德國biogenes大腸桿菌 BL21檢測試劑盒

E.COLI|360 HCP ELISA BL21(DE3) STARTER SET

€805.00

酶免疫測定法測定大腸桿菌  BL21（DE3）細(xì)胞系中的HCP ,。

起動裝置為客戶提供了所有必要的組件,，可以快速，輕松地為特定過程選擇合適的套件類型（A或D）,。

入門套件包括四個完整的即用型套件：

1x A型,，1x D型

每種套件類型包含：

• 預(yù)涂96孔微量測試板
• 標(biāo)準(zhǔn)大腸桿菌-HCP
• 抗體結(jié)合物
• 酶結(jié)合物
• 洗滌緩沖液
• 分析緩沖液
• 底物緩沖液
• 停止解決方案

1預(yù)期用途
提供的Ecoli 360 HCP酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒是一種夾心酶聯(lián)免疫吸附測定法，將以微測試板形式進(jìn)行,。
本試驗用于大腸桿菌宿主Ecoli-HCP的體外定量測定,。
細(xì)胞蛋白）重組生產(chǎn)過程中的相關(guān)樣品
各自的Ecoli細(xì)胞系。
該試劑盒包含執(zhí)行HCP酶聯(lián)免疫吸附試驗所需的所有試劑,。
測定范圍包括2 ng/ml到100 ng/ml的Ecoli HCP的初步工作范圍,。

2.試劑盒中提供的試劑和材料

3.所需但不隨套件提供的材料和設(shè)備
•超純水（至少雙蒸餾質(zhì)量），用于稀釋洗滌緩沖液（10x）
•吸水紙巾,，用于去除微試板清洗后的殘留液體,。
•用于制備標(biāo)準(zhǔn)、控制和樣品的合適反應(yīng)管
•適合洗滌緩沖液的容器
•適用于有效多通道移液的試劑庫
•培養(yǎng)過程中覆蓋微型測試板的蓋子
•軌道微測試板振動篩（約500轉(zhuǎn)/分）和渦流混合器
•微型測試板清洗機(jī)（也可以手動清洗）
•精密移液管（體積可調(diào)，從10微升到5000微升）,，帶有合適的
•多通道移液管（100μl）,，帶有合適的
•用于在450 nm（參考波長620）下測量光密度的微型板閱讀器-
690牛米）

4試劑的儲存
所有提供的試劑（1到8）應(yīng)在2-10°C下冷藏,，并在使用前使用,。
到期日期。
5試驗原理
Ecoli 360 HCP酶聯(lián)免疫吸附試驗是基于96孔微試板的夾心酶免疫分析,。
（1X8F條格式）,。可能含有Ecoli-HCP雜質(zhì)的樣品在微型測試板中培養(yǎng),。
預(yù)先涂有多克隆山羊Ecoli-HCP特異性捕獲抗體和不同Ecoli-HCP標(biāo)準(zhǔn)濃度孵育后校準(zhǔn)曲線及平板
去除未結(jié)合成分的洗滌步驟,，一種特定的生物素結(jié)合Ecoli-HCP特異性加入檢測抗體，進(jìn)一步洗滌后,，結(jié)合檢測抗體依次與酶結(jié)合物（鏈霉親和素結(jié)合過氧化物酶）作為示蹤劑反應(yīng),。
洗滌步驟，以四甲基聯(lián)苯胺（TMB）為酶底物進(jìn)行顯色反應(yīng),。產(chǎn)生藍(lán)色,。在底物培養(yǎng)時間結(jié)束時，反應(yīng)被加入硫酸,，將藍(lán)色變?yōu)辄S色,，測量光密度。
在450 nm（參考波長620-690 nm）波長下進(jìn)行光度測量,。

井內(nèi)密度與井內(nèi)Ecoli-HCP濃度成正比,。
根據(jù)相應(yīng)的Ecoli-HCP計算未知樣品的濃度。
校準(zhǔn)曲線,。

警告和注意事項
-本試劑盒僅用于體外研究,，只能由合格人員使用。
-開始分析前,，仔細(xì)閱讀說明書,。
-注意批號和有效期。不要混合不同批次的試劑,。不要使用過期的,。
試劑。
-遵循良好的實驗室實踐和安全指南,。穿著實驗室外套,、一次性手套和
必要時戴防護(hù)眼鏡。
-試劑盒中的某些試劑含有Proclin®300作為防腐劑,。這些試劑可能會腐蝕眼睛,。
以及皮膚刺激，應(yīng)小心處理,。如果接觸到眼睛或皮膚,，
立即用水沖洗,。
-儲存避光底物溶液。
-停止溶液由0.5摩爾硫酸組成,。該試劑具有腐蝕性,，可能導(dǎo)致
眼睛和皮膚有刺激性。應(yīng)小心處理,。如果接觸到眼睛或皮膚,，
立即用水沖洗。
-剩余的試劑盒試劑和準(zhǔn)備好的溶液必須被視為潛在危險,。
根據(jù)國家的安全指南和法規(guī)進(jìn)行廢物處理,。
7樣品處理和儲存
工藝衍生樣品中HCP的穩(wěn)定性尚未得到研究，因此,，樣品
應(yīng)冷藏（2°-10°C）或冷凍（等于或低于-20°C）,，具體取決于
樣品中重組產(chǎn)物的溫度要求。一般來說,，反復(fù)凍結(jié)/
應(yīng)避免樣品解凍,。
8試劑制備
8.1清洗緩沖液的制備（1X）
使用前用超純水（例如100 ml 10x）稀釋洗滌緩沖液10x（2）1:10
用900毫升超純水濃縮，洗滌液（1X）在室內(nèi)穩(wěn)定,。
溫度,，可在準(zhǔn)備日后使用兩周。

