蛋白質(zhì)提取試劑

蛋白質(zhì)提取和細(xì)胞裂解試劑

蛋白質(zhì)提取試劑溶解和消滅細(xì)胞menbranes,，這是一種導(dǎo)致蛋白質(zhì)溶解的過程。FIVEphoton Biochemicals提供的所有蛋白質(zhì)提取試劑均可提取跨膜蛋白和胞質(zhì)蛋白,。由于其他化學(xué)成分,，跨膜蛋白質(zhì)提取試劑（TmPER）將提取和溶解高分子量 - 多通道跨膜蛋白質(zhì)，這些蛋白質(zhì)溶解性差,，具有聚集傾向和/或與脂筏相關(guān),。下表概述了可用蛋白質(zhì)提取試劑的特性,。

蛋白質(zhì)提取試劑概述

組織和細(xì)胞的CHAPS免疫沉淀（IP）和溶解緩沖液| CHAPS緩沖區(qū)| 零件號(hào)CIB-1

免疫沉淀（IP）和細(xì)胞裂解緩沖液與CHAPS洗滌劑

組織和細(xì)胞培養(yǎng)樣品的蛋白質(zhì)提取和免疫沉淀

CHAPS免疫沉淀和裂解緩沖液,，含0.5％CHAPS，HEPES,，NaCl,，1X溶液。保留天然蛋白質(zhì)構(gòu)象

可用卷

可用的配方

*所有pH值均以相同價(jià)格提供,。 

其他選項(xiàng)

CaCl ₂  和EDTA選項(xiàng)*

a）加入1mM EDTA

b）加入1mM CaCl ₂

_{*添加CaCl2或EDTA不會(huì)影響價(jià)格,。}

向CHAPS試劑中添加氯化鈣可保持鈣依賴性蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)相互作用，而EDTA的添加則消除了相互作用,。  

亮點(diǎn)：CHAPS緩沖區(qū) 

• 強(qiáng)大的細(xì)胞裂解和蛋白質(zhì)提取能力,，同時(shí)保持蛋白質(zhì)構(gòu)象和蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)相互作用，用于共免疫沉淀（Co-IP）分析,。
• 可與組織一起使用（參見下面的產(chǎn)品引用1）以及培養(yǎng)細(xì)胞,。 
• 除免疫沉淀外，還可作為細(xì)胞裂解,，蛋白質(zhì)提取和隨后的Western印跡的獨(dú)立試劑,。
• 含有非胺緩沖液（HEPES）,，可與NHS-酯衍生物交聯(lián)。 

  成分：0.5％CHAPS,，HEPES,，NaCl

• 與Bradford，Lowry和BCA蛋白質(zhì)分析兼容,。
• 60ml體積：適用于200個(gè)10cm培養(yǎng)板,，或6孔培養(yǎng)皿中的600個(gè)孔。120ml體積用于400個(gè)10cm培養(yǎng)板或600個(gè)孔用于6孔培養(yǎng)皿,。

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CHAPS免疫沉淀和細(xì)胞裂解試劑（pH 8.0）的代表性數(shù)據(jù)

圖1 

運(yùn)輸?shù)鞍资荏w（COPII）與陽離子通道（TRPC-6）的共免疫沉淀（Co-IP）,。用編碼TPRC-6的質(zhì)粒DNA和COPII的HA表位標(biāo)記組分共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞（sec24）。細(xì)胞裂解和免疫沉淀在CHAPS緩沖液中進(jìn)行,，如產(chǎn)品手冊(cè)中所概述,。用圖中所示的抗體進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡（WB）。

                    IP：抗HA COPII IP：抗HA COPII

                    WB：Anti-TRPC6 WB：COPII

圖2 

使用FIVEphoton CHAPS免疫沉淀試劑的鈣結(jié)合蛋白與多亞基靶蛋白1的共免疫沉淀（Co-IP）,。與用蛋白質(zhì)2共表達(dá)（和推測組裝）相比,，當(dāng)單獨(dú)表達(dá)時(shí)，更大量的靶蛋白1與鈣結(jié)合蛋白結(jié)合,。由于翻譯后修飾,，蛋白1顯示出更高分子量形式。

使用CHAPS緩沖液的免疫沉淀方法概述（詳見方案）

©Fivephoton Biochemicals 2010

產(chǎn)品引用

1.    Joe Truong Nguyen,，（2018）,。  哺乳動(dòng)物EAK-7激活替代的mTOR信號(hào)傳導(dǎo)以調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和遷移。科學(xué)進(jìn)展   2018年5月9日：  卷,。4,，不。5,，eaao5838,。

2.鼓，Benjamin ML,，等,。“氧化應(yīng)激會(huì)降低微管的生長和心室肌細(xì)胞的穩(wěn)定性。” Journal of molecular and cellular cardiology  93（2016）：32-43,。

3. Villa-Diaz,，Luis G.，et al,。“通過整合素α6β1抑制粘著斑激酶信號(hào),，支持人類多能干細(xì)胞自我更新。” 干細(xì)胞 （2016）。

4. Kurland,，DB,，Gerzanich，V.,，Karimy,，JK，Woo,，SK,，Vennekens，R.,，F(xiàn)reichel,，M.，...＆Simard,，JM（2016）,。Sur1-Trpm4通道調(diào)節(jié)TLR4激活的小膠質(zhì)細(xì)胞中的NOS2轉(zhuǎn)錄。 神經(jīng)炎癥雜志,，  13（1）,。

5. Qian，X.,，Kim,，JK，Tong,，W.,，Villa-Diaz，LG和Krebsbach,，PH,，2015。DPPA5通過調(diào)節(jié)NANOG周轉(zhuǎn)率來支持多能性和重編程,。 干細(xì)胞,。  

6.  Zhang G, Brady J, Liang W-C, Wu Y, Henkemeyer M, Yan M. EphB4 forward signalling regulates lymphatic valve development. Nature Communications. 2015;6:6625. doi:10.1038/ncomms7625.  

7.  Shuchong Pan et. al.  2014.  Cell Surface Protein Disulfide Isomerase  Regulates Natriuretic Peptide Generation of Cyclic Guanosine Monophosphate.  Plos One.  DOI: 10.1371/journal.pone.0112986.