genebridges K001說(shuō)明書

Quick & Easy BAC Modification Kit

快速簡(jiǎn)便的BAC修改套件

• ID: K001

特征

• 快速可靠地克隆大DNA分子

• 在選擇的位置進(jìn)行的DNA修飾

• 獨(dú)立于限制網(wǎng)站

• 沒(méi)有尺寸限制

應(yīng)用

• 簡(jiǎn)單的BAC修飾,，如插入選擇標(biāo)記,，刪除帶有選擇標(biāo)記基因的片段，插入功能片段和選擇標(biāo)記基因

• 該試劑盒也可用于細(xì)菌染色體修飾

描述

該試劑盒旨在通過(guò)革命性的Red / ET重組技術(shù)對(duì)BAC進(jìn)行修飾 - 這是一種強(qiáng)大的工具,，可在2周內(nèi)將修飾（如插入和缺失）引入任何類型的BAC,。

紅/ ET重組使用體內(nèi)重組和校對(duì)活動(dòng)來(lái)小化構(gòu)建體中不需要的突變。套件中包含了修改BAC所需的所有必要內(nèi)容以及執(zhí)行控制實(shí)驗(yàn)所需的所有材料,，旨在讓您熟悉這種新技術(shù),。另外，轉(zhuǎn)化任何大腸桿菌的載體提供了用于應(yīng)用Red / ET重組的感受態(tài)菌株的菌株,。pSC101-BAD-gbaAtet帶有四環(huán)素抗性盒,。該盒含有溫度敏感的復(fù)制起點(diǎn)（ori），只能在30°C繁殖 - 在37°C時(shí)質(zhì)粒會(huì)丟失,。這允許在不再需要質(zhì)粒時(shí)簡(jiǎn)單地去除質(zhì)粒,。為了引入突變（即選擇盒，如該試劑盒中包含的新霉素抗性盒）,，首先必須將同源序列引入選擇盒,。這可以通過(guò)簡(jiǎn)單的PCR反應(yīng)來(lái)完成。這些短的同源序列（每個(gè)50nt）可以根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)需要自由選擇,。只需選擇要修飾的位置,，并使用Red / ET重組技術(shù)將選擇盒直接插入所需的核苷酸。然后需要用誘導(dǎo)的Red / ET重組系統(tǒng)在細(xì)菌中電穿孔PCR產(chǎn)物,。在成功進(jìn)行Red / ET重組后,，可以使用常規(guī)DNA微量制備方法回收修飾的DNA。

內(nèi)容

• pSC101-BAD-gbaA（tet）是基于Red / ET表達(dá)質(zhì)粒的pSC101 ori（溫度敏感起源）的衍生物

• 攜帶pSC101-BAD-gbaA（tet）的BAC宿主

• 用于修飾150kb BAC的陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)（攜帶pSC101-BAD-gbaA的宿主中的BAC克隆,，用于在BAC骨架中缺失的新PCR產(chǎn)物,，在宿主中作為陽(yáng)性重組體的BAC-neo克隆）

• 方案，質(zhì)粒描述,，寡核苷酸圖譜和序列

Sequences

Tn5-kan^R/neo^R selection cassette

Tn5-promoter  kan^R/neo^R

TGGACAGCAAGCGAACCGGAATTGCCAGCTGGGGCGCCCTCTGGTAAGGTTGGGA AGCCCTGCAAAGTAAACTGGATGGCTTTCTTGCCGCCAAGGATCTGATGGCGCAG GGGATCAAGATCTGATCAAGAGACAGGATGAGGATCGTTTCGCATGATTGAACAA GATGGATTGCACGCAGGTTCTCCGGCCGCTTGGGTGGAGAGGCTATTCGGCTATG ACTGGGCACAACAGACAATCGGCTGCTCTGATGCCGCCGTGTTCCGGCTGTCAGC GCAGGGGCGCCCGGTTCTTTTTGTCAAGACCGACCTGTCCGGTGCCCTGAATGAA CTGCAGGACGAGGCAGCGCGGCTATCGTGGCTGGCCACGACGGGCGTTCCTTGCG CAGCTGTGCTCGACGTTGTCACTGAAGCGGGAAGGGACTGGCTGCTATTGGGCGA AGTGCCGGGGCAGGATCTCCTGTCATCTCACCTTGCTCCTGCCGAGAAAGTATCC ATCATGGCTGATGCAATGCGGCGGCTGCATACGCTTGATCCGGCTACCTGCCCAT TCGACCACCAAGCGAAACATCGCATCGAGCGAGCACGTACTCGGATGGAAGCCGG TCTTGTCGATCAGGATGATCTGGACGAAGAGCATCAGGGGCTCGCGCCAGCCGAA CTGTTCGCCAGGCTCAAGGCGCGCATGCCCGACGGCGAGGATCTCGTCGTGACCC ATGGCGATGCCTGCTTGCCGAATATCATGGTGGAAAATGGCCGCTTTTCTGGATT CATCGACTGTGGCCGGCTGGGTGTGGCGGACCGCTATCAGGACATAGCGTTGGCT ACCCGTGATATTGCTGAAGAGCTTGGCGGCGAATGGGCTGACCGCTTCCTCGTGC TTTACGGTATCGCCGCTCCCGATTCGCAGCGCATCGCCTTCTATCGCCTTCTTGA

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