世界*實(shí)驗(yàn)材料供應(yīng)商 SGI-DNA正式授權(quán)上海起發(fā)為其中國(guó)代理,， SGI-DNA在一直是行業(yè)的*,一直為廣大科研客戶提供zui為的產(chǎn)品和服務(wù),上海起發(fā)一直秉承為中國(guó)科研客戶帶來的產(chǎn)品,，的服務(wù),，簽約 SGI-DNA就是為了給廣大科研客戶帶來更加完善的產(chǎn)品和服務(wù),您的滿意將是我們zui大的收獲

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SGI-DNA是Synthetic Genomics，Inc（SGI）的全資子公司,，成立于2013年,，總部位于加利福尼亞州La Jolla。

SGI-DNA基于克雷格·文特爾（J.Craig Venter）,，漢密爾·史密斯（Ham Smith）,，克萊德·哈奇森（Clyde Hutchison），丹·吉布森（Dan Gibson）及其團(tuán)隊(duì) 等科學(xué)家的科學(xué)進(jìn)步和突破,，利用*的專有DNA技術(shù)生產(chǎn)復(fù)雜的合成基因和試劑,。SGI-DNA還提供全面的基因組服務(wù)，包括全基因組測(cè)序,，文庫(kù)設(shè)計(jì)和其他生物信息服務(wù),。

SGI-DNA負(fù)責(zé)SGI合成DNA業(yè)務(wù)的所有商業(yè)方面，并專注于與學(xué)術(shù)和商業(yè)研究人員的戰(zhàn)略業(yè)務(wù)關(guān)系,。

XactEdit™ Cas9 Nuclease with NLS

含有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶

使用這種高度純化的酶,，進(jìn)行有針對(duì)性的指導(dǎo)RNA指導(dǎo)的雙鏈DNA切割。帶有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶是一種含有核定位信號(hào)（NLS）的純化的重組化膿性鏈球菌（Streptococcus pyogenes） Cas9蛋白,。當(dāng)與適當(dāng)設(shè)計(jì)的引導(dǎo)RNA（gRNA）復(fù)合時(shí),，XactEdit™Cas9核酸酶介導(dǎo)位點(diǎn)特異性的靶向雙鏈DNA切割。將Cas9：gRNA復(fù)合物（RNP）引入細(xì)胞產(chǎn)生雙鏈DNA斷裂（DSB）,，其已經(jīng)用于多種靶向基因組編輯研究,，例如同源敲入和基因敲除。

XactEdit™Cas9核酸酶可作為試劑盒或作為獨(dú)立的酶使用,，濃度為1 mg / mL或10 mg / mL,，可配制的導(dǎo)向RNA（gRNA）靶向DNA消化。純化至> 90％均一性,，XactEdit™Cas9不顯示非特異性核酸酶活性,。這些性能，以及低內(nèi)毒素水平,，使XactEdit™Cas9成為各種應(yīng)用的理想選擇,。XactEdit™酶可用于體外切割分析，或通過電穿孔或轉(zhuǎn)染引入細(xì)胞以靶向基因組序列,。與載體或基于mRNA的Cas9系統(tǒng)不同,，XactEdit™Cas9 RNP復(fù)合物不需要轉(zhuǎn)錄或翻譯，可以在進(jìn)入細(xì)胞后立即行動(dòng),。

概要

•  高度純化 - 通過反相HPLC和SDS-PAGE純度大于90％
• 高活性的質(zhì)量控制 - 通過體外活性測(cè)定進(jìn)行批量測(cè)試
•  沒有非特異性DNA酶或RNA酶活性
•  低內(nèi)毒素水平 - 通過LAL測(cè)定小于0.01 EU /μg
•  含有核定位信號(hào)（NLS）以有效地靶向細(xì)胞核
•  可用于1 mg / mL和10 mg / mL濃度

具有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶顯示出高水平的體外活性

圖2. 使用不同量的XactEdit™Cas9核酸酶（NLS）和gRNA的體外活性,。為了確定使用的XactEdit,？Cas9核酸酶和gRNA的zui有效量，進(jìn)行體外活性測(cè)定,。在每條泳道中,，將100ng對(duì)應(yīng)于同源框轉(zhuǎn)錄因子Emx1的770bp DNA片段與量的XactEdit TM Cas9蛋白和gRNA一起溫育。XactEdit™Cas9：gRNA復(fù)合物的特異性切割產(chǎn)生兩個(gè)片段（283 bp和487 bp）,。數(shù)據(jù)表明,，XactEdit？Cas9蛋白使用不同量的輸入酶和gRNA有效地和特異性地切割靶位點(diǎn)處的底物,。泳道1中顯示的分子量（MW）標(biāo)記是1kb梯,。

具有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶顯示出高度一致的體內(nèi)核酸酶活性

圖3. 具有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶與其他市售Cas9（NLS）核酸酶相比的體內(nèi)活性,。在體內(nèi)將兩種不同批次的XactEdit TM Cas9核酸酶的核酸酶活性與來自供應(yīng)商T和N的Cas9核酸酶的核酸酶活性進(jìn)行比較,。對(duì)于每個(gè)測(cè)定，使用1μgCas9和200ng體外轉(zhuǎn)錄的指導(dǎo)RNA形成Cas9：gRNA復(fù)合物,， Emx1基因,。通過電穿孔將復(fù)合物引入HEK 293T細(xì)胞。通過突變檢測(cè)分析（圖A,，左）和MiSeq TM分析（圖B,，右）檢查Cas9雙鏈斷裂（DSB）頻率。在圖A中,，由DSB產(chǎn)生的序列在瓊脂糖凝膠電泳中顯示為裂解產(chǎn)物,，表明Cas9誘導(dǎo)的DSB位點(diǎn)。泳道1和8是分子量（MW）標(biāo)記（來自New England Biolabs的Quick-Load 2-Log DNA ladder）,。在圖B中,，靶位點(diǎn)的MiSeq TM測(cè)序的定量分析顯示為轉(zhuǎn)染細(xì)胞裂解的百分比。

高度純化,，以確?？煽浚恢?，具體的核酸酶活性

圖4. XactEdit™Cas9的反相HPLC分析,。使用反相HPLC分析10μgXactEdit TM Cas9,。Zorbax 300SB-C3柱，流動(dòng)相A =在水中的0.1％TFA,，流動(dòng)相B =在乙腈中的0.1％TFA,，在1.0mL / min，40℃,，214nm檢測(cè)下梯度= 5-100％B 30分鐘,。

圖5.還原XactEdit™Cas9的SDS-PAGE,。使用還原性SDS-PAGE分析XactEdit Cas9。4-15％Bio-Rad TGX凝膠,，Bio-Rad Precision Plus蛋白標(biāo)記,，SYPRO-Orange染色。

圖6. XactEdit™Cas9的批次到批次活動(dòng)比較 使用針對(duì)5.5kb目標(biāo)設(shè)計(jì)的三種不同指導(dǎo)RNA（gRNA-1,，gRNA-2和gRNA-2）比較兩種不同批次的XactEdit™Cas9的活性的體外活性測(cè)定,。gRNA-SC是不識(shí)別目標(biāo)DNA的混雜的陰性對(duì)照RNA。XactEdit™Cas9酶的存在或不存在分別由+和 - 表示,。通過瓊脂糖凝膠電泳分析樣品以分離模板DNA（5.5kb,，未切割）和消化產(chǎn)物（可變尺寸）。

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