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€805.00
酶免疫測(cè)定法測(cè)定大腸桿菌 BL21(DE3)細(xì)胞系中的HCP ,。
起動(dòng)裝置為客戶提供了所有必要的組件,,可以快速,輕松地為特定過程選擇合適的套件類型(A或D),。
入門套件包括四個(gè)完整的即用型套件:
1x A型,,1x D型
每種套件類型包含:
1預(yù)期用途
提供的Ecoli 360 HCP酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒是一種夾心酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法,,將以微測(cè)試板形式進(jìn)行。
本試驗(yàn)用于大腸桿菌宿主Ecoli-HCP的體外定量測(cè)定,。
細(xì)胞蛋白)重組生產(chǎn)過程中的相關(guān)樣品
各自的Ecoli細(xì)胞系,。
該試劑盒包含執(zhí)行HCP酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)所需的所有試劑。
測(cè)定范圍包括2 ng/ml到100 ng/ml的Ecoli HCP的初步工作范圍,。
2.試劑盒中提供的試劑和材料
3.所需但不隨套件提供的材料和設(shè)備
•超純水(至少雙蒸餾質(zhì)量),,用于稀釋洗滌緩沖液(10x)
•吸水紙巾,用于去除微試板清洗后的殘留液體,。
•用于制備標(biāo)準(zhǔn),、控制和樣品的合適反應(yīng)管
•適合洗滌緩沖液的容器
•適用于有效多通道移液的試劑庫(kù)
•培養(yǎng)過程中覆蓋微型測(cè)試板的蓋子
•軌道微測(cè)試板振動(dòng)篩(約500轉(zhuǎn)/分)和渦流混合器
•微型測(cè)試板清洗機(jī)(也可以手動(dòng)清洗)
•精密移液管(體積可調(diào),,從10微升到5000微升),,帶有合適的
•多通道移液管(100μl),帶有合適的
•用于在450 nm(參考波長(zhǎng)620)下測(cè)量光密度的微型板閱讀器-
690牛米)
4試劑的儲(chǔ)存
所有提供的試劑(1到8)應(yīng)在2-10°C下冷藏,,并在使用前使用,。
到期日期。
5試驗(yàn)原理
Ecoli 360 HCP酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是基于96孔微試板的夾心酶免疫分析,。
(1X8F條格式),。可能含有Ecoli-HCP雜質(zhì)的樣品在微型測(cè)試板中培養(yǎng),。
預(yù)先涂有多克隆山羊Ecoli-HCP特異性捕獲抗體和不同Ecoli-HCP標(biāo)準(zhǔn)濃度孵育后校準(zhǔn)曲線及平板
去除未結(jié)合成分的洗滌步驟,,一種特定的生物素結(jié)合Ecoli-HCP特異性加入檢測(cè)抗體,進(jìn)一步洗滌后,,結(jié)合檢測(cè)抗體依次與酶結(jié)合物(鏈霉親和素結(jié)合過氧化物酶)作為示蹤劑反應(yīng),。
洗滌步驟,以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為酶底物進(jìn)行顯色反應(yīng),。產(chǎn)生藍(lán)色,。在底物培養(yǎng)時(shí)間結(jié)束時(shí),反應(yīng)被加入硫酸,,將藍(lán)色變?yōu)辄S色,,測(cè)量光密度。
在450 nm(參考波長(zhǎng)620-690 nm)波長(zhǎng)下進(jìn)行光度測(cè)量,。
井內(nèi)密度與井內(nèi)Ecoli-HCP濃度成正比,。
根據(jù)相應(yīng)的Ecoli-HCP計(jì)算未知樣品的濃度。
校準(zhǔn)曲線,。
警告和注意事項(xiàng)
-本試劑盒僅用于體外研究,,只能由合格人員使用。
-開始分析前,,仔細(xì)閱讀說明書,。
-注意批號(hào)和有效期,。不要混合不同批次的試劑。不要使用過期的,。
試劑,。
-遵循良好的實(shí)驗(yàn)室實(shí)踐和安全指南。穿著實(shí)驗(yàn)室外套,、一次性手套和
必要時(shí)戴防護(hù)眼鏡,。
-試劑盒中的某些試劑含有Proclin®300作為防腐劑。這些試劑可能會(huì)腐蝕眼睛,。
以及皮膚刺激,,應(yīng)小心處理。如果接觸到眼睛或皮膚,,
立即用水沖洗,。
-儲(chǔ)存避光底物溶液。
-停止溶液由0.5摩爾硫酸組成,。該試劑具有腐蝕性,,可能導(dǎo)致
眼睛和皮膚有刺激性。應(yīng)小心處理,。如果接觸到眼睛或皮膚,,
立即用水沖洗。
-剩余的試劑盒試劑和準(zhǔn)備好的溶液必須被視為潛在危險(xiǎn),。
根據(jù)國(guó)家的安全指南和法規(guī)進(jìn)行廢物處理,。
7樣品處理和儲(chǔ)存
工藝衍生樣品中HCP的穩(wěn)定性尚未得到研究,因此,,樣品
應(yīng)冷藏(2°-10°C)或冷凍(等于或低于-20°C),,具體取決于
樣品中重組產(chǎn)物的溫度要求。一般來說,,反復(fù)凍結(jié)/
應(yīng)避免樣品解凍,。
8試劑制備
8.1清洗緩沖液的制備(1X)
使用前用超純水(例如100 ml 10x)稀釋洗滌緩沖液10x(2)1:10
用900毫升超純水濃縮,洗滌液(1X)在室內(nèi)穩(wěn)定,。
溫度,,可在準(zhǔn)備日后使用兩周。
8.2編制Ecoli HCP標(biāo)準(zhǔn)
本試劑盒中提供的HCP標(biāo)準(zhǔn)是由Ecoli菌株制備的主標(biāo)準(zhǔn),。
BL21或W3110細(xì)胞溶解物,,調(diào)節(jié)主標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)濃度。
