mypols VolcanoCell 2G RT-PCR 2x預(yù)混液

VolcanoCell 2G RT-PCR 2x Master Mix

€180,00

Volcano Cell 2G RT-PCR 2x Master Mix Direct PCRs

該混合物已針對(duì)直接電池應(yīng)用進(jìn)行了專門優(yōu)化,。

跳過耗時(shí)且昂貴的RNA純化,。VolcanoCell2G RT-PCR 2x Master Mix使您能夠直接從細(xì)胞懸液或細(xì)胞裂解物中定量和檢測RNA,，而無需純化步驟,。只需分離細(xì)胞,，將細(xì)胞懸浮液直接添加到RT-PCR反應(yīng)混合物中,，放入實(shí)時(shí)儀器中，然后開始即可,。

可選地,，使用裂解緩沖液直接在孔或燒瓶中裂解細(xì)胞，只需旋轉(zhuǎn)并直接將上清液添加到RT-PCR混合物中即可,。

裂解物也可以冷凍并儲(chǔ)存在-20℃,。

帶有“ 0步”方案的便捷RT-PCR

零步協(xié)議節(jié)省時(shí)間

跳過逆轉(zhuǎn)錄步驟。不需要等溫逆轉(zhuǎn)錄步驟,。 

Volcano2G是一種具有PCR活性的逆轉(zhuǎn)錄酶,，非常穩(wěn)定，在95°C下的半衰期> 40分鐘,。

靈敏的RNA檢測

當(dāng)添加實(shí)時(shí)PCR染料時(shí),，Volcano2G DNA聚合酶也可用于實(shí)時(shí)PCR。Volcano2G具有Taq DNA聚合酶樣核酸酶結(jié)構(gòu)域,，使其也適用于基于水解探針的分析,。如此處所示，通過使用基于探針的qPCR分析和零步RT-PCR方案,，使用總RNA的10倍稀釋系列檢測了NONO mRNA,。

來自細(xì)胞的直接RT-PCR

對(duì)于細(xì)胞RNA的可靠RT-PCR，樣品制備步驟*,。然而,，這些步驟費(fèi)力，費(fèi)時(shí)并且需要額外的消耗品,。使用我們的VolcanoCell2G RT-PCR 2x預(yù)混液,，您可以用快速便捷的“零步長”方案代替費(fèi)力的RNA制備。

節(jié)省時(shí)間和金錢

VolcanoCell2G RT-PCR 2x預(yù)混液具有簡化的“零步驟”工作流程,，使您可以規(guī)避費(fèi)力的純化和提取步驟,，從而節(jié)省了時(shí)間和金錢。

出色的靈敏度

VolcanoCell2G RT-PCR 2x實(shí)現(xiàn)了低至單個(gè)細(xì)胞的檢測靈敏度,。在此示例中,，按照VolcanoCell2G協(xié)議從單個(gè)隆德人中腦（LUHMES）細(xì)胞中檢測到GAPDH mRNA。

具有更多示例的出版物可以在“出版物”部分中找到,。

該試劑盒包含一種經(jīng)過工程改造的,，極耐熱的逆轉(zhuǎn)錄酶和組合的DNA聚合酶，包括經(jīng)過特殊優(yōu)化的緩沖液系統(tǒng),，該系統(tǒng)僅需要少量細(xì)胞（100至10.000個(gè)細(xì)胞）,。試劑盒中還包含一個(gè)單獨(dú)的50x裂解緩沖液。

包含的Volcano2G DNA聚合酶經(jīng)過多代定向,，人工進(jìn)化工程化,，在95°C下的半衰期> 40分鐘。它可直接從細(xì)胞懸液或裂解物中進(jìn)行“零步” RT-PCR,，而無需等溫逆轉(zhuǎn)錄步驟,。

VolcanoCell2G RT-PCR 2x預(yù)混液包含所有標(biāo)準(zhǔn)實(shí)時(shí)循環(huán)儀儀器中成功且可靠的RT-PCR所必需的所有組分，并且與常見的RT-PCR檢測方法兼容,，例如熒光實(shí)時(shí)PCR染料或熒光探針,。

推薦的擴(kuò)增子大小應(yīng)在60-300 bp之間。?

請(qǐng)注意,，必須使用跨外顯子-外顯子連接的引物,，以僅將擴(kuò)增限制在mRNA靶標(biāo)上。

通過避免昂貴,，費(fèi)時(shí)的細(xì)胞裂解或RNA純化,，VolcanoCell試劑盒是高通量應(yīng)用，RNAi敲除或基因表達(dá)實(shí)驗(yàn)的理想選擇。預(yù)備2x混合可確?？芍貜?fù)的RT-PCR結(jié)果,，顯著減少設(shè)置時(shí)間并發(fā)生錯(cuò)誤的風(fēng)險(xiǎn)。只需要添加引物和模板,。使用隨附的裂解緩沖液可以輕松制備細(xì)胞裂解液,。但是，理想的擴(kuò)增子大小應(yīng)在60-300 bp之間,！

存儲(chǔ)：

該產(chǎn)品以涼爽包裝出售,。請(qǐng)?jiān)诘诌_(dá)時(shí)將產(chǎn)品存放在-20°C下。通過分裝保存,，大程度地減少凍融循環(huán)次數(shù),。對(duì)于日常使用，我們建議將等分試樣保持在4°C下,。

RT-PCR活性： 對(duì)HEK細(xì)胞在1x裂解緩沖液中的系列稀釋液進(jìn)行了成功的RT-PCR性能測試,。151 bp片段（HPRT1 mRNA）在實(shí)時(shí)PCR循環(huán)儀中擴(kuò)增，并可視化為單個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物,。

DNA聚合酶活性：使用人工DNA模板和DNA引物監(jiān)控Volcano3G DNA聚合酶活性并將其調(diào)整為特定的DNA聚合酶活性,。
酶濃度由蛋白質(zhì)特異性染色確定。請(qǐng)通過[email protected]查詢有關(guān)特定批次濃度的更多信息,。

裂解緩沖液：將HEK細(xì)胞在1x裂解緩沖液中進(jìn)行系列稀釋,，測試其成功的RT-PCR性能。151 bp片段（HPRT1 mRNA）在實(shí)時(shí)PCR循環(huán)儀中擴(kuò)增,，并可視化為單個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物,。