cytoskeleton AKL95-B說明書

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Cytoskeleton，Inc,。很高興為藥物篩選,，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞骨架研究提供廣泛的試劑盒和產(chǎn)品。我們專注于生產(chǎn)純化蛋白質(zhì)和易于使用的試劑盒,，以研究生物化學(xué)和細(xì)胞過程,。我們的試劑盒可用于少量樣品，用于基礎(chǔ)研究或小屏幕（Biochem Kits™）,，也可用于大屏幕的高通量樣品（CytoDYNAMIX Screens™）,。

除了我們現(xiàn)有的產(chǎn)品,，我們還在產(chǎn)品線中為微管，微管蛋白,，運動蛋白,，小G蛋白效應(yīng)物，GAP,，GEF和其他幾種蛋白提供藥物篩選服務(wù),。

結(jié)合蛋白質(zhì)

· 概述

· 關(guān)于

· CITATIONS

· 常見問題解答

測定所有肌動蛋白結(jié)合蛋白（ABP）以確保其活性與公布的值相當(dāng)。測定因產(chǎn)品而異,，包括F-肌動蛋白切斷測定,，F(xiàn)-肌動蛋白激活的ATP水解和肌動蛋白聚合測定。顯示了測量WASP VCA結(jié)構(gòu)域蛋白在肌動蛋白聚合中的作用（右）,。

Cytoskeleton,，Inc。銷售一系列純化的肌動蛋白結(jié)合蛋白,。所有Cytoskeleton的肌動蛋白結(jié)合蛋白都具有高純度,，并經(jīng)過嚴(yán)格的生物活性測試。細(xì)胞骨架還為肌動蛋白結(jié)合蛋白研究提供肌動蛋白,，抗體和試劑盒,。

由Arp2 / 3和WASP VCA結(jié)構(gòu)域刺激的肌動蛋白聚合。試劑盒BK003用于研究Arp2 / 3（Cat,。＃RP01）和WASP VCA（Cat,。＃VCG03）結(jié)構(gòu)域?qū)拥鞍拙酆?/span>的影響。

肌動蛋白與細(xì)胞中的多種蛋白質(zhì)相互作用
*,，F(xiàn)-和G-肌動蛋白與細(xì)胞中的多種蛋白質(zhì)相互作用（14）??,。目前有超過150種已知的肌動蛋白結(jié)合蛋白（ABP），其占細(xì)胞蛋白的約25％,。ABP在肌動蛋白細(xì)胞骨架上賦予大量功能多樣性,，其涉及諸如肌肉收縮，唇形突破,，細(xì)胞運動,，胞質(zhì)分裂和細(xì)胞質(zhì)流動的過程。研究這些過程如何調(diào)節(jié)肌動蛋白絲功能和動力學(xué)是一個重要且不斷增長的研究領(lǐng)域,。

可以通過使用生物化學(xué),，遺傳學(xué)和免疫學(xué)方法分離和研究肌動蛋白結(jié)合蛋白。因為存在超過50種類型的肌動蛋白結(jié)合蛋白,，所以用于鑒定它們的方法及其功能/活性也是多種多樣的,。肌動蛋白親和柱通常用于親和純化ABP，無論它們是F-或G-肌動蛋白結(jié)合,?？梢酝ㄟ^利用芘肌動蛋白熒光的聚合增強(qiáng)來進(jìn)行顯示潛在ABP影響肌動蛋白動力學(xué)的簡單測定（參見測量肌動蛋白聚合物部分）,。這種性質(zhì)的研究有助于鑒定新的肌動蛋白結(jié)合蛋白。有幾篇值得一讀的關(guān)于識別和量化新肌動蛋白結(jié)合蛋白的可能方法的評論（15,16,17）?