基于Bradford蛋白質(zhì)法,。
Ecoli 360 HCP酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)濃度應(yīng)根據(jù)
在進(jìn)行分析之前,,試劑盒中相應(yīng)的Ecoli HCP標(biāo)準(zhǔn)(4)。
Ecoli 360 HCP Elisa試劑盒說明書Biogenes GmbH版本2018年1月
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8在包含分析工作的分析緩沖液(3)中制備了ELISA標(biāo)準(zhǔn)品(S1至S8)。
根據(jù)以下稀釋方案,,范圍(約2 ng/ml至100 ng/ml Ecoli HCP),。
標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)僅在編制之日使用。
8.3檢測(cè)器抗體工作液(1X)的制備
用分析緩沖液(3)稀釋檢測(cè)器抗體100x溶液(5)1:100,,進(jìn)行一次微試驗(yàn),。
將120μl的100x濃縮液與12 ml分析緩沖液混合。此項(xiàng)工作
溶液只能在配制當(dāng)天使用,。
8.4酶結(jié)合工作液(1X)的制備
用分析緩沖液(3)稀釋酶偶聯(lián)物100x溶液(6)1:100,,進(jìn)行一次微試驗(yàn)。
將120μl的100x濃縮液與12 ml分析緩沖液混合,。此項(xiàng)工作
溶液只能在配制當(dāng)天使用,。
9樣品制備
如果存在集料,應(yīng)通過離心去除集料,,以確保適當(dāng)
分析性能,。一般來說,所有樣品工作稀釋液只能在
準(zhǔn)備工作,。
在分析之前,,應(yīng)使用分析緩沖液(3)稀釋樣品,。小樣品稀釋度
應(yīng)為1:2,。每種樣品類型的宜樣品稀釋度必須由用戶確定,
根據(jù)HCP含量,,考慮分析工作范圍,。
10化驗(yàn)程序
所有酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定步驟均在室溫(18-26°C)下進(jìn)行。
使用前,,讓試劑盒的所有材料和試劑達(dá)到室溫,。
在達(dá)到室溫之前,不要打開預(yù)涂微型測(cè)試板(1)的箔袋,。
未用于分析的剩余板條應(yīng)重新包裝到袋中
干燥劑,。把袋子封緊,以便冷藏,。
在所有孵育步驟中,,培養(yǎng)皿應(yīng)蓋上蓋子(不隨試劑盒一起提供),以便
防止溶液蒸發(fā)和污染,。
1,。用標(biāo)準(zhǔn)品和樣品培養(yǎng):
用100μl/孔的Ecoli HCP標(biāo)準(zhǔn)品和分析對(duì)照品以及稀釋液填充平板。
樣品和連續(xù)搖動(dòng)培養(yǎng)2小時(shí),。標(biāo)準(zhǔn),,分析控制和
應(yīng)至少對(duì)樣品進(jìn)行重復(fù)分析。建議使用三種方法。
2,。清洗:
去除洗井內(nèi)容物,,用250微升/洗井沖洗板4x。
緩沖器(1X),。洗完后,,將板倒置,用強(qiáng)力攻絲將殘液丟棄,。
吸水紙上的盤子,。
三。與檢測(cè)抗體孵育:
用100μl/孔的檢測(cè)抗體工作液(1X)填充平板并孵化,。
連續(xù)搖動(dòng)1.5小時(shí),。
4。清洗:
去除洗井內(nèi)容物,,用250微升/洗井沖洗板4x,。
緩沖器(1X)。洗完后,,將板倒置,,用強(qiáng)力攻絲將殘液丟棄。
吸水紙上的盤子,。
5,。與酶結(jié)合物孵育:
用100μl/孔的酶結(jié)合工作液(1X)填充培養(yǎng)板并孵化。
持續(xù)搖晃20分鐘,。
6,。清洗:
去除洗井內(nèi)容物,用250微升/洗井沖洗板4x,。
緩沖器(1X),。洗完后,將板倒置,,用強(qiáng)力攻絲將殘液丟棄,。
吸水紙上的盤子。
7,。用底物溶液培養(yǎng)并停止:
加入100μl/孔的底物溶液(7),,用
連續(xù)搖晃。如果15分鐘后顏色發(fā)展太低,,則基板
潛伏期可延長(zhǎng)至30分鐘,。
直接向板中加入100μl/孔的停止液(8),停止顏色反應(yīng),。
產(chǎn)生黃色產(chǎn)品,。
8。測(cè)量:
用多通道顯微板閱讀器測(cè)量450 nm(OD450)處的光密度,并
給出分析的原始數(shù)據(jù),。620 nm到690 nm之間的參考波長(zhǎng)為
推薦,。
Ecoli 360 HCP Elisa試劑盒說明書Biogenes GmbH版本2018年1月
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11計(jì)算
為了生成標(biāo)準(zhǔn)曲線和分析控制和樣品的計(jì)算,平均
對(duì)應(yīng)復(fù)制每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的OD450值,。
借助適當(dāng)?shù)能浖蓸?biāo)準(zhǔn)曲線,,宜使用非線性曲線
四參數(shù)或五參數(shù)方程的回歸模式。
根據(jù)校準(zhǔn)曲線計(jì)算的未知樣品濃度必須乘以
樣品的稀釋系數(shù),。
請(qǐng)輸入賬號(hào)
請(qǐng)輸入密碼
請(qǐng)輸驗(yàn)證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實(shí)性,、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),,化工儀器網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任,。
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