cytoskeleton BK037說明書

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Cytoskeleton,，Inc。很高興為藥物篩選,，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細胞骨架研究提供廣泛的試劑盒和產(chǎn)品,。我們專注于生產(chǎn)純化蛋白質(zhì)和易于使用的試劑盒,，以研究生物化學(xué)和細胞過程。我們的試劑盒可用于少量樣品,，用于基礎(chǔ)研究或小屏幕（Biochem Kits™）,，也可用于大屏幕的高通量樣品（CytoDYNAMIX Screens™）。

除了我們現(xiàn)有的產(chǎn)品,，我們還在產(chǎn)品線中為微管,，微管蛋白，運動蛋白,，小G蛋白效應(yīng)物,，GAP，GEF和其他幾種蛋白提供藥物篩選服務(wù),。

Cytoskeleton的Biochem Kits™是用于分析細胞骨架生物化學(xué)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的不同方面的綜合試劑盒,。這些工具包通常構(gòu)成出版物中圖形的基礎(chǔ)，請查看引文標簽中的示例,。該試劑盒附帶了分析所需的所有試劑以及如何使用它們的詳細說明,，因此您可以在準備好試劑盒后立即進行分析！

測量蛋白質(zhì)和藥物對肌動蛋白聚合/解聚的影響,。
發(fā)現(xiàn)和表征肌動蛋白結(jié)合蛋白（ABPs）,。
在細胞或組織裂解物中定量G-肌動蛋白（單體）對F-肌動蛋白（聚合物）。
將設(shè)置時間從幾個月縮短到幾天,。

許多出版物引用了在論文的材料和方法部分中使用Cytoskeleton的試劑盒,。通常，引文與圖形或圖像形式的特定結(jié)果相關(guān)聯(lián),，這有助于您,，作者,，您的發(fā)現(xiàn)。這表明套件可在短時間內(nèi)生成出版物質(zhì)量數(shù)據(jù),，從而有助于提高工作效率,。肌動蛋白試劑盒的引用示例如下所示。個別產(chǎn)品頁面上提供了更多引文,。??

肌動蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析Biochem試劑盒：兔骨骼肌肌動蛋白（Cat。＃BK001）

Takeshita,，N.,，Ohta，A,。和Horiuchi,，H。（2005）,。CsmA是一種具有肌球蛋白運動樣結(jié)構(gòu)域的V類幾丁質(zhì)合酶,，通過與構(gòu)巢曲霉中肌動蛋白細胞骨架的直接相互作用進行定位。摩爾,。生物學(xué),。細胞16,1961-1970。

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肌動蛋白聚合生物化學(xué)試劑盒（熒光形式）：兔骨骼肌肌動蛋白（Cat,。＃BK003）

Takamiya，R.,，Takahashi,，M.，Park,，YS，Tawara,，Y.,，F(xiàn)ujiwara，N.,，Miyamoto,，Y.，Gu,，J.,，Suzuki，K,。和Taniguchi,，N。（2005）,。神經(jīng)母細胞瘤細胞中突變的Cu,，Zn-SOD的過度表達導(dǎo)致細胞骨架改變。上午,。J. Physiol,。288，C253-259,。

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肌動蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析Biochem試劑盒：人血小板肌動蛋白（Cat。＃BK013）

Gohla,，A.,，Birkenfeld，J,。和Bokoch,，GM（2005）。Chronophin是一種新型HAD型絲氨酸蛋白磷酸酶,，可調(diào)節(jié)cofilin依賴性肌動蛋白動力學(xué),。納特。細胞生物學(xué),。7,21-29,。

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G-Actin / F-actin體內(nèi)檢測Biochem試劑盒（目錄號BK037）

Rapier等,，2010,。癌細胞Int,。10,24

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問題1：哪種試劑盒是檢測肌動蛋白結(jié)合蛋白的*選擇？

