的樣品可以稀釋STD1(標(biāo)準(zhǔn)品1)或oxLDL陰性人類血清,。建議稀釋度高為1:10,。

MDA oxLDL檢測(cè)方案

在開始測(cè)定之前,請(qǐng)閱讀整個(gè)方案,。

1,。

使樣品和試劑達(dá)到室溫(18-26°C)。

2,。

在協(xié)議表上標(biāo)記STD / CTRL / SAMPLE(標(biāo)準(zhǔn)/對(duì)照/樣品)的位置,。

3。

從鋁袋中取出微量滴定條,。將未使用的干燥劑帶在4°C的鋁袋中存放,。膠條在標(biāo)簽上標(biāo)明的有效期限之前都是穩(wěn)定的。

4,。

向每個(gè)孔中加入100μlASYBUF(測(cè)定緩沖液)。

5,,

一式兩份加入20μlSTD / CTRL / SAMPLE到各自的孔中,,輕輕旋轉(zhuǎn)。

6,。

蓋緊條帶,,在室溫(18-26°C)下孵育90分鐘。

7,。

用300μl稀釋的WASHBUF(洗滌緩沖液)吸取并洗滌孔5次,。用力將紙巾用紙巾輕輕拍打以取出剩余的WASHBUF。

8,。

向每個(gè)孔中加入100μlCONJ(結(jié)合物),。

9。

蓋緊條帶,,在室溫(18-26°C)下孵育90分鐘,。

10。

用300μl稀釋的WASHBUF抽吸并洗孔5次,。用力在一塊紙巾上用力敲打盤子,,以去除剩余的WASHBUF。

11,。

在每個(gè)孔中加入100μlSUB(底物),。

12

在黑暗中于室溫(18-26°C)孵育30分鐘。

13

向每個(gè)孔中添加50μlSTOP(終止溶液),,輕輕旋轉(zhuǎn),。

14,。

如果可用,立即在參考630 nm的450 nm處測(cè)量吸光度,。

計(jì)算結(jié)果

使用450 nm波長(zhǎng)(參考波長(zhǎng)630 nm)在讀板器上讀取所有孔的光密度(OD),。使用能夠生成四參數(shù)對(duì)數(shù)(4-PL)擬合的市售軟件從標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度讀數(shù)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線?;蛘?,將標(biāo)樣在x軸上的濃度相對(duì)于每種標(biāo)樣在y軸上的平均吸光度作圖,并通過圖中的點(diǎn)繪制擬合曲線,。除4-PL以外的曲線擬合算法尚未得到驗(yàn)證,,用戶需要對(duì)其進(jìn)行評(píng)估。

計(jì)算樣品的終濃度時(shí),,必須考慮各自的稀釋系數(shù),。

套件隨附的質(zhì)量控制(QC)協(xié)議顯示了生產(chǎn)日期每個(gè)批次終版本QC的結(jié)果??蛻臬@得的OD數(shù)據(jù)可能會(huì)因各種影響和/或由于保質(zhì)期內(nèi)信號(hào)強(qiáng)度的正常下降而有所不同,。但是,只要濃度高的STD的OD為1.0或更高且CTRL的值在范圍內(nèi)(目標(biāo)范圍,,請(qǐng)參見標(biāo)簽),,這就不會(huì)影響結(jié)果的有效性。

背景與治療領(lǐng)域

氧化的低密度脂蛋白(oxLDLs)在動(dòng)脈粥樣硬化和冠狀動(dòng)脈疾病的進(jìn)展中起重要作用,。低密度脂蛋白(LDL)是血漿膽固醇的主要載體,,由疏水性核心以及極性脂質(zhì)和載脂蛋白B(ApoB)的表面單層組成。氧化應(yīng)激和隨后形成的自由基導(dǎo)致ApoB的過氧化,。丙二醛(MDA)已被確定為L(zhǎng)DL的主要脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物之一,,因此在LDL氧化中起著重要作用。
Biomedica MDA oxLDL ELISA特異性檢測(cè)人血清和血漿中MDA修飾的ApoB,。

  • 心血管疾病

    • 動(dòng)脈粥樣硬化

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