prokazyme dlig120說明書

海藻的Rma DNA連接酶

 € 220,00 – € 320,00

耐高溫NAD +依賴的雙鏈DNA連接酶,，溫度范圍在5到65°C之間,。 

prokazyme DNA連接酶說明書

SKU：dlig120。
類別：酶

描述

來自海生紅球藻的 DNA連接酶是一種熱穩(wěn)定的NAD +依賴性雙鏈DNA連接酶,，溫度范圍介于5至65°C之間,。所述enzym DNA的具有高保真Ë催化結(jié)扎并適合于各種應用，包括基因合成,。

產(chǎn)品Dlig120 Rma DNA連接酶可提供500單位和2000單位,，以及10x反應緩沖液。

商品名：Dlig120S | DNA連接酶500單位| 價格：220.00 EUR

商品名：Dlig120L | DNA Ligase 2000單位| 價格：320.00 EUR

產(chǎn)品描述

介紹：

Rma DNA連接酶催化雙鏈DNA結(jié)構(gòu)中相鄰3′-羥基和5′-磷酸末端的NAD依賴性連接,。與T4 DNA連接酶相反,，Rma DNA連接酶對平末端DNA的片段沒有可檢測的活性。與T4 DNA連接酶不同,，Rma DNA連接酶在宜溫度條件下僅顯示4 bp和2 bp的共粘性末端的小連接活性,。Rma DNA連接酶對RNA靶沒有活性,。從帶有質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中分離和純化Rma DNA連接酶，該質(zhì)粒帶有克隆的DNA連接酶基因,，該基因來自冰島分離的嗜熱細菌Rhodother-mus marinus（1,、2）。Rma連接酶在91°C下的半衰期為7分鐘（2）,。該酶具有廣泛的反應溫度范圍,，宜活性約為55°C。

應用范圍：

Tsc DNA連接酶是需要高溫,，高嚴格性的雙鏈DNA連接的理想酶.Tsc DNA連接酶可用于：

• 來自重疊寡核苷酸的基因合成（12）,。

儲存：
儲存和稀釋緩沖液：20 mM Tris-HCl，50 mM KCl,，0.1 mM EDTA,，0.1％Triton X-100（v / v），1 mM二硫蘇糖醇（DTT）,，50％甘油（v / v）,，pH 7.6（25℃）。當在–15°C至-25°C下儲存時,，Rma DNA連接酶是穩(wěn)定的,。

反應條件：
1 x反應緩沖液（已提供10 x）20 mM Tris-HCl，20 mM KCl,，10 mM MgCl2,、0.1％Nonidet P40（v / v），0.5 mM NAD,，1 mM DTT,，pH 7 ，5（25°C）,。

濃度和單位定義
濃度10 U /μl,。1個單位的Rma DNA連接酶在45°C下在1分鐘內(nèi)催化1μgBstEII消化的λDNA的cos位點的50％連接,。

應用方案：活性測定： 用于單位定義的酶測定是連接用BstII消化的λDNA的cos位點,。

 

在45°C孵育1-15分鐘，在干冰/乙醇浴中停止反應,。在瓊脂糖凝膠上分析之前,，在65°C下孵育10分鐘（融解未連接的cos位點）

通過瓊脂糖凝膠電泳和溴化乙錠染色測定結(jié)果。

質(zhì)量控制：

質(zhì)量控制：
如下所述測定每批Tsc DNA連接酶的活性和污染活性,。

缺少DNA核酸內(nèi)切酶：

• 將0.25μg超螺旋pBR322 DNA與遞增量的Tsc DNA連接酶在25μl反應中于37°C孵育16小時,。大于100 U的Tsc DNA連接酶顯示pBR322 DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)沒有松弛。

• 在37℃和64℃下,，在25 µl反應中用Tsc DNA連接酶誘導加入0.25 µgλ-DNAEco RI / HindIII片段16 h,。100 U的Tsc DNA連接酶顯示未改變條帶模式,。

核酸外切酶的缺失：將
越來越多的Tsc DNA連接酶在50μl含有[3H]標記的DNA的測試緩沖液中于37°C和64°C孵育4小時。顯示無核酸外切酶活性的酶量> 100U,。

缺少Rnases：
根據(jù)制造商協(xié)議,，使用Ambion的RNaseAlertTM Lab Test Kit（目錄號1964）檢測RNase活性。1小時后,，在37°C下孵育XU Tsc DNA連接酶后,，未檢測到RNase活性。

參考文獻：

• Alfredsson GA等,。1988.微生物學雜志,。134：299-306
• Torbjarnardottir SH等。1995.基因161：1-6
• Housby JN等,。2000,。核酸研究。28：e10,。
• Housby JN等,。2001。肛門,。生化,。302：88-94
• Sutton JR等。1992.轉(zhuǎn)基因研究1：228