答案1： Cytoskeleton有兩個肌動蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析試劑盒,，是識別和表征肌動蛋白結(jié)合蛋白的理想選擇,。一個試劑盒使用肌肉肌動蛋白（Cat,。＃BK001），另一個試劑盒使用非肌肉肌動蛋白（Cat,。＃BK013）,。兩種測定均利用共沉淀來鑒定蛋白質(zhì)是否與單體或絲狀肌動蛋白結(jié)合以及蛋白質(zhì)是否具有F-肌動蛋白切斷或成束特性。為了檢查與肌動蛋白單體結(jié)合的化合物或蛋白質(zhì),，含有鏈霉抗生物素蛋白包被的孔的96孔板可以與生物素化肌動蛋白復(fù)合（Cat,。＃AB07）產(chǎn)生肌動蛋白單體捕獲蛋白。然后可以將化合物,，蛋白質(zhì)或提取物與捕獲蛋白一起溫育,，并且可以通過HRP檢測系統(tǒng)使用針對目標化合物或蛋白質(zhì)的抗體（或標記可以與測試蛋白綴合）來顯現(xiàn)結(jié)合。請記住,，緩沖液組成也很重要,，因為它需要低鹽（約50 mM）并含有CaCl 2（或其他二價陽離子）和ATP以維持肌動蛋白單體的穩(wěn)定性。有關(guān)兼容緩沖液的示例,，請參閱我們的一般肌動蛋白緩沖液配方（Cat,。＃BSA01-001）?；蛘?，可以用GST標記感興趣的蛋白質(zhì)（避免還原劑）并與板綴合，然后與生物素化的肌動蛋白一起溫育,，并用HRP綴合的鏈霉抗生物素蛋白顯現(xiàn),。

問題2：當我對感興趣的肌動蛋白沒有可用的芘結(jié)合物（例如心臟，平滑肌或細胞質(zhì)肌動蛋白）時,，如何用芘測定法測量肌動蛋白聚合,？

答案2： 為了檢查未標記肌動蛋白的聚合，請點擊此處查看使用過量未標記肌動蛋白（心肌,，平滑肌或細胞質(zhì)）加10％芘標記肌肉肌動蛋白的聚合方案,。芘肌肉肌動蛋白不會以該測定中使用的濃度自身聚合，因此反應(yīng)依賴于未標記的非肌肉肌動蛋白形成F-肌動蛋白,。以這種方式,，芘標記的肌肉肌動蛋白被吸收并聚合以充當用于聚合未標記的肌動蛋白的報道分子，其以更高的濃度存在,。

問題3：如何從細胞或組織提取物中測量G-和F-肌動蛋白,？

答案3： 確定細胞或組織樣本中游離球狀肌動蛋白（G-肌動蛋白）含量與絲狀肌動蛋白（F-肌動蛋白）含量的可重復(fù)和準確的方法是使用F-肌動蛋白和G-肌動蛋白部分的Western印跡定量,。 ,。一般方法是使F-肌動蛋白穩(wěn)定緩沖液中的細胞或組織均質(zhì)化，然后高速離心以將F-肌動蛋白與G-肌動蛋白池分離,。然后通過SDS-PAGE分離級分,，并通過Western印跡定量肌動蛋白,。終結(jié)果給出了準確的方法來確定摻入細胞骨架的F-肌動蛋白與細胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的G-肌動蛋白的比例。細胞骨架提供了一種簡單易用的選擇,，可用G-肌動蛋白/ F-肌動蛋白體內(nèi)檢測試劑盒（Cat,。＃BK037）定量G-和F-肌動蛋白。該試劑盒提供了在不同處理條件下定量細胞或組織樣品中單體和聚合肌動蛋白水平的所有必需試劑,。將樣品離心,，然后將沉淀（F-肌動蛋白）和上清液（G-肌動蛋白）溶解于SDS上樣緩沖液中并通過Western印跡處理。

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肌動蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析Biochem試劑盒：人血小板肌動蛋白

BK013

肌動蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析Biochem試劑盒：兔骨骼肌肌動蛋白

BK001

肌動蛋白聚合生物化學(xué)試劑盒（熒光形式）：兔骨骼肌肌動蛋白

BK003

F-actin Visualization Biochem Kit（熒光格式）

BK005

G-Actin / F-actin In Vivo Assay Biochem Kit

BK037

G-Actin/F-actin In Vivo Assay Biochem Kit

30-100 assays (Cat. # BK037)