問題1：哪種肌動蛋白結(jié)合蛋白（ABP）可用作F-肌動蛋白結(jié)合對照,？

答案1：肌動蛋白結(jié)合蛋白α-輔肌動蛋白（Cat,。＃AT01）是一種F-肌動蛋白結(jié)合和交聯(lián)蛋白，使其可用作F-肌動蛋白結(jié)合研究的對照,。它的Kd是1μM,，這意味著在該濃度下發(fā)生50％結(jié)合。因此,，我們的目標(biāo)是使用 2μM的α-肌動蛋白作為結(jié)合測定中的陽性對照,。在結(jié)合反應(yīng)中，2μM濃度的α-輔肌動蛋白相當(dāng)于0.23μg/μl,。此外,，α-輔肌動蛋白對pH敏感，其高親和力發(fā)生在pH 7.0,。

問題2：Cytoskeleton的肌球蛋白或重的meromyosin是否具有F-肌動蛋白活力,？

答案2：遺憾的是，我們不會出售運動級肌球蛋白或重肌紅蛋白用于肌動蛋白運動試驗,。我們發(fā)現(xiàn)質(zhì)量控制測試非常難以復(fù)制,，因此我們無法充分確保試劑的質(zhì)量。因此,，肌球蛋白（Cat,。＃MY02和MY03）和重型meromyosin蛋白（Cat。＃MH01）不推薦用于F-肌動蛋白運動測定,。已經(jīng)測試過這些試劑的客戶在運動方面沒有取得很好的成功,，因此我們不建議購買樣品進(jìn)行測試。如果需要運動級肌動蛋白或重型meromyosin,，我們建議遵循原始方案（Kron和Spudich,，1985）并在液氮中冷凍100μl等分試樣以確保穩(wěn)定性。

參考文獻(xiàn)： SJ Kron和JA Spudich,，1985年,。熒光肌動蛋白絲在固定在玻璃表面的肌球蛋白上移動。PNAS,，83,6272-6276。

結(jié)合蛋白質(zhì)系列產(chǎn)品：

PHDG1	Acti-stain 488 phalloidin	ea	cytoskeleton
PHDH1	Acti-stain 555 phalloidin	ea	cytoskeleton
PHDN1	Acti-stain 670 phalloidin	ea	cytoskeleton
BK001	Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin	ea	cytoskeleton
BK003	Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin	ea	cytoskeleton
AKL95	Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AD99	Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle	ea	cytoskeleton
AS99	Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle	ea	cytoskeleton
AKL99	Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AKF99	Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AP05	Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
PHDG2	Acti-stain 488 phalloidin	ea	cytoskeleton
PHDH2	Acti-stain 555 phalloidin	ea	cytoskeleton
PHDN2	Acti-stain 670 phalloidin	ea	cytoskeleton
BK005	Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin	ea	cytoskeleton
BK007	Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin	ea	cytoskeleton
AKL96	Actin protein (>96% pure): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AD100	Actin protein (>100% pure): bovine cardiac muscle	ea	cytoskeleton
AS100	Actin protein (>100% pure): chicken gizzard muscle	ea	cytoskeleton
AKL100	Actin protein (>100% pure): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AKF100	Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AP06	Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
PHDG3	Acti-stain 488 phalloidin	ea	cytoskeleton
PHDH3	Acti-stain 555 phalloidin	ea	cytoskeleton
PHDN3	Acti-stain 670 phalloidin	ea	cytoskeleton
BK009	Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin	ea	cytoskeleton
BK011	Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin	ea	cytoskeleton
AKL97	Actin protein (>97% pure): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AD101	Actin protein (>101% pure): bovine cardiac muscle	ea	cytoskeleton
AS101	Actin protein (>101% pure): chicken gizzard muscle	ea	cytoskeleton

肌動蛋白（純度> 95％）：兔骨骼肌

Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle

1x1毫克（Cat,。＃AKL95-B）

5x1 mg（Cat,。＃AKL95-C）

產(chǎn)品用途包括

· 肌肉肌動蛋白結(jié)合蛋白的鑒定和表征

· 體外肌動蛋白聚合研究

· Western印跡分析的抗體標(biāo)準(zhǔn)

從兔骨骼肌中純化出肌動蛋白材料。 AKL99肌動蛋白純度大于99％,，AKL95純度大于95％,。肌肉肌動蛋白的分子量約為43kDa,。兔肌肉肌動蛋白作為白色凍干粉末提供。凍干的蛋白質(zhì)在4℃下干燥至<10％濕度時保存6個月,。當(dāng)再在蒸餾水中構(gòu)成為10毫克/毫升,，該蛋白質(zhì)是在以下緩沖液：5mM的的Tris-HCl pH 8.0中，0.2毫米氯化鈣₂,，0.2mM的ATP,，5％蔗糖和1％的葡聚糖。

