genaxxon M3009.0000說(shuō)明書(shū)

SNP Pol DNA-Polymerase

M3009.0000

產(chǎn)品信息“ SNP Pol DNA聚合酶”

SNP Pol DNA聚合酶用于等位基因的簡(jiǎn)單,，可靠和快速特異性分化,，例如,。CRISPR / Cas9點(diǎn)突變,，檢測(cè)不正確的CRISPR / Cas9產(chǎn)品,，或驗(yàn)證測(cè)序結(jié)果,。無(wú)論是否存在引物模板復(fù)合物不匹配,，SNP Pol DNA聚合酶都能識(shí)別高度特異性,。錯(cuò)配（點(diǎn)突變）必須在引物的3'末端。因此,，突變等位基因可以與野生型等位基因*區(qū)分開(kāi)- 無(wú)需測(cè)序,，因?yàn)樵阱e(cuò)配的情況下聚合酶根本不會(huì)擴(kuò)增。

只需將引物放在假定的點(diǎn)突變上（重要：點(diǎn)突變必須在3'末端）,，聚合酶將以100％的準(zhǔn)確性檢測(cè)該區(qū)域的錯(cuò)配：如果與引物3'末端互補(bǔ)的堿基在DNA上鏈顯示突變而引物未顯示,，則沒(méi)有擴(kuò)增發(fā)生-快速100％確定！
因此,，SNP Pol DNA聚合酶可輕松,，省時(shí)且經(jīng)濟(jì)地用于篩選點(diǎn)突變。

SNP PolTaq DNA聚合酶變異體具有5'-3'核酸酶活性,，因此可與特異性引物探針（如Taqman®探針或分子信標(biāo)）一起使用,。

一次性測(cè)試模式可享受*。在德國(guó)境內(nèi)免運(yùn)費(fèi),！試用樣品價(jià)格將在產(chǎn)品正式訂購(gòu)時(shí)退還,。

描述
的SNP波爾DNA聚合酶（您好 GH 狄單核苷酸scrimination）是高度選擇性的DNA聚合酶。它是專(zhuān)為需要較高區(qū)分率的等位基因特異性區(qū)分而設(shè)計(jì)的,，例如等位基因特異性PCR（ASA）,，等位基因特異性引物延伸（AS-PEX），SNP分析,，基因分型或甲基化特異性PCR（MSP）,。許多DNA聚合酶可耐受錯(cuò)配的引物-模板復(fù)合物。另一方面,，SNP Pol DNA聚合酶可以區(qū)分這些特異性（高區(qū)分度）,，并且僅特異性地提供引物對(duì)*匹配的PCR產(chǎn)物！Genaxxon SNP Pol和SNP PolTaq DNA聚合酶通過(guò)兩個(gè)等位基因之間的等位基因特異性PCR差異高達(dá)100％,，并且在簡(jiǎn)單的qPCR之后,，可以清楚地說(shuō)明存在哪些等位基因,。

等位基因特異性PCR可用于定量野生型序列庫(kù)或背景中的突變率。同樣,，可以通過(guò)等位基因特異性PCR和SNP Pol DNA聚合酶驗(yàn)證由NGS確定的突變頻率,。SNP PolTaq DNA聚合酶非常適合用于液體活檢樣品的分析。有了它,，就可以很好地分析和量化癌癥突變的存在和頻率,。

圖片：應(yīng)用實(shí)例SNP Pol DNA聚合酶

我們建議使用短擴(kuò)增子（約60-200 bp）的引物以獲得良結(jié)果。更長(zhǎng)的擴(kuò)增子也是可能的,。
對(duì)于大于500 bp的較長(zhǎng)擴(kuò)增子,，可能需要添加鎂（+0.5-1.5mM）。

故障排除：
PCR 30個(gè)循環(huán)后無(wú)條帶,！
缺失或弱帶的優(yōu)化程序

-實(shí)時(shí)PCR方法
-檢查dNTP濃度,。這應(yīng)該在200至300μM之間（在PCR中）。
-增加循環(huán)次數(shù)（至少35次,，宜40次）

測(cè)試優(yōu)化- 
循環(huán)數(shù)在端點(diǎn)檢測(cè)中,，循環(huán)數(shù)30并不總是足以產(chǎn)生高度可見(jiàn)的條帶。例如,，以少于200個(gè)DNA拷貝為基線,。因此，應(yīng)該使用實(shí)時(shí)PCR運(yùn)行測(cè)試,，或者可以使用五個(gè)并行PCR,，其中五個(gè)是在五個(gè)不同的循環(huán)后從PCR設(shè)備中提取的（以下示例）。

