QA-Bio是一家致力于提供糖基化研究工具的公司,，所提供的糖基化研究產(chǎn)品涵蓋糖苷內(nèi)/外切酶,，去糖基化沒(méi),，唾液酸產(chǎn)品,，多糖產(chǎn)品純化試劑盒,，多糖標(biāo)記試劑盒等,，同時(shí)提供多糖分析服務(wù),。

qa-bio E-PNG01說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品編號(hào)：E-PNG01

內(nèi)切糖苷酶

- 內(nèi)切糖苷酶切割來(lái)自糖蛋白的完整聚糖 - 
清潔制劑中的高度穩(wěn)定的酶 - 不含甘油，NaCl或其他添加劑,，如EDTA,。
- 測(cè)試所有酶不存在蛋白水解或意外的糖苷活性

內(nèi)切糖苷酶是用于分析糖蛋白的廣泛使用的酶。這些酶從糖蛋白釋放完整的聚糖,，而外切糖苷酶釋放單個(gè)單糖（即唾液酸,，半乳糖，β-N-乙?；咸前?，甘露糖等）。

PNGase F通常包含在酶組中,，因?yàn)槠淝懈钔暾腘-連接聚糖具有相似的活性,，盡管它實(shí)際上是酰胺酶。它在天冬酰胺氨基酸和N-連接聚糖的殼二糖核心的個(gè)β-N-乙酰葡糖胺糖（GlcNAc）之間切割,。Endo F酶和Endo H在和第二GlcNAc之間切割N-連接的聚糖,，留下帶電荷的殘基，其有助于增加去糖基化蛋白質(zhì)的溶解度,，降低蛋白質(zhì)聚集體沉淀的可能性,。PNGase F切割所有N-連接的聚糖,，而Endo H和Endo F酶切除特定類型的N-連接聚糖。

酶的這種分類還包括O-糖苷酶,，其從絲氨酸或蘇氨酸氨基酸中除去核心1O-連接的聚糖（Galβ1,3GalNAcα）,。通常，O-連接的聚糖含有在分支和線性連接中與半乳糖連接的另外的單糖,，需要使用外切糖苷酶如唾液酸酶和半乳糖苷酶來(lái)除去額外的糖,。

PNGase F.

PNGase F從糖蛋白切割N-連接（天冬酰胺連接的）寡糖。

產(chǎn)品編號(hào) - 酶的量
E-PNG01 - 60μLs

E -PNG01-20 - 20μLs¹

E -PNG01-200 - 200μls²（以前的E-PNG05）
   ¹包括緩沖液,，變性劑和Triton- 
   X²僅含酶

PNGase F,，肽N糖苷酶F，N-糖苷酶,，N-聚糖酶

PNGase F從糖蛋白切割N-連接（天冬酰胺連接的）寡糖,。該酶將天冬酰胺脫氨基成天冬氨酸，使寡糖保持完整,。變性增加了解理速率,。大多數(shù)天然蛋白質(zhì)仍然可以*N-去糖基化，但必須增加孵育時(shí)間,。酶在反應(yīng)條件（37℃）下保持*活性至少96小時(shí),。PNGase F不會(huì)去除植物糖蛋白上常見(jiàn)的含有α-（1,3） - 連接的核心巖藻糖的寡糖; 為此目的，使用肽N-糖苷酶A.

有許多替代酶可用于去除N-聚糖,，特別是Endo F家族的酶和Endo H.這些酶切割寡糖核心中的兩個(gè)N-乙酰氨基葡萄糖殘基,，產(chǎn)生截短的糖在天冬酰胺上殘留一個(gè)N-乙酰氨基葡萄糖殘基的分子。這留下帶電荷的糖,，其可以幫助將蛋白質(zhì)保持在溶液中,，所述溶液在用PNGase F去糖基化后沉淀，其去除了完整的寡糖,。Endo F1切割高甘露糖和一些雜合型N-聚糖,。Endo F2將去除雙觸角和高甘露糖（降低40倍速率）。Endo F3釋放出triantennarry和巖藻糖基化的雙觸角N-聚糖,。遠(yuǎn)藤H. 去除雜交或高甘露糖聚糖,。

來(lái)源 Elizabethkingia miricola（是Chryseobacterium meningosepticum）

EC 3.5.1.52 
PDB 1PGS 
UniProt Q9XBM8

內(nèi)容
PNG酶的F的20mM的Tris-HCl，pH 7.5中

包含20μL和60μL包裝尺寸：
5x反應(yīng)緩沖液7.5 - 250 mM磷酸鈉,，pH 7.5 
變性溶液 - 2％SDS,，1Mβ-巰基乙醇
Triton X-100 - 15％溶液

比活度 > 25 U / mg

活性 5U / ml

分子量 36,000道爾頓

pH范圍 6-10，適7.5

方案
1.將多200μg的糖蛋白添加到Eppendorf管中,。用去離子水調(diào)節(jié)至35μl終體積,。
2.加入10μl5x反應(yīng)緩沖液7.5和2.5μl變性溶液。在100°C加熱5分鐘。
很酷,。加入2.5μlTritonX-100并混合,。
4.向反應(yīng)中加入2.0μl酶。在37°C孵育3小時(shí),。

特異性切割所有天冬酰胺連接的復(fù)合物,，雜交或高甘露糖寡糖，除非α（1-3）核心巖藻糖基化; 天冬酰胺必須在兩個(gè)末端都是肽鍵合,，Endo F游離

比活性定義為在37℃,，pH7.5下在1分鐘內(nèi)催化從1微摩爾變性的RNase B釋放N-連接的寡糖所需的酶量。通過(guò)SDS-PAGE監(jiān)測(cè)切割（切割的RNase B遷移更快）,。

儲(chǔ)存在4°C下儲(chǔ)存酶,。

參考

- 拜耳，EA,，F(xiàn),。De Meester，T,。Kulik和M. Wilchek,。去糖基化蛋清抗生物素蛋白的制備。 Appl Biochem Biotech 53： 1-9（1995）

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- Tarentino，A .L,。,，CM Gomez和TH Plummer，Jr ,。天冬酰胺連接的聚糖的去糖基化肽：N-糖苷酶 F.Biochemistry 24： 4665-4671（1985）

- Tarentino AL和TH Plummer,。天冬酰胺連接的聚糖的酶促去糖基化：來(lái)自Flavobacterium meningosepticum的寡糖切割酶的純化，性質(zhì)和特異性,。 Meth Enzymol 230： 44-57（1994）

- Trimble RB和AL Tarentino,。鑒定在Flavobacterium meningosepticum中的不同內(nèi)切糖苷酶（endo）活性：endo F1，endo F2和endo F3,。Endo F1和endo H僅水解高甘露糖和雜合聚糖,。 J Biol Chem 266： 1646-1 651（1991）

- Taga，EM,，A,。Waheed和RL Van Etten。來(lái)自杏仁的均相肽-N-糖苷酶的結(jié)構(gòu)和化學(xué)表征。 生物化學(xué)23： 815-22（1984）

- Tarentino AL,，Trimble RB,，Plummer TH。用于研究糖蛋白的結(jié)構(gòu),，合成和加工的酶促方法,。 細(xì)胞生物學(xué)方法： 32：111-39（1989）

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- Tarentino AL,，Plummer TH,。寡糖對(duì)肽的可及性：N-蛋白質(zhì)解折疊試劑促進(jìn)的N-糖苷酶。生物化學(xué)雜志,。257（18）：10776-80,。（1982年）

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