smarttubePROT1解凍樣品的解凍方案

加利福尼亞州Smart Tube

PROT1, 100 Test

一瓶蛋白質(zhì)組穩(wěn)定劑。體積足以穩(wěn)定一百五十五毫升全血樣本,。還包括解凍在穩(wěn)定劑中冷凍保存的樣品后使用的緩沖液：THAWLYSE1“Thaw-Lyse,，1000X Concentrate”。 

所需緩沖區(qū)：

1倍水樣(用蒸餾水稀釋1000倍濃縮液,，使工作濃度達(dá)到1倍),。

緩沖器應(yīng)在室溫下

染色緩沖液磷酸鹽緩沖液0.5%牛血清白蛋白)緩沖液應(yīng)在4℃

可能需要的其他緩沖區(qū)：

1倍緩沖液2(用蒸餾水稀釋5倍濃縮液，使工作濃度達(dá)到1倍),。緩沖器應(yīng)在室溫下,。

禮儀:

如果樣品沒有凍結(jié),，因為分析將在同一天進(jìn)行，請繼續(xù)進(jìn)行第二步,。在冷水浴(10°C至15°C)中用攪拌水(即.=‘class 1’>)解凍冷凍樣品.旋轉(zhuǎn)磁性 攪拌棒或使用軌道震動器)大約20分鐘,，直到樣品*解凍。另一種方法是,，在4°C冰箱的開式機(jī)架中解凍管子大約30分鐘,，直到 樣品是*解凍的，不要使用泡沫塑料機(jī)架來保存樣品,，因為樣品要從-80°C快速過渡到*解凍狀態(tài)是很重要的,。一旦樣品迅速解凍，m 敬下一步,。

加入1倍的SAW-Lyse緩沖液,，比例為4：1的穩(wěn)定樣品(即。如果原始樣本為全血1ml,，則加入1.4ml穩(wěn)定劑,，總體積為2.4m 在穩(wěn)定后，加入至少9.6ml的1xThaw-Lyse緩沖液,。將樣品在室溫下攪拌10分鐘,。

600×g離心，室溫下離心5分鐘,，取白細(xì)胞,。扔掉上清液。

1. 將球團(tuán)置于25 ml的1倍Saw-Lyse緩沖液中,，室溫下孵育10分鐘,。在室溫下，以600×g離心5分鐘,。丟棄上清液,。 如果球團(tuán)是相對白色的，紅細(xì)胞溶解是*的,。

紅細(xì)胞溶解完成后,，樣品再懸浮在染色介質(zhì)中，轉(zhuǎn)移到FACS管或板上,，用染色介質(zhì)沖洗,。將樣品按600 x g離心5次 幾分鐘。現(xiàn)在可以像用多聚甲醛固定的白細(xì)胞一樣對樣品進(jìn)行染色,，使用固定細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)染色規(guī)程,。注意進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)染色 細(xì)胞必須用酒精滲透。90%甲醇)或洗滌劑(即,。0.2%的皂甙)作為智能管道系統(tǒng),，就像傳統(tǒng)的固定方法一樣,，產(chǎn)生細(xì)胞膜為s的細(xì)胞 可滲透于小分子染料,，如碘化丙酸丙酯,，但在其他方面是完整的，不提供適當(dāng)?shù)目贵w進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,，而不經(jīng)alc進(jìn)一步滲透,。 酒精或洗滌劑。

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建議在一項研究中對用于解凍樣品的條件(水浴溫度,、攪拌和持續(xù)時間)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化,。

完整的紅細(xì)胞溶解通常是在步驟4之后實現(xiàn)的。室溫下穩(wěn)定時間較長或樣品在4°C(或更高溫度)保溫時間較長 皺縮可能會使紅細(xì)胞溶解更加困難,。

如果紅細(xì)胞溶解在步驟4后未完成,，請執(zhí)行以下步驟：

A1.將球粒置于大于15 ml的1xLyse緩沖液中，在室溫下孵育10分鐘,，與原藥丸相同,，丟棄上清液。如果球團(tuán)是白色的,，表示紅細(xì)胞溶解,。 完成后,，繼續(xù)上面的步驟5,。如果沒有，請繼續(xù)下面的步驟A2,。

A2.將球團(tuán)置于大于15 ml的1倍Saw-Lyse緩沖液中,，在室溫下孵育10分鐘,，與以前相同，丟棄上清液,。球團(tuán)應(yīng)該是相對白色的,，表示紅細(xì)胞溶解。 S是完整的,。繼續(xù)執(zhí)行上面的第5步,。

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