zeptometrix 0801198說明書

Bovine IgG ELISA (96 Determinations)

CATALOG# 0801198

預期用途

牛IgG-ELISA試劑盒是一種快速,、簡便的酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）方法

用于牛初乳,、牛奶,、血清,、血漿或其他生物液體中牛IgG的測定,?；灲Y(jié)果包括

大部分是現(xiàn)成的試劑，使用不到兩個小時,。試劑盒中的微孔板和檢測抗體

與牛IgG的所有亞類反應一致,。

免疫-TEK牛IgG-ELISA試劑盒僅供研究使用。

試驗原理

涂有牛IgG多克隆抗體的微孔板形成了檢測的捕獲階段,。這些抗體

與牛IgG的所有亞類均勻結(jié)合。捕獲的牛IgG然后與檢測抗體反應,，檢測抗體是

與牛辣根過氧化物酶結(jié)合的多克隆抗牛IgG,。該試劑也與所有

牛IgG的亞類。然后,，以四甲基聯(lián)苯胺為底物,，對井中的酶活性進行定量。

試劑

提供的材料：

•微孔板（1x96孔）：涂有純化山羊抗牛IgG的條帶

檢測抗體（12毫升）：含有共軛山羊抗牛IgG過氧化物酶

•牛IgG標準品（7 mL）：含牛IgG和檢測稀釋液

•分析稀釋劑（100毫升）：含有PBS,、Triton X-100®和2-氯乙酰胺

•洗板緩沖液（125毫升）：含有PBS,、吐溫20®和2-氯乙酰胺

•底物（12毫升）：含有四甲基聯(lián)苯胺（TMB）

•停止溶液（12毫升）：專有配方

•微孔板密封劑（1 pk）：每包10個密封劑

•塑料袋（1袋）：用于儲存未使用的微孔板條

？Triton X-100是Union Carbide Chemicals and Plastics Co.,，Inc.的注冊商標,。Tween 20是帝國化學工業(yè)的注冊商標

需要但未提供的材料：

•一次性手套

•用于制備樣品和IgG標準稀釋液的試管和試管架

•經(jīng)驗證的單通道和多通道可調(diào)微量吸管

•蒸餾水或去離子水

•經(jīng)驗證的培養(yǎng)箱能夠保持37℃+1℃

•量筒和各種燒杯

•經(jīng)驗證的微量滴定板閱讀器

•自動微量滴定板清洗機或手動真空抽吸設備

•計時器

儲存

將所有試劑盒儲存在2-8°C。不要冷凍。未使用的微孔板條應保存在密封袋中,，并用干燥劑

盡量減少暴露在濕氣中,。所有儲存和妥善處理的試劑都是穩(wěn)定的，至少在到期日之前

工具箱標簽,。

注意事項

僅供研究使用,。不用于診斷程序。

•在進行分析之前,，仔細閱讀所有說明,。

•在處理套件組件和試樣時使用通用預防措施*

•為避免交叉污染，對每個樣本使用單獨的移液管,。

•在測試潛在感染性樣本時,，遵守所有適用的地方、州和聯(lián)邦法規(guī)

生物危險品的處置,。

•停止液中含有鹽酸,，可能導致嚴重燒傷。如果接觸到眼睛或皮膚,，請沖洗

立即用水并尋求醫(yī)療救助,。穿防護服和護目鏡。

*《海洋資源綜合報告》,，1988年6月24日,，第37卷，第24期,，第377-382,、387-388頁

試劑的制備

洗板緩沖器

使用前，用蒸餾水或去離子水稀釋10倍洗板緩沖液1:10,。充分混合,。準備1X洗板緩沖液

可在2-8℃下儲存一周。如有以下情況,，可訂購額外的10倍洗板緩沖液（ZMC目錄#：0801060）

需要,。

牛IgG標準曲線

如表所示，給6個試管貼上標簽,。牛IgG標準品的濃度為125ng/mL,，應在分析時稀釋

稀釋如下以制備標準曲線。

樣品稀釋

牛初乳通常含有50-80毫克/毫升的IgG抗體,。牛初乳1:1000000稀釋試驗

初次試驗推薦使用稀釋劑,。

牛乳通常含有約0.5mg/mL的IgG抗體。初次試驗時,，建議使用1:10000稀釋的試驗稀釋液稀釋牛乳,。

牛血清通常含有25-30毫克/毫升的IgG抗體。初次試驗時，建議使用1:500000稀釋的試驗稀釋液稀釋牛血清,。

試驗程序

使用前讓所有試劑達到室溫,。對用于制備標準品和試樣的試管貼上標簽。如果不使用整個96孔板,，從板架上取下多余的板條,，并用干燥劑放入可重新密封的塑料袋中。密封袋并在2-8°C下儲存,。

步驟1：在每個板條的末端標簽上貼上標簽,，以確保在

化驗。

第2步：用移液管將200μl標準品1-6移到兩個孔中,。

第3步：用移液管將每個樣品200μl移到兩個孔中,。

步驟4：用封板器蓋住微孔板，在37℃下孵育30分鐘,。

第五步：吸出每口井的內(nèi)容物,，用1個洗板緩沖液清洗4次。洗的時候,，把井灌滿

300μl 1X洗板緩沖液并抽吸,。執(zhí)行4次加注/吸氣循環(huán)。在后一次清洗循環(huán)后,，*清洗

小心地在一塊吸水紙巾上敲擊盤子,，以吸干盤子。繼續(xù),，直到?jīng)]有可見的液滴

觀察洗板緩沖,。

第6步：用移液管將100μl檢測抗體移到每個標準品和樣品中。

不要在基質(zhì)空白處加入檢測抗體,。

第7步：用封板器蓋住板,，在37℃下孵育30分鐘。

步驟8：使用步驟6所述的洗板緩沖液洗板4次,。

第9步：用吸管將100μl基質(zhì)吸進每個孔,，包括基質(zhì)空白孔。

第十步：在室溫下孵育30分鐘,。含有牛IgG的井中會出現(xiàn)藍色。

第11步：用移液管將100μl停止液移到每個孔中,。將發(fā)生從藍色到黃色的顏色變化,。

第12步：在15分鐘內(nèi)，用微量滴定板閱讀器在450 nm處讀取每個孔的光密度,。

預期結(jié)果

下面是標準曲線的示例,，不應用于計算實際樣本。可以觀察到變化

由于移液管,、培養(yǎng)箱溫度,、讀板器等原因，從一個實驗室到另一個實驗室,。

計算結(jié)果

測試有效期：

•為了使試驗有效,，0 ng/mL標準品和基底空白的平均光密度必須低于0.200。

•125 ng/ml的平均光密度必須大于1.000,。

•當平均光密度值不在標準曲線范圍內(nèi)時,，建議用較大或較小的稀釋度重新分析樣品。

計算：

一,。計算每組標準品和稀釋樣品的平均光密度（OD）值,。

2。使用線性圖形紙或繪圖軟件,，繪制每個標準在Y軸上的平均OD值與X軸上相應的標準濃度,。

三。通過這些點繪制宜擬合曲線以構建標準曲線,。在大多數(shù)情況下,，線性回歸圖是足夠的，但對于準確的結(jié)果,，使用點對點或4參數(shù)logistic回歸,。

四。用標準曲線插值法測定每個稀釋樣品的IgG濃度,。

5個,。乘以用于稀釋每個樣品的稀釋系數(shù)，以確定原始樣品的IgG濃度,。

PROCEDURAL FLOW CHART