純度
通過在12％聚丙烯酰胺凝膠上掃描Coomassie Blue染色蛋白的光密度測定法測定純度,。AKL99由> 99％純肌肉肌動蛋白組成,，而AKL95純度> 95％（見圖1）。


	圖1：圖1.兔骨骼肌肌動蛋白的純度,。在SDS-PAGE凝膠上運行100μg> 99％純（AKL99）和> 95％純（AKL95）兔骨骼肌肌動蛋白,，并用考馬斯藍(lán)染色。箭頭表示肌動蛋白,，箭頭表示α-肌動蛋白污染物（115kDa）,。純化的肌動蛋白中的微量雜質(zhì)主要是肌動蛋白結(jié)合蛋白，例如α-肌動蛋白和凝溶膠蛋白,。

生物活性
肌肉肌動蛋白的生物活性由其在體外有效聚合成長絲（F-肌動蛋白）的能力和在旋轉(zhuǎn)分析中與未聚合組分分離的能力決定,。嚴(yán)格的質(zhì)量控制確保AKL99產(chǎn)生> 90％的F-肌動蛋白，AKL95在該測定中產(chǎn)生> 80％的F-肌動蛋白,。

問題1：儲存肌動蛋白的*方法是什么,，以確保大的穩(wěn)定性和保質(zhì)期？

答案1： 細(xì)胞骨架提供我們所有的肌動蛋白作為凍干粉末,，以便它們可以在室溫下運輸,。收到后，凍干粉末應(yīng)在4℃下儲存在帶有干燥劑的密封容器中,。重要的是監(jiān)測干燥劑的新鮮度并確保其繼續(xù)吸收水分以保護(hù)凍干的肌動蛋白,。妥善儲存后，凍干肌動蛋白保證自購買之日起6個月內(nèi)保持穩(wěn)定,?；蛘撸拥鞍卓闪⒓匆酝扑]的濃度重新懸浮,，等分,，在液氮中快速冷凍并儲存在-70℃。冷凍的等分試樣可穩(wěn)定6個月,。解凍冷凍等分試樣時,，重要的是在室溫水浴中解凍。

問題2：聚合后儲存F-肌動蛋白的*方法是什么,？

答案2： G-肌動蛋白在4°C下穩(wěn)定2天,，需要二價陽離子,，pH 6.5 - 8.0和ATP穩(wěn)定性。F-肌動蛋白是穩(wěn)定的,，可以在4°C下儲存1-2周,。F-肌動蛋白需要ATP（0.2mM）和Mg2 +（2mM）的穩(wěn)定性，并且在pH6.5和pH8.5以下是不穩(wěn)定的,。F-肌動蛋白對冷凍不穩(wěn)定,。F-肌動蛋白可以轉(zhuǎn)移到各種緩沖液（例如HEPES，磷酸鹽等）而沒有不利影響,。我們建議在4°C下儲存F-肌動蛋白時,，添加抗菌劑，如100μg/ ml氨芐青霉素和10μg/ ml氯霉素,。

Mohammad等,，2012。Flightless I是一種粘附相關(guān)的肌動蛋白加帽蛋白,，可調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移,。FASEB?。doi：10.1096 / fj.11-202051,。

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Engqvist-Goldstein等,，2001,。肌動蛋白結(jié)合蛋白Hip1R在胞吞作用的早期階段與網(wǎng)格蛋白結(jié)合并在體外促進(jìn)網(wǎng)格蛋白裝配。J. Cell Biol,。第154號,，第1209-1223頁。

