clemente associates TRIC Cell流程

1,、制備帶有結(jié)合抗HLA-G的納米顆粒。在操作前一天,，用小鼠單克隆抗HLA-G抗體（BD）將磁性納米顆粒與山羊抗小鼠IgG（clemente associates）偶聯(lián),。結(jié)合100μL無菌PBS、10μL抗體（0.5 mg/mL）和10μL納米粒,。在4°C的冷藏室搖桿上攪拌過夜,。第二天，通過首先添加900μL無菌PBS,，然后磁化粒子10分鐘,，去除所有液體,，去除未結(jié)合抗體。

2,、初始宮頸內(nèi)樣本到達ThinPrep溶液,。400 x g的顆粒細(xì)胞持續(xù)5分鐘。將細(xì)胞顆粒重新放入12-13 mL無菌PBS中,，最終體積為14 mL,。

將樣品穿過插入15 mL離心管的250μm組織過濾器，以去除大塊粘液和細(xì)胞團,。

3,、通過離心和在14 mL無菌PBS中重新懸浮細(xì)胞，將宮頸樣品清洗2次,。

最后一次清洗細(xì)胞后,，將樣品重新懸浮在1.4 mL無菌PBS中。向樣品中添加100μL抗HLA-G涂層磁性納米顆粒（制備于#1）以分離滋養(yǎng)層細(xì)胞,。在4°C的冷藏室搖桿上培養(yǎng)過夜,。

隔夜孵育后，將滋養(yǎng)層細(xì)胞在4℃的磁鐵（DynaMagSpin磁鐵,；Life Technologies）上分離5分鐘,。使用磁鐵，在4℃下用1 mL無菌PBS清洗滋養(yǎng)層細(xì)胞3次（在移液前讓納米粒子磁化10分鐘）,。最終移除未結(jié)合的細(xì)胞后,，將捕獲的細(xì)胞在4℃下重新懸浮在100μL無菌PBS中。

6,、取一小份分離的細(xì)胞懸液,，計數(shù)分離的胎兒細(xì)胞，計算回收的胎兒細(xì)胞總數(shù),。使用血細(xì)胞儀對第一次清洗的母細(xì)胞進行計數(shù),。

為了檢查細(xì)胞的純度，用抗-?hCG,。

確定熒光燈數(shù)量?hCG陽性細(xì)胞和總細(xì)胞（DAPI標(biāo)記）,。

派生%?hCG陽性。