QA-Bio是一家致力于提供糖基化研究工具的公司,，所提供的糖基化研究產(chǎn)品涵蓋糖苷內(nèi)/外切酶,，去糖基化沒,，唾液酸產(chǎn)品,，多糖產(chǎn)品純化試劑盒,，多糖標記試劑盒等，同時提供多糖分析服務,。

qa-bio E-PNG01說明書

產(chǎn)品編號：E-PNG01

內(nèi)切糖苷酶

- 內(nèi)切糖苷酶切割來自糖蛋白的完整聚糖 - 
清潔制劑中的高度穩(wěn)定的酶 - 不含甘油,，NaCl或其他添加劑，如EDTA,。
- 測試所有酶不存在蛋白水解或意外的糖苷活性

內(nèi)切糖苷酶是用于分析糖蛋白的廣泛使用的酶,。這些酶從糖蛋白釋放完整的聚糖，而外切糖苷酶釋放單個單糖（即唾液酸,，半乳糖,，β-N-乙酰基葡糖胺,，甘露糖等）,。

PNGase F通常包含在酶組中，因為其切割完整的N-連接聚糖具有相似的活性,，盡管它實際上是酰胺酶,。它在天冬酰胺氨基酸和N-連接聚糖的殼二糖核心的個β-N-乙酰葡糖胺糖（GlcNAc）之間切割。Endo F酶和Endo H在和第二GlcNAc之間切割N-連接的聚糖,，留下帶電荷的殘基,，其有助于增加去糖基化蛋白質(zhì)的溶解度，降低蛋白質(zhì)聚集體沉淀的可能性,。PNGase F切割所有N-連接的聚糖,，而Endo H和Endo F酶切除特定類型的N-連接聚糖,。

酶的這種分類還包括O-糖苷酶，其從絲氨酸或蘇氨酸氨基酸中除去核心1O-連接的聚糖（Galβ1,3GalNAcα）,。通常,，O-連接的聚糖含有在分支和線性連接中與半乳糖連接的另外的單糖，需要使用外切糖苷酶如唾液酸酶和半乳糖苷酶來除去額外的糖,。

PNGase F.

PNGase F從糖蛋白切割N-連接（天冬酰胺連接的）寡糖,。

產(chǎn)品編號 - 酶的量
E-PNG01 - 60μLs

E -PNG01-20 - 20μLs¹

E -PNG01-200 - 200μls²（以前的E-PNG05）
   ¹包括緩沖液，變性劑和Triton- 
   X²僅含酶

PNGase F,，肽N糖苷酶F,，N-糖苷酶，N-聚糖酶

PNGase F從糖蛋白切割N-連接（天冬酰胺連接的）寡糖,。該酶將天冬酰胺脫氨基成天冬氨酸,，使寡糖保持完整。變性增加了解理速率,。大多數(shù)天然蛋白質(zhì)仍然可以*N-去糖基化,，但必須增加孵育時間。酶在反應條件（37℃）下保持*活性至少96小時,。PNGase F不會去除植物糖蛋白上常見的含有α-（1,3） - 連接的核心巖藻糖的寡糖; 為此目的,，使用肽N-糖苷酶A.

有許多替代酶可用于去除N-聚糖，特別是Endo F家族的酶和Endo H.這些酶切割寡糖核心中的兩個N-乙酰氨基葡萄糖殘基,，產(chǎn)生截短的糖在天冬酰胺上殘留一個N-乙酰氨基葡萄糖殘基的分子,。這留下帶電荷的糖，其可以幫助將蛋白質(zhì)保持在溶液中,，所述溶液在用PNGase F去糖基化后沉淀,，其去除了完整的寡糖。Endo F1切割高甘露糖和一些雜合型N-聚糖,。Endo F2將去除雙觸角和高甘露糖（降低40倍速率）,。Endo F3釋放出triantennarry和巖藻糖基化的雙觸角N-聚糖。遠藤H. 去除雜交或高甘露糖聚糖,。

來源 Elizabethkingia miricola（是Chryseobacterium meningosepticum）

EC 3.5.1.52 
PDB 1PGS 
UniProt Q9XBM8

內(nèi)容
PNG酶的F的20mM的Tris-HCl,，pH 7.5中

包含20μL和60μL包裝尺寸：
5x反應緩沖液7.5 - 250 mM磷酸鈉，pH 7.5 
變性溶液 - 2％SDS,，1Mβ-巰基乙醇
Triton X-100 - 15％溶液

比活度 > 25 U / mg

活性 5U / ml

分子量 36,000道爾頓

pH范圍 6-10,，適7.5

方案
1.將多200μg的糖蛋白添加到Eppendorf管中。用去離子水調(diào)節(jié)至35μl終體積,。
2.加入10μl5x反應緩沖液7.5和2.5μl變性溶液,。在100°C加熱5分鐘。
很酷。加入2.5μlTritonX-100并混合,。
4.向反應中加入2.0μl酶,。在37°C孵育3小時。

特異性切割所有天冬酰胺連接的復合物,，雜交或高甘露糖寡糖,，除非α（1-3）核心巖藻糖基化; 天冬酰胺必須在兩個末端都是肽鍵合，Endo F游離

比活性定義為在37℃,，pH7.5下在1分鐘內(nèi)催化從1微摩爾變性的RNase B釋放N-連接的寡糖所需的酶量,。通過SDS-PAGE監(jiān)測切割（切割的RNase B遷移更快）。

儲存在4°C下儲存酶,。

參考

- 拜耳,，EA，F(xiàn),。De Meester,，T。Kulik和M. Wilchek,。去糖基化蛋清抗生物素蛋白的制備,。 Appl Biochem Biotech 53： 1-9（1995）

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- Tarentino,，A .L,。，CM Gomez和TH Plummer,，Jr 。天冬酰胺連接的聚糖的去糖基化肽：N-糖苷酶 F.Biochemistry 24： 4665-4671（1985）

- Tarentino AL和TH Plummer,。天冬酰胺連接的聚糖的酶促去糖基化：來自Flavobacterium meningosepticum的寡糖切割酶的純化,，性質(zhì)和特異性。 Meth Enzymol 230： 44-57（1994）

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- Taga,，EM，A,。Waheed和RL Van Etten,。來自杏仁的均相肽-N-糖苷酶的結構和化學表征。 生物化學23： 815-22（1984）

- Tarentino AL，Trimble RB,，Plummer TH,。用于研究糖蛋白的結構，合成和加工的酶促方法,。 細胞生物學方法： 32：111-39（1989）

Anthony L.,，Tarentino和Thomas H. Plummer Jr. 天冬酰胺連接的聚糖的酶促去糖基化：來自Flavobacterium meningosepticum的寡糖切割酶的純化，性質(zhì)和特異性,。 酶學方法： 230：44-57,。（1994）

- Tarentino AL，Plummer TH,。寡糖對肽的可及性：N-蛋白質(zhì)解折疊試劑促進的N-糖苷酶,。生物化學雜志。257（18）：10776-80,。（1982年）

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