immuquest IQ580說明書

橋粒芯蛋白2抗體[7H9]

使用橋粒芯蛋白2抗體[7H9]在A431細胞裂解物上進行Western印跡

目錄號：IQ580

£226.00

目標抗原

Desmoglein 2

主要說明

小鼠抗橋粒芯糖蛋白2 [7H9]

目錄編號

IQ580

數(shù)量

0.1毫升

濃度

1mg / ml的

克隆

7H9

主辦

老鼠

同型

的IgG1

免疫原

人橋粒芯糖蛋白-2的氨基酸37-164與GST融合

骨髓瘤/融合伴侶

NS1骨髓瘤

物種反應性

人的

純化

蛋白A親和色譜

格式

純化的抗體含有PBS + 0.1％疊氮化NA

應用

WB,，ICC / IF

稀釋液

宜抗體稀釋應通過滴定確定,，但作為指導起點

WB 1：100 160 kDa波段（特別識別橋粒芯糖蛋白-2的前體區(qū)域）

參考

Keim，S,。等,。人。針對人橋粒芯糖蛋白-2前體的單克隆抗體的產(chǎn)生和表征,。雜交瘤卷 27號：249-258（2008）PUBMED

數(shù)據(jù)庫鏈接

Entrez基因：1829  人類

Entrez Gene：13511  鼠標

Omim：125671  人類

SwissProt：Q14126  人類

SwissProt：O55111  鼠標

Unigene：412597  人類

Unigene：345891  鼠標

也稱為

ARVC 10抗體; ARVC10抗體; ARVD 10抗體; ARVD10抗體; Cadherin家族成員5抗體; CDHF 5抗體; CDHF5抗體; CMD1BB抗體; Desmoglein 2抗體

本產(chǎn)品僅供研究使用,。不用于治療或診斷用途。

細胞間橋粒連接的組成部分,。參與斑塊蛋白和介導細胞 - 細胞粘附的中間絲的相互作用

免疫熒光方案 - 甲醛固定

   1.從Tcunit收集細胞,，并用吸力從培養(yǎng)皿中取出培養(yǎng)基,。
   2.用1x PBS洗滌并取出。
   3.在室溫下在軌道振蕩器上將細胞在預熱（37℃）對甲醛中孵育12分鐘,。
   4.去除PFA并在室溫下在1x PBS中的0.5％Triton X-100中孵育5分鐘,。
   5.準備封閉試劑，這也是抗體稀釋劑,。
   6.在室溫下用1x PBS洗滌細胞2次,，在軌道振蕩器上洗滌4分鐘/洗滌。
   7.在室溫下用1％NCS和1x PBS封閉30分鐘,。
   8.準備一抗（50μl/蓋玻片）和濕潤染色室,。
   9.在室溫下用1x PBS洗滌細胞2次并短暫風干。
  10.在室溫下在黑暗的染色室中與一抗孵育1小時,。在此期間準備二抗,。
  11.用1x PBS洗滌細胞5次（每個燒杯更換5個燒杯/ 5個計數(shù)）
  12。在室溫下在黑暗的染色室中與第二抗體孵育1小時,。
  13.用1x PBS洗滌細胞5次,。
  14.登上達皮。

溶液（染色當天新鮮制備）,。

    * 1x磷酸鹽緩沖鹽水,。
    *封閉試劑：1x PBS中1％NCS（使用新鮮的10x PBS）。
    *固定液：3.5％對甲醛,。

1.75g PFA在20ml d.H2O中加5滴1M NaOH,。在50-60℃的熱板上攪拌直至溶解。加入4滴IN HCl并檢查pH指示條,。PH值應為7.4,。完成體積，d.H20至25ml,，加入25ml 2xPBS,。在添加到蓋玻片之前檢查pH值。


免疫熒光方案 - 甲醇/丙酮固定

   1.從TCunit收集細胞,，并用吸力從培養(yǎng)皿中取出培養(yǎng)基,。
   2.用1x PBS洗滌并取出。
   3.用冷甲醇：丙酮1：1在冰上固定細胞10分鐘,。
   4.制備阻斷試劑,，這也是抗體的稀釋劑。
   5.取出固定劑并在室溫下用1x PBS洗滌細胞3次,，在軌道振蕩器上洗滌4分鐘,。
   6.在室溫下用1％NCS和1x PBS封閉30分鐘。
   7.準備一抗（50,？l /蓋玻片）和濕染色室,。
   8.在室溫下用1x PBS洗滌細胞2次并風干約7分鐘,。
   9.在室溫下在室溫下與一抗孵育1小時，在染色室中避光,。在此期間準備二抗,。
  10.用1x PBS洗滌細胞5次（每個燒杯更換5次燒杯/ 5次計數(shù)）
  11。在室溫下,，在染色室的黑暗中與第二抗體孵育1小時,。
  12.用1x PBS洗滌細胞5次。
  13.登上達皮,。

溶液（染色當天新鮮制備）

    * 1x磷酸鹽緩沖鹽水,。
    *封閉試劑：1x PBS中1％NCS（使用新鮮的10x PBS）。
    *固定液：甲醇：丙酮1：1冰冷,。



Western Blotting Protocol

   1.將凝膠轉(zhuǎn)移到PDVF或硝酸纖維素膜上
   2.將膜置于封閉緩沖液中的塑料托盤中攪拌1小時
   3.在洗滌緩沖液中沖洗
   4.在洗滌緩沖液和一抗中孵育1小時
   5.洗滌6次X用洗滌緩沖液洗滌5分鐘
   6.在洗滌緩沖液和二抗中孵育1小時
   7.用洗滌緩沖液洗滌6X 5分鐘
   8.檢測（例如ECL,，Amersham根據(jù)制造商的說明）

洗滌緩沖液
PBS + 0.1％Tween 20 

阻斷緩沖液
洗滌緩沖液+ 5％奶粉

所用抗體的濃度取決于每種抗體，抗原的量和所用的檢測方法,。通常,，稀釋在稀釋的幾百倍稀釋到幾千倍的范圍內(nèi)，但通常必須憑經(jīng)驗確定,。