窗體底端

產(chǎn)品用途包括

研究藥物化合物對G-肌動蛋白與F-肌動蛋白比例的影響,。
研究突變細胞系與其親本細胞系對G-肌動蛋白與F-肌動蛋白比例變化的影響,。
研究環(huán)境物理改變對G-肌動蛋白與F-肌動蛋白比例的影響。

引言
確定細胞群中絲狀肌動蛋白（F-肌動蛋白）含量與游離球狀肌動蛋白（G-肌動蛋白）含量的可重復(fù)和準確的方法是使用F-actin和G-actin細胞的Western印跡定量分數(shù)（1-4）,。一般方法是使F-肌動蛋白穩(wěn)定緩沖液中的細胞均質(zhì)化,，然后離心以將F-肌動蛋白與G-肌動蛋白池分離。然后通過SDS-PAGE分離級分,，并通過Western印跡定量肌動蛋白,。終結(jié)果給出了準確的方法來確定摻入細胞骨架的F-肌動蛋白與細胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的G-肌動蛋白的比例。該試劑盒包含進行該試驗所需的所有試劑,。

試劑盒內(nèi)容
該試劑盒包含足夠的材料,，可根據(jù)分析設(shè)置進行30-100次分析，并包含陽性和陰性對照試劑,。包括以下組件：

裂解和F-肌動蛋白穩(wěn)定緩沖液
ATP（Cat,。＃BSA04）
蛋白酶抑制劑雞尾酒（Cat。＃PIC02）
F-肌動蛋白增強對照溶液
F-肌動蛋白解聚對照溶液
控制G-actin標準品（目錄號＃AKL99）
肌動蛋白多克隆抗體（Cat,。＃AAN01）
SDS樣品緩沖液（5 x）
DMSO
手冊詳細的協(xié)議和廣泛的故障排除指南

需要的設(shè)備

離心機能夠以100,000xg的溫度控制操作,，體積為100μl至2ml，取決于細胞裂解體積
SDS-PAGE小凝膠系統(tǒng)和western印跡轉(zhuǎn)移裝置

實施例結(jié)果
使用G-肌動蛋白/ F-肌動蛋白體內(nèi)測定試劑盒,，在用肌動蛋白聚合藥物jasplakinolide處理的Swiss 3T3細胞中研究了G-肌動蛋白和F-肌動蛋白量的變化,。在未經(jīng)處理的瑞士3T3細胞中，80％的肌動蛋白是可溶性G-肌動蛋白,，并且在上清液部分中發(fā)現(xiàn),，20％的肌動蛋白是絲狀F-肌動蛋白并且在沉淀部分中發(fā)現(xiàn)。在用jasplakinolide處理的Swiss 3T3細胞中,，80％的肌動蛋白重組成F-肌動蛋白并且在沉淀部分中發(fā)現(xiàn)（圖1）,。

圖1.用jasplakinolide處理后瑞士3T3細胞中肌動蛋白的重組。瑞士3T3細胞用jasplakinolide（Jaspl）處理或不處理（Untr）,，并使用BK037測定G-肌動蛋白（G）和F-肌動蛋白（F）含量,。用jasplakinolide治療導(dǎo)致F-肌動蛋白的有效積累。

問題1：在哪個步驟可以停止檢測,？

答案1： 直到在37℃下旋轉(zhuǎn)100,000xg 1小時后才能停止測定,。在高速離心后,，可將上清液（G-肌動蛋白）與SDS上樣緩沖液混合并冷凍備用,。應(yīng)使用解聚劑和水重懸沉淀（F-肌動蛋白）,，然后與SDS上樣緩沖液混合并冷凍備用,。在冷凍時,，F(xiàn)-肌動蛋白解聚,，因此在冷凍樣品之前必須將F-肌動蛋白與G-肌動蛋白分離以分離樣品以準確測量F-肌動蛋白和G-肌動蛋白比率,。

問題2：這種檢測有多敏感,？

答案2： 該檢測方法可以檢測到G-肌動蛋白與F-肌動蛋白比例的15％變化,。每個條件應(yīng)一式兩份進行并重復(fù)幾次,，因為實驗之間的測定再現(xiàn)性可以變化10-20％,。

