advansta K-11054-010說明書

SpectraDye抗體標(biāo)記試劑盒

只需一個簡單步驟即可制作自己的熒光抗體。

• 快速簡便 - 30分鐘內(nèi)一步貼標(biāo)
• Versatile - 標(biāo)記抗體與免疫熒光顯微鏡,，流式細(xì)胞術(shù),，蛋白質(zhì)印跡兼容
• 靈活 - 從6種常用熒光染料中選擇
• 節(jié)省時間和金錢 - 沒有輔助或額外步驟，一旦您標(biāo)記您的主要
• 保存抗體 - 標(biāo)記反應(yīng)只需要10μg抗體

試劑盒包括：
抗體標(biāo)記緩沖液
SpectraDye Dye Solution * 
淬滅溶液
中和緩沖液

足夠的試劑可以標(biāo)記多達(dá)1毫克的抗體
*除了試劑盒K-11060-010

描述

SpectraDye抗體標(biāo)記試劑盒包括足夠的試劑,，可以標(biāo)記多達(dá)1 mg的抗體。SpectraDye染料試劑盒包含抗體標(biāo)記緩沖液,，SpectraDye染料溶液,，淬火溶液和中和緩沖液,。用戶提供的染料套裝不含染料，但含有高質(zhì)量的DMSO,，可用于制備自己的染料溶液,。

什么是SpectraDye抗體標(biāo)記試劑盒有用嗎？

基于免疫熒光的實驗的較低背景：使用二抗可導(dǎo)致高的非特異性結(jié)合和低再現(xiàn)性,。切換到直接標(biāo)記的一抗可以改善您的結(jié)果,。

單色熒光應(yīng)用：直接標(biāo)記抗體可提高重復(fù)性，并允許在各種應(yīng)用中使用相同的抗體來驗證結(jié)果,。

多色熒光應(yīng)用： SpectraDye抗體標(biāo)記試劑盒有6種染料可供選擇,，具有極大的靈活性，而且由于您不需要二抗,，因此您的一抗的種類無關(guān)緊要,。 

標(biāo)簽反應(yīng)涉及什么？

標(biāo)簽反應(yīng)確實快速而簡單,。首先將PBS中的抗體稀釋至1mg / ml,。接下來，將25μl抗體標(biāo)記緩沖液加入100μl抗體溶液中,。通過上下移液*混合,。向反應(yīng)中加入12μl染料溶液并通過移液管混合。在室溫下孵育30分鐘,。其他推薦步驟：向反應(yīng)混合物中加入3μl淬火溶液,，在室溫下孵育5分鐘; 然后，向反應(yīng)混合物中加入8μl中和緩沖液,?？贵w被標(biāo)記并準(zhǔn)備使用。

實驗應(yīng)用：

免疫熒光顯微鏡：在同一載玻片上分析多種抗原時,，減少非特異性結(jié)合并消除物種交叉反應(yīng),。

通過使用高質(zhì)量的單克隆抗體增加多色染色載玻片的特異性。將HeLa細(xì)胞固定在玻璃蓋玻片上,，然后用中性驢血清封閉,。然后用一組高親和力SpectraDye標(biāo)記的小鼠單克隆抗體同時染色細(xì)胞。用SpectraDye-490（品紅色）標(biāo)記抗GAPDH抗體,，用SpectraDye-650（紅色）標(biāo)記抗肌動蛋白抗體,，用SpectraDye-550（綠色）標(biāo)記抗微管蛋白抗體。細(xì)胞核用DAPI（藍(lán)色）染色,。

流式細(xì)胞儀：   使用您自己的熒光標(biāo)記的一抗,，簡化流式細(xì)胞儀檢測，降低可變性，提高數(shù)據(jù)質(zhì)量,。

SpectraDye抗體標(biāo)記試劑盒產(chǎn)生的抗體可與市售的熒光抗體相媲美,。HeLa細(xì)胞在補(bǔ)充有FBS和青霉素/鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。沉淀細(xì)胞并用4％多聚甲醛固定,。將HeLa細(xì)胞重懸于PBS + 0.1％Triton中,，并以0.33μg/μL加入SpectraDye標(biāo)記的抗體。將抗體在環(huán)境溫度下孵育30分鐘,，然后用1X PBS洗滌兩次,。使用LSRFortessa獲取數(shù)據(jù)。黑色填充的直方圖表示抗體染色的細(xì)胞,。黑色襯里,，灰色直方圖表示未染色的控制。

Western Blotting：節(jié)省寶貴的時間,，因為不再需要二抗孵育和洗滌步驟,。

使用SpectraDye標(biāo)記的一抗在單個熒光Western印跡實驗中檢測兩種或更多種蛋白質(zhì)。將轉(zhuǎn)鐵蛋白（500ng /泳道）和GAPDH（500,167,56和19ng /泳道）轉(zhuǎn)移至PVDF膜,，用用SpectraDye-IR800標(biāo)記的兔抗轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體和用其標(biāo)記的小鼠抗GAPDH抗體檢測,。 SpectraDye-IR700。