Biolegend公司的試劑主要包括細胞免疫,、細胞因子、趨化因子,、粘附因子等與癌癥研究,、T調(diào)節(jié)細胞研究、干細胞研究,、先天免疫研究,、細胞周期分析、凋亡研究及特定修飾類抗體等領域相關的試劑,，用于流式,、ELISA、免疫沉淀,、WB,、免疫熒光、免疫組化及體內(nèi)體外功能學試驗,。其中,，Biolegend公司的流式抗體以其具有較寬范圍的熒光選擇及較高的性價比,，為廣大科研工作者所接受！同時,，公司配備了一支經(jīng)驗豐富的技術服務隊伍,，為客戶提供的配色方案及快速的售后處理服務！

biolegend 640952說明書

APC / Fire™750 Annexin V.

其他名稱   Annexin A5

描述

膜聯(lián)蛋白V（或膜聯(lián)蛋白A5）是細胞內(nèi)蛋白質的膜聯(lián)蛋白家族的成員,，其以鈣依賴性方式結合磷脂酰絲氨酸（PS）,。PS通常僅在健康細胞中的質膜細胞內(nèi)小葉上發(fā)現(xiàn)，但在早期細胞凋亡期間,，膜不對稱性喪失并且PS易位至外部小葉,。然后熒光染料標記的膜聯(lián)蛋白V可用于特異性靶向和鑒定凋亡細胞。Annexin V結合緩沖液（目錄號422201）推薦用于膜聯(lián)蛋白V染色,。單獨的膜聯(lián)蛋白V結合不能區(qū)分凋亡細胞和壞死細胞,。因此，我們建議使用我們的Helix NP™Blue（目錄號425305）,，Helix NP™Green（目錄號425303）或Helix NP™NIR（目錄號425301）,。早期凋亡細胞將排除7-AAD和PI，

人T白血病細胞系Jurkat,，用BioLegend的抗人CD95（EOS9.1）mAb（cat.305704）在37℃處理（左）或未處理（右）4小時,，然后用膜聯(lián)蛋白V-APC染色/ Fire TM 750和Helix NP Green（cat.425303,1.25nM）在37℃下在膜聯(lián)蛋白結合緩沖液中15分鐘。 

產(chǎn)品詳情：

反應

所有哺乳動物物種

公式

磷酸鹽緩沖溶液,，pH 7.2,，含有0.09％Sodium azide和0.2％（w / v）BSA（來自美國）。

制備

通過親和層析純化抗體,，并在適宜條件下與APC / Fire TM 750綴合,。該溶液不含未綴合的APC / Fire TM 750和未綴合的抗體。

濃度

批次特定（請聯(lián)系技術支持以獲得濃度和總μg量,，或者如果您有批號,，請使用我們的查找工具。）

存儲和處理

抗體溶液應在2°C至8°C之間進行稀釋,，并避免長時間暴露在光線下,。不要凍結。

應用

FC - 質量測試

推薦用法

通過流式細胞術分析的免疫熒光染色對該產(chǎn)品的每批產(chǎn)品進行質量控制測試,。對于流式細胞術應用,，建議在100μl體積的膜聯(lián)蛋白V結合緩沖液（目錄號422201）中使用該試劑為每100,000,000,000個細胞5-15μg。建議滴定試劑以獲得每種應用的良性能,。

* APC / Fire™750的大激發(fā)波長為650 nm,，大發(fā)射波長為787 nm。

激發(fā)激光

紅色激光（633 nm）

應用筆記

膜聯(lián)蛋白V染色 
1.用冷BioLegend細胞染色緩沖液（目錄號420201）洗滌細胞兩次,，然后以1×10 ⁶  細胞/ ml 的濃度將細胞重懸于膜聯(lián)蛋白V結合緩沖液（目錄號422201）中,。
2.將100μl細胞懸浮液轉移到5ml試管中,。
3.加入5μlAPC/ Fire TM 750膜聯(lián)蛋白V. 
4.加入10μlPI溶液（目錄號421301）或7-AAD（目錄號420403/420404）。 
5.輕輕渦旋細胞,，在室溫（25°C），黑暗中孵育15分鐘,。 
6.向每個管中加入400μl膜聯(lián)蛋白V結合緩沖液（目錄號422201）,。通過流式細胞術分析。

申請參考

（PubMed鏈接表示BioLegend引文）

1. Koopman G,，et al,。1994年血液 84：1415。
2. Vermes I,，et al,。1995. J. Immunol。方法 184：39,。
3. Dachary-Prigent J,，et al。1993. Blood 81：2554,。
4. Sekine C,，et al。2009. Int Immunol,。
5. Grujic M,，et al。2010. J. Immunol,。185：1730

抗原詳細信息

生物學領域

細胞凋亡/腫瘤抑制因子/細胞死亡,，細胞生物學，神經(jīng)科學

相關常見問題

我可以凍結膜聯(lián)蛋白V結合物嗎,？

它不應該被凍結,，因為它會導致由于二聚化而喪失生物活性。

膜聯(lián)蛋白V染色期間可以使用RPMI嗎,？

遵循產(chǎn)品數(shù)據(jù)表中所述的協(xié)議,。此外，RPMI 1640具有相對高濃度的磷酸鹽和低鈣離子濃度,，這對膜聯(lián)蛋白與其目標磷脂酰絲氨酸（PS）的結合產(chǎn)生負面影響,。使用膜聯(lián)蛋白V測量細胞死亡也可能受到冰上孵育時間，鈣濃度和培養(yǎng)基類型的顯著影響,。

pH和染色溫度如何影響膜聯(lián)蛋白V-磷脂酰絲氨酸的結合,？

膜聯(lián)蛋白 - 磷脂酰絲氨酸結合在pH 5.2以下并且在42℃的溫度下延長孵育時丟失。

您的Annexin是如何制作的以及它涵蓋的序列是什么,？

它在大腸桿菌中制備,，覆蓋人aa Met1-Asp320,。

Annexin V是否適合與CytoF®的Maxpar®試劑盒結合使用？

Maxpar®標記試劑盒需要部分還原蛋白質,，因此可以通過還原抗體鉸鏈區(qū)的SH基團引入金屬螯合物,。人膜??聯(lián)蛋白V僅含有一個半胱氨酸，據(jù)報道它是化學惰性的,。因此,，Maxpar®標簽協(xié)議不會與膜聯(lián)蛋白V工作，除非一個自由的-SH基團可以引入到膜聯(lián)蛋白V.有關膜聯(lián)蛋白V請咨詢發(fā)表論文像這樣的SH-介導的共軛更多信息一個,。

為什么我需要使用Annexin V Binding Buffer,？

膜聯(lián)蛋白V結合需要溶液中存在鈣。因此,，我們提供Annexin V結合緩沖液（目錄號422201）,，它針對膜聯(lián)蛋白V染色的良性能進行了優(yōu)化。