Molecular Cloning Laboratories（MCLAB）成立于1998年,，是為生命科學界提供基因組研究耗材和服務的先進者,。

MCLAB提供具有成本效益的消耗品和試劑，專注于代以及新一代測序和DNA段分析,。我們提供大量分子生物學相關產(chǎn)品,，包括抗體，生化試劑,，克隆試劑盒,，酶，PCR試劑盒,，蛋白質凝膠和溶液等,。作為我們自己的制造商,，我們可以控制生產(chǎn)流程，并大限度地減少定制和大規(guī)模訂單的延遲,。它有助于確保我們的客戶獲得高質量和價值,。

MCLAB擁有一支由20 多位經(jīng)驗豐富的科學家組成的團隊，致力于為研究人員提供的服務,。我們專注于基因組學領域,，擁有DNA測序，發(fā)酵,，片段分析,，分子克隆，過表達,，蛋白質純化和蛋白質合成方面的專家,。我們采用量身定制的客戶服務方式，讓您有機會定制您的項目,，并直接與我們的科學家團隊交流以獲得技術支持,。憑借二十多年的經(jīng)驗，我們才華橫溢,，技術的員工致力于為您提供所需的成果,。

Taq-Klenow聚合酶

Taq- Klenow 通過截短其N-末端從全長Taq DNA聚合酶修飾，分子量為61kDa,。

描述：
Taq -Klenow 通過截短其N-末端從全長Taq- Klenow 修飾,，分子量為61kDa。與常規(guī)Taq- Klenow 相比,，這種截短形式缺乏5' - > 3'外切核酸酶活性,，但更具熱穩(wěn)定性，并且在PCR擴增中具有更高的保真度,。

應用：
- PCR（普通和高通量）
- 引物延伸
- 微陣列分析
- 變性液相色譜（DHPLC）

來源：攜帶來自嗜熱生物Thermus Aquaticus YT-1 的Taq- Klenow基因的
重組大腸桿菌菌株,。

供應：
10x Taq PCR Buffer（無dNTP）

提供：
20 mM Tris-HCl 
100 mM NaCl 
1.0 mM DTT 
0.1 mM EDTA 
穩(wěn)定劑
50％甘油
pH 7.5 @ 25°C 

單位定義：
1單位定義為酶量將在75℃下在30分鐘內將10nmol的dNTP摻入酸不溶性材料中。

PCR指南：
Taq -Klenow是初和常用的PCR酶,。Taq酶擅長于從低復雜性模板來源擴增較短（<5kb）的序列,，并且在很少或沒有優(yōu)化反應條件的情況下產(chǎn)生穩(wěn)健的產(chǎn)率。在使用Taq DSC 2.0 DNA聚合酶設計PCR策略時,，請考慮以下指南,。

1. DNA模板：盡管通常不需要對PCR模板進行大量純化，但應注意粗制或部分純化的DNA來源,，因為處理和化學試劑會對PCR過程產(chǎn)生不利影響,。應避免接觸短波紫外線或其他DNA損傷劑,，高離子強度，SDS,，加載染料和苯酚等清潔劑也應避免接觸,。為了防止以前的PCR反應造成污染，請考慮在正壓罩和氣溶膠屏障吸管設置反應,。在典型的25個循環(huán)PCR中,，104個拷貝的靶序列將產(chǎn)生可重復的擴增產(chǎn)物。這相當于大約0.1-1ng / ml（終濃度）的質粒DNA和1-10μg/ ml的基因組DNA,。使用較低的DNA濃度通常會產(chǎn)生較少的非特異性產(chǎn)物,，

2.引物設計：理想地，寡核苷酸引物長度為15-30個堿基,，接近50％G + C,，并具有相等的（+/- 3℃）退火溫度。建議使用軟件來檢測自身互補或發(fā)夾易發(fā)區(qū)域,，并由一些綜合提供商提供服務,。注意，雖然引物的5'末端可能包含未模板序列,，但3'末端必須*匹配,。反應中典型的寡核苷酸濃度為0.1-0.5μM。

3.鎂：鎂是PCR反應的關鍵組成部分,，盡管其濃度可以調節(jié)以促進各種效應,。通常，1.5-2.0mM Mg ²⁺靶向,，但更高的濃度（高達5mM）可用于以保真度為代價刺激反應的產(chǎn)率,。相反的情況也是如此 - 較低的鎂濃度將促進更高保真度的產(chǎn)品，總體擴增產(chǎn)率更低,。注意,，某些反應組分，特別是模板DNA和寡核苷酸,，可能為反應提供螯合劑,，這會降低有效的鎂濃度并使反應餓死。

4. dNTP：通常,，使用100-200μMdNTP的終濃度，盡管更高的濃度可以刺激產(chǎn)量（特別是對于更長的靶標）并且更低的可以提供保真度的增加,。Taq酶DSC 2.0 DNA聚合酶還可以摻入和讀取脫氧尿苷和肌苷,，這兩種類似物在某些應用中使用。

5. Taq DSC 2.0聚合酶：典型的是1單位/50μL反應（20U / mL）,，但可以添加額外的酶以刺激產(chǎn)率,。Taq DSC 2.0 DNA聚合酶以大約1-2000個核苷酸/分鐘擴展DNA模板,，因此建議每個循環(huán)每個kb應提供30-60秒的延伸時間。適當?shù)难由鞙囟确秶鸀?8-72°C,。因為Taq DSC 2.0 DNA聚合酶利用DNA聚合酶對雙鏈DNA段的天然親和力來促進其熱啟動功能,，所以它不需要廣泛的初始變性步驟來激活聚合酶。

典型的50μl反應：
在冰上,，準備以下每種主混合物,，合并，并置于加熱（至94°C）熱循環(huán)儀中：

2x DNA /寡核苷酸主混合物：
1.0μl10mM 
dNTPs1.0μl10μMFrontPrimer 
1.0微升10μM反向引物
1.0微升500納克/微升基因組DNA 
21微升I型水

2X酶/緩沖液預混：
5.0微升10X 的Taq PCR緩沖液（無的dNTP）
0.2微升5單位/微升的Taq DSC 2.0 DNA聚合酶
19.8微升I型水

推薦儲存條件： -20°C

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