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上海起發(fā)FRT-PGK-gb2-neo-FRT-loxP說明書

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gene bridges A004

FRT-PGK-gb2-neo-FRT-loxP

 

 

Pro- and eukaryotic neomycin selection cassette flanked by FRT-sites and one additional downstream loxP site

原核和真核新霉素選擇盒兩側有frt位點和一個額外的下游loxp位點,。

  • ID: A004

描述

 

設計PGK-gb2-neo-FRT-loxP模板以分別在原核和真核細胞中選擇卡那霉素/新霉素,。

它結合了用于在大腸桿菌中表達卡那霉素抗性的原核啟動子(gb2)和用于在哺乳動物細胞中表達新霉素抗性的真核啟動子(PGK),。原核啟動子gb2是Em7啟動子的略微修飾形式; 它比通常使用的Tn5啟動子介導更高的轉錄效率,。小鼠磷酸葡萄糖激酶基因(PGK)的啟動子用作真核啟動子,。合成的多腺苷酸化信號終止卡那霉素/新霉素表達,。盒子側翼為FRT位點,以便隨后通過Flp重組酶切除,。另外的單個loxP位點位于盒的3'末端,。*不是我和Xho我的位點位于盒子側面,便于克隆限制性位點,。使用提供的PCR模板,,可以容易地產生側翼為任何其他限制性位點的PGK-gb2-neo-FRT-loxP盒,以將盒克隆到所選擇的載體中,??梢酝ㄟ^在PCR引物中添加相應的序列來引入限制性位點。該模板可以容易地用于產生由Red / ET重組介導的靶向構建體,。

PGK-gb2-neo-FRT-loxP模板不是線性的,而是基于質粒的(大小為3,485bp),。由于其R6K起源,,質粒不能在大多數(shù)大腸桿菌菌株中復制,。因此PCR產物可以直接用于下游應用而無需任何進一步純化。使用每個反應1μl作為模板,,可以進行至少20次PCR反應,。

內容

  • FRT-PGK-gb2-neo-FRT-loxP:PCR模板(50 ng/μl,20μl)

  • 手冊

序列

FRT-PGK-GB2-NEO-FRT-的loxP

FRT  啟動子  neo   loxP  終止子
 

 

AATTAACCCTCACTAAAGGGCGGCCGC GAAGTTCCTATTCTCTAGAAAGTATAGG AACTTC ATTCTACCGGGTAGGGGAGGCGCTTTTCCCAAGGCAGTCTGGAGCATGC GCTTTAGCAGCCCCGCTGGGCACTTGGCGCTACACAAGTGGCCTCTGGCCTCGCA CACATTCCACATCCACCGGTAGGCGCCAACCGGCTCCGTTCTTTGGTGGCCCCTT CGCGCCACCTTCCACTCCTCCCCTAGTCAGGAAGTTCCCCCCCGCCCCGCAGCTC GCGTCGTGCAGGACGTGACAAATGGAAGTAGCACGTCTCACTAGTCTCGTGCAGA TGGACAGCACCGCTGAGCAATGGAAGCGGGTAGGCCTTTGGGGCAGCGGCCAATA GCAGCTTTGCTCCTTCGCTTTCTGGGCTCAGAGGCTGGGAAGGGGTGGGTCCGGG GGCGGGCTCAGGGGCGGGCTCAGGGGCGGGGCGGGCGCCCGAAGGTCCTCCGGAG GCCCGGCATTCTGCACGCTTCAAAAGCGCACGTCTGCCGCGCTGTTCTCCTCTTC CTCATCTCCGGGCCTTTCGACCTGCAGCAGCACGTGTTGACAATTAATCATCGGC ATAGTATATCGGCATAGTATAATACGACAAGGTGAGGAACTAAACCATGGGATCG GCCATTGAACAAGATGGATTGCACGCAGGTTCTCCGGCCGCTTGGGTGGAGAGGC TATTCGGCTATGACTGGGCACAACAGACGATCGGCTGCTCTGATGCCGCCGTGTT CCGGCTGTCAGCGCAGGGGCGCCCGGTTCTTTTTGTCAAGACCGACCTGTCCGGT GCCCTGAATGAACTGCAGGACGAGGCAGCGCGGCTATCGTGGCTGGCCACGACGG GCGTTCCTTGCGCAGCTGTGCTCGACGTTGTCACTGAAGCGGGAAGGGACTGGCT GCTATTGGGCGAAGTGCCGGGGCAGGATCTCCTGTCATCTCACCTTGCTCCTGCC GAGAAAGTATCCATCATGGCTGATGCAATGCGGCGGCTGCATACGCTTGATCCGG CTACCTGCCCATTCGACCACCAAGCGAAACATCGCATCGAGCGAGCACGTACTCG GATGGAAGCCGGTCTTGTCGATCAGGATGATCTGGACGAAGAGCATCAGGGGCTC GCGCCAGCCGAACTGTTCGCCAGGCTCAAGGCGCGCATGCCCGACGGCGAGGATC TCGTCGTGACCCATGGCGATGCCTGCTTGCCGAATATCATGGTGGAAAATGGCCG CTTTTCTGGATTCATCGACTGTGGCCGGCTGGGTGTGGCGGACCGCTATCAGGAC ATAGCGTTGGCTACCCGTGATATTGCTGAAGAGCTTGGCGGCGAATGGGCTGACC GCTTCCTCGTGCTTTACGGTATCGCCGCTCCCGATTCGCAGCGCATCGCCTTCTA TCGCCTTCTTGACGAGTTCTTCTGAGCGGGACTCTGGGGTTCGAATAAAGACCGA CCAAGCGACGTCTGAGAGCTCCCTGGCGAATTCGGTACCAATAAAAGAGCTTTAT TTTCATGATCTGTGTGTTGGTTTTTTTTTTGGGGGGGG GAAGTTCCTATTCTCTAG AAAGTATAGGAACTTC AAGCTT ATAACTTCGTATAGCATACATTATACGAAGTTA TCTCGAGCCCTATAGTGAGTCGTATTA

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