貨號	品名	規(guī)格	品牌
BK165-S	Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit	(10 assay)	cytoskeleton
BK165	Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit	(30 assay)	cytoskeleton
BK163-S	Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit	(10 assay)	cytoskeleton
BK163	Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit	(30 assay)	cytoskeleton
BK160-S	Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit	(10 assay)	cytoskeleton
BK160	Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit	(30 assay)	cytoskeleton
BK162-S	Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit	(10 assay)	cytoskeleton
BK162	Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit	(30 assay)	cytoskeleton
BK161-S	Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit	(10 assay)	cytoskeleton
BK161	Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit	(30 assay)	cytoskeleton
AAC04-Beads	Acetyl-Lysine Affinity Beads	ea	cytoskeleton
APY03-Beads	Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads	ea	cytoskeleton
ASM11-Beads	SUMOylation 1 Affinity Beads	ea	cytoskeleton
ASM24-Beads	SUMOylation 2/3 Affinity Beads	ea	cytoskeleton
UBA01-Beads	Ubiquitination Affinity Beads	ea	cytoskeleton
CIG02-Beads	Acetyl-Lysine Control Beads	ea	cytoskeleton
CIG03-Beads	SUMO1 IP Control Beads	ea	cytoskeleton
CIG01-Beads	IgG Control Beads	ea	cytoskeleton
CUB02-Beads	Ubiquitination Control Beads	ea	cytoskeleton
BLR01	BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit	ea	cytoskeleton
BLR02	BlastR™ Rapid Filtration Kit	ea	cytoskeleton
AAC02	Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1)	ea	cytoskeleton
AAC03	Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)	ea	cytoskeleton
AAC03-HRP	Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)	ea	cytoskeleton
AAC01	Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20)	ea	cytoskeleton
APY03	Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10)	ea	cytoskeleton
APY03-HRP	Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10)	ea	cytoskeleton
ASM01	SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16)	ea	cytoskeleton
ASM24	SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2)	ea	cytoskeleton
ASM23	SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)	ea	cytoskeleton
ASM23-HRP	SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)	ea	cytoskeleton
AUB01	Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal	ea	cytoskeleton
AUB01-HRP	Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal	ea	cytoskeleton
PHDG1	Acti-stain 488 phalloidin	ea	cytoskeleton
PHDH1	Acti-stain 555 phalloidin	ea	cytoskeleton
PHDN1	Acti-stain 670 phalloidin	ea	cytoskeleton
BK001	Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin	ea	cytoskeleton
BK003	Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin	ea	cytoskeleton
AKL95	Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AD99	Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle	ea	cytoskeleton
AS99	Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle	ea	cytoskeleton
AKL99	Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AKF99	Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AP05	Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
APHR	Actin protein (rhodamine): human platelet	ea	cytoskeleton
AR05	Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AT01	Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
RP01P	Arp2/3 protein complex: porcine brain	ea	cytoskeleton
CS-TFC01	Cardiac Thin Filament Complex (CTFC)	ea	cytoskeleton
CF01	Cofilin 1 protein: human recombinant	ea	cytoskeleton
HPG6	Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant	ea	cytoskeleton
MH01	Heavy meromyosin protein	ea	cytoskeleton
CS-MH03	Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment)	ea	cytoskeleton
CS-MYS03	Myosin - cardiac S1 fragment	ea	cytoskeleton
CS-MYS04	Myosin - skeletal muscle S1 fragment	ea	cytoskeleton
CS-MYS05	Myosin - smooth muscle S1 fragment	ea	cytoskeleton
MY02	Myosin II protein: rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
MY03	Myosin protein: bovine cardiac muscle	ea	cytoskeleton
PR02	Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant	ea	cytoskeleton
PHDR1	Rhodamine Phalloidin	ea	cytoskeleton
CY-SC001	SiR-Actin Kit	ea	cytoskeleton
CY-SC013	SiR700-Actin Kit	ea	cytoskeleton
VCG03	WASP protein VCA domain: GST tagged: human	ea	cytoskeleton

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1：強(qiáng)大的進(jìn)口輻射能力，血清,、抗體、耗材,、大部分限制進(jìn)口品等,。

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5：多年積累良好的信譽,，大部分客戶提供貨到付款服務(wù)?？蛻舭ㄇ迦A、北大,、交大,、復(fù)旦、中山等100多所高校,，ROCHE,，阿斯利康、國藥,、fisher等知藥企,。

6：我們還是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech,；sysy,TriLink BioTechnologies,Inc,；worthington-biochem,zyagen等幾十家國外公司授權(quán)代理,。

7：我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批發(fā),，歡迎合作,。

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