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參考

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貨號	品名	規(guī)格	品牌
BK165-S	Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit	(10 assay)	cytoskeleton
BK165	Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit	(30 assay)	cytoskeleton
BK163-S	Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit	(10 assay)	cytoskeleton
BK163	Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit	(30 assay)	cytoskeleton
BK160-S	Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit	(10 assay)	cytoskeleton
BK160	Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit	(30 assay)	cytoskeleton
BK162-S	Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit	(10 assay)	cytoskeleton
BK162	Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit	(30 assay)	cytoskeleton
BK161-S	Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit	(10 assay)	cytoskeleton
BK161	Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit	(30 assay)	cytoskeleton
AAC04-Beads	Acetyl-Lysine Affinity Beads	ea	cytoskeleton
APY03-Beads	Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads	ea	cytoskeleton
ASM11-Beads	SUMOylation 1 Affinity Beads	ea	cytoskeleton
ASM24-Beads	SUMOylation 2/3 Affinity Beads	ea	cytoskeleton
UBA01-Beads	Ubiquitination Affinity Beads	ea	cytoskeleton
CIG02-Beads	Acetyl-Lysine Control Beads	ea	cytoskeleton
CIG03-Beads	SUMO1 IP Control Beads	ea	cytoskeleton
CIG01-Beads	IgG Control Beads	ea	cytoskeleton
CUB02-Beads	Ubiquitination Control Beads	ea	cytoskeleton
BLR01	BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit	ea	cytoskeleton
BLR02	BlastR™ Rapid Filtration Kit	ea	cytoskeleton
AAC02	Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1)	ea	cytoskeleton
AAC03	Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)	ea	cytoskeleton
AAC03-HRP	Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)	ea	cytoskeleton
AAC01	Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20)	ea	cytoskeleton
APY03	Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10)	ea	cytoskeleton
APY03-HRP	Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10)	ea	cytoskeleton
ASM01	SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16)	ea	cytoskeleton
ASM24	SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2)	ea	cytoskeleton
ASM23	SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)	ea	cytoskeleton
ASM23-HRP	SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)	ea	cytoskeleton
AUB01	Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal	ea	cytoskeleton
AUB01-HRP	Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal	ea	cytoskeleton
PHDG1	Acti-stain 488 phalloidin	ea	cytoskeleton
PHDH1	Acti-stain 555 phalloidin	ea	cytoskeleton
PHDN1	Acti-stain 670 phalloidin	ea	cytoskeleton
BK001	Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin	ea	cytoskeleton
BK003	Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin	ea	cytoskeleton
AKL95	Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AD99	Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle	ea	cytoskeleton
AS99	Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle	ea	cytoskeleton
AKL99	Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AKF99	Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AP05	Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
APHR	Actin protein (rhodamine): human platelet	ea	cytoskeleton
AR05	Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AT01	Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
RP01P	Arp2/3 protein complex: porcine brain	ea	cytoskeleton
CS-TFC01	Cardiac Thin Filament Complex (CTFC)	ea	cytoskeleton
CF01	Cofilin 1 protein: human recombinant	ea	cytoskeleton
HPG6	Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant	ea	cytoskeleton
MH01	Heavy meromyosin protein	ea	cytoskeleton
CS-MH03	Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment)	ea	cytoskeleton
CS-MYS03	Myosin - cardiac S1 fragment	ea	cytoskeleton
CS-MYS04	Myosin - skeletal muscle S1 fragment	ea	cytoskeleton
CS-MYS05	Myosin - smooth muscle S1 fragment	ea	cytoskeleton
MY02	Myosin II protein: rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
MY03	Myosin protein: bovine cardiac muscle	ea	cytoskeleton
PR02	Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant	ea	cytoskeleton
PHDR1	Rhodamine Phalloidin	ea	cytoskeleton
CY-SC001	SiR-Actin Kit	ea	cytoskeleton
CY-SC013	SiR700-Actin Kit	ea	cytoskeleton
VCG03	WASP protein VCA domain: GST tagged: human	ea	cytoskeleton

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cytoskeleton BK037說明書

G-Actin/F-actin In Vivo Assay Biochem Kit

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