終點(diǎn)檢測(cè)：
用SNP Pol DNA聚合酶并行進(jìn)行五個(gè)相同的PCR反應(yīng),。
分別在20,、25、30,、35和40個(gè)循環(huán)中,，從循環(huán)儀中取出一個(gè)PCR管,，后將所有五個(gè)反應(yīng)加到瓊脂糖凝膠上,。
這樣就可以很容易地看出，對(duì)于給定的應(yīng)用（起始材料,，靶標(biāo),，引物），PCR中宜的循環(huán)數(shù)是多少,。

帶細(xì)胞裂解物的SNP Pol PCR
動(dòng)物細(xì)胞和大腸桿菌可直接用于SNP Pol DNA聚合酶的PCR,！不需要單獨(dú)的裂解和蛋白酶K消化。
程序PCR方法：

1.每個(gè)PCR方法需要50-500個(gè)細(xì)胞,！
2.用引物和緩沖液準(zhǔn)備PCR混合物,，并置于冰上,！
3.將挑選的菌落直接倒入10-20μL水中（不進(jìn)行單獨(dú)的裂解，不進(jìn)行蛋白酶K消化）,，
短暫渦旋（5秒）,，然后將該細(xì)胞懸液直接加入PCR反應(yīng)中，例如將
10μL的細(xì)胞懸液用于PCR總體積接近20μL,。2-3分鐘的初始變性時(shí)間
就足夠了,，如果需要，可以延長(zhǎng)至5分鐘,。
每個(gè)反應(yīng)的大基因組DNA,。100份相對(duì)較小，但仍然可以使用,。
該細(xì)胞懸浮液的其余部分也可以冷凍掉以進(jìn)行進(jìn)一步測(cè)試,。

可選： 
4.如果可能：進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR！

SNP Pol DNA聚合酶（M3009>）或（M3061>）可與非特異性熒光染料（例如Genaxxon的Green DNA Dye>或SybrGreen®）一起用于實(shí)時(shí)PCR,。當(dāng)使用特定的PCR探針時(shí),，只能使用SNP PolTaq DNA聚合酶，因?yàn)橹挥羞@種酶才具有5'-3'核酸外切酶活性,。

使用我們高質(zhì)量的dNTP套裝（M3015.4100和M3015.0250）或混合物（M3016.1010）>或我們的DNA標(biāo)記>以及我們有利的標(biāo)準(zhǔn)瓊脂糖>,，我們?yōu)槟峁㏄CR的其他產(chǎn)品。

SNP Pol DNA聚合酶的應(yīng)用領(lǐng)域
-監(jiān)測(cè),，驗(yàn)證和檢測(cè)點(diǎn)突變
-鑒定正確或錯(cuò)誤的CRISPR / Cas9產(chǎn)品
-驗(yàn)證/確認(rèn)測(cè)序結(jié)果
-定量突變（例如NGS結(jié)果）
-通過(guò)等位基因檢測(cè)SNP特異性擴(kuò)增（ASA）/等位基因特異性PCR- 
亞硫酸氫鹽處理過(guò)的DNA（CpG甲基化側(cè)）后的甲基化特異性PCR（MSP）
-HLA基因分型
-微測(cè)序
-帶有水解探針的實(shí)時(shí)PCR- 
實(shí)時(shí)多重PCR

- 線蟲(chóng)DAMID-SEQ數(shù)據(jù),。

Sharma R，Ritler D,，Meister P. 
秀麗隱桿線蟲(chóng)發(fā)育過(guò)程中核組織的DNA腺嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶鑒定分析工具,。創(chuàng)世紀(jì)。2016年2月4日,。doi：10.1002 / dvg.22925,。

-用SNPase DNA聚合酶進(jìn)行SNP基因分型的小測(cè)序可通過(guò)以下步驟進(jìn)行：

Lovmar L，F(xiàn)redriksson M,，Liljedahl U,，Sigurdsson S，SyvänenAC,。
通過(guò)微測(cè)序和微陣列的定量評(píng)估揭示了整個(gè)基因組擴(kuò)增DNA的準(zhǔn)確多重SNP基因型,。Nucleic Acids Res。2003; 31：e129 ,。

-HiDi DNA聚合酶的等位基因特異性錯(cuò)配選擇性

鼓M,，Kranaster R，Ewald C，Blasczyk R,，Marx A（2014）Thermus aquaticus DNA聚合酶的變體,，具有在等位基因和甲基化特異性擴(kuò)增中應(yīng)用的增加的選擇性。公共科學(xué)學(xué)報(bào)9（5）：e96640,。DOI：10.1371 / journal.pone.0096640