了解實時熒光定量PCR儀的系統(tǒng)組成
閱讀:1770 發(fā)布時間:2020-6-8
普通的基因擴增儀(PCR儀)只能夠定性地分析是否存在目標片段。 但是,,某些需要定量的實驗就必須用到實時熒光定量PCR儀了,。實時熒光定量PCR儀比普通的PCR儀多了熒光信號采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng),,主要是用來定量分析和確定基因轉(zhuǎn)錄水平的,。
實時熒光定量PCR儀主要由兩部分組成,,一個是PCR系統(tǒng),,一個是熒光檢測系統(tǒng),。由于定量PCR必需借助樣本和標準品之間的對比來實現(xiàn)定量的,,對于定量PCR系統(tǒng)來說,,重要的參數(shù)除了傳統(tǒng)PCR的溫控精確性,、升降溫速度等等,,更重要的還在于樣品孔之間的均一性,,以避免微小的差別被指數(shù)級放大,。至于熒光檢測系統(tǒng),,多色多通道檢測是當今的主流趨勢,儀器的激發(fā)通道越多,,儀器適用的熒光素種類越多,,儀器適用范圍就越寬;多通道指可同時檢測一個樣品中的多種熒光,,儀器就可以同時檢測單管內(nèi)多模版或者內(nèi)標+樣品,,通道越多,儀器適用范圍越寬,、性能就更強大,。熒光檢測系統(tǒng)主要包括激發(fā)光源和檢測器,。激發(fā)光源有鹵鎢燈光源、氬離子激光器,、發(fā)光二極管LED光源,前者可配多色濾光鏡實現(xiàn)不同激發(fā)波長,,而單色發(fā)光二極管LED價格低、能耗少,、壽命長,不過因為是單色,需要不同的LED才能更好地實現(xiàn)不同激發(fā)波長。監(jiān)測系統(tǒng)有超低溫CCD成像系統(tǒng)和PMT光電倍增管,,前者可以一次對多點成像,,后者靈敏度高但一次只能掃描一個樣品,,需要通過逐個掃描實現(xiàn)多樣品檢測,,對于大量樣品來說需要較長的時間,。定量PCR儀需要考慮的另外一個因素是軟件設計,,這一點目前較新型號的儀器都有不錯的配套軟件可以滿足常規(guī)使用,。
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