8.2編制Ecoli HCP標(biāo)準(zhǔn)
本試劑盒中提供的HCP標(biāo)準(zhǔn)是由Ecoli菌株制備的主標(biāo)準(zhǔn),。
BL21或W3110細(xì)胞溶解物,，調(diào)節(jié)主標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)濃度。
基于Bradford蛋白質(zhì)法,。
Ecoli 360 HCP酶聯(lián)免疫吸附測定的標(biāo)準(zhǔn)濃度應(yīng)根據(jù)
在進(jìn)行分析之前,，試劑盒中相應(yīng)的Ecoli HCP標(biāo)準(zhǔn)（4）。
Ecoli 360 HCP Elisa試劑盒說明書Biogenes GmbH版本2018年1月
- 4—
8在包含分析工作的分析緩沖液（3）中制備了ELISA標(biāo)準(zhǔn)品（S1至S8）,。
根據(jù)以下稀釋方案,，范圍（約2 ng/ml至100 ng/ml Ecoli HCP）。
標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)僅在編制之日使用,。

8.3檢測器抗體工作液（1X）的制備
用分析緩沖液（3）稀釋檢測器抗體100x溶液（5）1:100,，進(jìn)行一次微試驗。
將120μl的100x濃縮液與12 ml分析緩沖液混合,。此項工作
溶液只能在配制當(dāng)天使用,。
8.4酶結(jié)合工作液（1X）的制備
用分析緩沖液（3）稀釋酶偶聯(lián)物100x溶液（6）1:100，進(jìn)行一次微試驗,。
將120μl的100x濃縮液與12 ml分析緩沖液混合,。此項工作
溶液只能在配制當(dāng)天使用。
9樣品制備
如果存在集料，應(yīng)通過離心去除集料,，以確保適當(dāng)
分析性能,。一般來說，所有樣品工作稀釋液只能在
準(zhǔn)備工作,。
在分析之前,，應(yīng)使用分析緩沖液（3）稀釋樣品。小樣品稀釋度
應(yīng)為1:2,。每種樣品類型的宜樣品稀釋度必須由用戶確定,，
根據(jù)HCP含量,，考慮分析工作范圍,。

10化驗程序
所有酶聯(lián)免疫吸附測定步驟均在室溫（18-26°C）下進(jìn)行。
使用前,，讓試劑盒的所有材料和試劑達(dá)到室溫,。
在達(dá)到室溫之前，不要打開預(yù)涂微型測試板（1）的箔袋,。
未用于分析的剩余板條應(yīng)重新包裝到袋中
干燥劑,。把袋子封緊，以便冷藏,。
在所有孵育步驟中,，培養(yǎng)皿應(yīng)蓋上蓋子（不隨試劑盒一起提供），以便
防止溶液蒸發(fā)和污染,。
1,。用標(biāo)準(zhǔn)品和樣品培養(yǎng)：
用100μl/孔的Ecoli HCP標(biāo)準(zhǔn)品和分析對照品以及稀釋液填充平板。
樣品和連續(xù)搖動培養(yǎng)2小時,。標(biāo)準(zhǔn),，分析控制和
應(yīng)至少對樣品進(jìn)行重復(fù)分析。建議使用三種方法,。
2,。清洗：
去除洗井內(nèi)容物，用250微升/洗井沖洗板4x,。
緩沖器（1X）,。洗完后，將板倒置,，用強(qiáng)力攻絲將殘液丟棄,。
吸水紙上的盤子。
三,。與檢測抗體孵育：
用100μl/孔的檢測抗體工作液（1X）填充平板并孵化,。
連續(xù)搖動1.5小時。
4。清洗：
去除洗井內(nèi)容物,，用250微升/洗井沖洗板4x,。
緩沖器（1X）。洗完后,，將板倒置,，用強(qiáng)力攻絲將殘液丟棄。
吸水紙上的盤子,。
5,。與酶結(jié)合物孵育：
用100μl/孔的酶結(jié)合工作液（1X）填充培養(yǎng)板并孵化。
持續(xù)搖晃20分鐘,。
6,。清洗：
去除洗井內(nèi)容物，用250微升/洗井沖洗板4x,。
緩沖器（1X）,。洗完后，將板倒置,，用強(qiáng)力攻絲將殘液丟棄,。
吸水紙上的盤子。
7,。用底物溶液培養(yǎng)并停止：
加入100μl/孔的底物溶液（7）,，用
連續(xù)搖晃。如果15分鐘后顏色發(fā)展太低,，則基板
潛伏期可延長至30分鐘,。
直接向板中加入100μl/孔的停止液（8），停止顏色反應(yīng),。
產(chǎn)生黃色產(chǎn)品,。

8。測量：
用多通道顯微板閱讀器測量450 nm（OD450）處的光密度,，并
給出分析的原始數(shù)據(jù),。620 nm到690 nm之間的參考波長為
推薦。
Ecoli 360 HCP Elisa試劑盒說明書Biogenes GmbH版本2018年1月
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11計算
為了生成標(biāo)準(zhǔn)曲線和分析控制和樣品的計算,，平均
對應(yīng)復(fù)制每個標(biāo)準(zhǔn)的OD450值,。
借助適當(dāng)?shù)能浖蓸?biāo)準(zhǔn)曲線，宜使用非線性曲線
四參數(shù)或五參數(shù)方程的回歸模式,。
根據(jù)校準(zhǔn)曲線計算的未知樣品濃度必須乘以
樣品的稀釋系數(shù),。